转基因动物在制药业的应用与开发

转基因动物的迅速发展为制药业带来了全新而巨大的变革。本文从转基因动物制药的应用和及其国内外研究情况进行论述,阐明转基因动物将为制药业发展提供良机。     

甘肃省家畜梨形虫和梨形虫病概述

巴贝科(Babesiidae)和泰勒科(Theileriidae)的原虫统称为梨形虫，属顶复门(Apicomplexa)、梨形虫亚纲(Piroplasmasina)。由上述2个科的原虫所引起的疾病统称为梨形虫病。以前的分类将其隶属于孢子虫纲的血孢子虫目，故称其为血孢子虫和血孢子虫病，又称焦虫和焦虫病。梨形虫由蜱传播，有     

羊巴贝斯虫未定种trap基因的克隆表达及反应原性分析

通过克隆trap基因,在原核表达系统中进行表达并纯化,Western blot鉴定TRAP蛋白反应原性,应用生物信息学分析软件分析验证该基因/蛋白的结构。以羊巴贝斯虫未定种新疆株gDNA和cDNA为模板扩增trap基因全长;并构建pET-30a-trap原核表达载体。将构建成功的表达载体转入BL21(DE3)pLysS进行诱导表达;纯化可溶性的rBspTRAP,Western blot分析其反应原性,并应用生物信息学分析软件分析验证该基因/蛋白的结构。结果显示:获得的trap基因全长为2 338bp,开放阅读框大小为1 944bp,具有5个内含子和6个外显子。氨基酸序列分析显示1~26位氨基酸为信号肽序列,45~201位和240~288位氨基酸分别为TRAP蛋白家族的vWA和TSP1结构域。Western blot结果显示羊巴贝斯虫未定种新疆/敦煌株阳性血清可特异性识别rBspTRAP,该重组蛋白与莫氏巴贝斯虫(临潭株、天祝株、河北株、宁县株)阳性血清及尤氏泰勒虫阳性血清无交叉反应。本试验成功克隆trap基因并表达,该基因可以作为免疫学诊断用候选抗原,为以后建立鉴别诊断莫氏巴贝斯虫和羊巴贝斯虫感染的免疫学诊断方法奠定基础。     

江西省高安地区牛泰勒虫病的流行病学调查

本研究用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)结合聚合酶链式反应(PCR)对我国江西省60头肉牛样品(包括血清和血液基因组)进行了牛泰勒虫病的初步调查。结果显示,该省泰勒虫血清阳性率为100%,PCR检测阳性率28.3%。其中,环形泰勒虫(Ta)阳性率为26.7%,瑟氏泰勒虫(Tser)阳性率为15%,中华泰勒虫(Tsin)阳性率为3.3%,环形泰勒虫和瑟氏泰勒虫共同感染率为13.3%,环形泰勒虫和中华泰勒虫共同感染率为3.3%。结果表明,江西省牛泰勒虫病感染较为严重,本研究为该地区牛泰勒虫病的综合防治提供了数据参考。     

绵羊体表脓包病原的分离·鉴定及药敏试验

[目的]对分离自湖北省大悟县的患病山羊体表脓包中的致病菌进行分析和鉴定,以确定脓包中细菌的分子分类学地位及药物敏感性。[方法]通过对分离株16SrRNA基因序列分析,结合细菌菌落形态和细菌生化特性分析进行细菌分离和鉴定,并对已鉴定的菌株进行药物敏感性试验,筛选出脓包细菌敏感性药物。[结果]从脓包分离的细菌分别为葡萄球菌属、大肠埃希氏杆菌属、不动杆菌属以及绿脓杆菌;药物敏感试验表明这些细菌对药物的敏感性不同,其中对头孢类、喹诺酮类、氨基糖苷类以及氯霉素等敏感。[结论]该研究可为该地区该病流行病学的研究与防治药物的研发提供参考。     

微小牛蜱Bm91基因的原核表达

根据GenBank收录的微小牛蜱Bm91基因序列设计一对表达引物,以微小牛蜱幼蜱总RNA反转录合成的cDNA为模板,扩增获得了Bm91基因,其长度为1 908 bp,包含一个大小为1 833 bp的完整开放阅读框,编码611个氨基酸,该蛋白预期分子质量为83 ku。将Bm91基因片段亚克隆到原核表达载体pET-30a,构建重组原核表达载体pET-30a-Bm91,转化BL21宿主菌,经IPTG诱导,发现在0.8 mmol/LIPTG,诱导时间2 h,温度37℃条件下,目的重组蛋白表达量最大,约占蛋白总量的20%。SDS-PAGE检测表明,表达产物为分子质量为83 ku的融合蛋白,与预期大小一致;Western blot分析表明,表达产物能被兔抗微小牛蜱阳性血清所识别。     

非洲猪瘟病毒环介导恒温扩增快速检测技术的建立及应用

本研究基于非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）vp72基因设计引物,建立了能够快速检测非洲猪瘟病毒的环介导恒温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification, LAMP）。将LAMP与OIE参考的PCR检测方法进行比较,并且应用LAMP对非洲猪瘟参考实验室提供的非洲猪瘟病毒17个毒株的基因组以及国内收集的50份猪的基因组、30份蜱的基因组进行检测。结果显示,本研究设计的引物具有良好的特异性和敏感性,所建立的LAMP能够成功扩增非洲猪瘟病毒17个毒株的基因组,而野外收集的猪和蜱的基因组检测均为阴性。因此,本研究所建立的方法能够用于非洲猪瘟的快速诊断以及防控。     

不同年龄雷琼黄牛及其杂交利木赞牛F1代背最长肌肉品质比较研究

雷琼黄牛具有良好的耐湿热、耐粗饲和抗逆性,是我国南方地区优良的肉牛品种,但生长速度慢、体格小,探索其杂交利用技术对提高养殖效益和新品种育成具有重要意义。本试验选取3～5岁健康雷琼黄牛与利雷杂牛(利木赞♂×雷琼黄牛♀)母牛各3头,屠宰后取11～13肋骨间背最长肌进行肉品质评价。结果发现：利雷杂牛和雷琼黄牛肌肉p H1h均大于6.0,p H24h均小于6.5,品种间无显著差异;3～4岁蒸煮损失及3～5岁压力失水率均显著高于同龄利雷杂牛;与雷琼黄牛相比,3～4岁亮度和黄度均显著提高;3岁利雷杂牛宰后24 h肌肉亮度和黄度均显著高于雷琼黄牛;利雷杂牛肌肉剪切力明显低于同年龄的雷琼黄牛,且随年龄增长而变大;利雷杂牛眼肌面积均显著高于同龄雷琼黄牛。本研究结果表明,不同年龄间雷琼黄牛与利雷杂F1代相比,3岁利雷杂F1代肉品质最佳。与雷琼黄牛相比,利雷杂牛眼肌面积增大,肉色鲜艳,肌肉嫩度增加,系水力增大。利用利木赞杂交雷琼黄牛能显著提高肌肉品质,是雷琼黄牛杂交改良的有效手段。     

高寒冷凉区增施钾肥增产效应

在青海东部高寒冷凉农业区进行增施钾肥试验采用单因子设计,试验结果表明,用钾肥比不用钾肥明显增产,氮磷钾肥配合施用效果更好。     

一株白僵菌的分离鉴定及其对微小牛蜱的致病力试验

为了得到用于防控微小牛蜱的高毒力菌株,本试验从野外微小牛蜱饱血雌蜱体表分离出一株白僵菌,通过形态学和分子生物学方法进行了鉴定,确认该分离株为球孢白僵菌.致病力研究表明,当孢子浓度达到108孢子/mL,该菌株对微小牛蜱饱血成蜱的致死率即可达到100%,为微小牛蜱的生物防控试剂的研究及应用奠定了基础.