不同精子处理对应用ICSI—Tr技术生产转基因水牛胚胎效率的影响

本文主要探讨了不同精子处理对应用显微授精介导（intracytoplasmic sperm injection-mediatedtrans-genesis,ICSI-Tr）生产转基因水牛胚胎效率的影响。本试验以p18T—BCN5．2-IFN-1．1pA—EGFP为载体,比较了精子的不同处理方式（NaOH和冻融）、NaOH处理精子不同时间（5min,10min,20min,30min和60minl以及不同外源DNA浓度（5ng／μL,10ng／μL,25ng／μL和50ng／μL）对ICSI-Tr转基因效率的影响。结果显示：NaOH处理组的囊胚EGFP表达率（46．1％）,与冻融精子处理组（47．1％1差异不显著,但发育率显著高于冻融处理精子组（28．3％VS16．7％,P〈0．05）。处理60min组和30min组的分裂率分别为78．9％和77．5％,显著高于20min、10min和5min组的64．0％、60．0％和64．0％（P〈0．05）,其中30min处理组的囊胚EGFP表达率高达44．4％,显著高于其它处理组（P〈0．05）。25ng／μL组和50ng／μL组的早期胚胎EGFP表达效率差异不显著（41．3％VS42．5％）,但显著高于5ng／肚组和10ng／μL组（22．5％和35．5％）,25ng／μL组的囊胚EGFP表达效率显著高于其它组（P〈0．05）。本研究优化了应用ICSI-Tr生产转基因水牛胚胎技术体系,为获得ICSI-Tr转基因水牛奠定了良好的工作基础。     

全麦粉和烟草甲信息素提取物对烟草甲的引诱效果研究

[目的]为烟草甲的行为调控防治和监测提供新的方法。【方法]在实验室内研究全麦粉挥发物和烟草甲信息素提取物对烟草甲成虫的引诱效果。[结果】结果表明,全麦粉挥发物和烟草甲信息素提取物对烟草甲成虫均具有较强的引诱作用,而且二者适当剂量的混合物对烟草甲成虫的引诱作用与商品烟草甲信息素诱芯引诱作用相当。[结论】全麦粉挥发物和烟草甲信息素提取物具有开发为烟草甲引诱剂的巨大潜力。     

控温对储粮害虫防治作用的研究和应用进展

温度是影响害虫生命活动的重要因素,超过其耐受极限的高低温均严重抑制害虫的生长发育,直至死亡。利用高低温防治储粮害虫是一种重要的物理防治方式,具有安全、对环境友好、无污染、易操作等优点。综述了高低温防治害虫的机制、高低温对害虫生理生化指标的影响及其在储粮害虫防治上的应用,以期对促进储粮害虫的综合治理研究和应用有所借鉴。     

水牛OCT4基因5'调控序列的克隆与功能分析

为探讨水牛OCT4基因的表达调控模式,本研究扩增克隆了水牛OCT4基因5'调控序列片段,并设计了-2 571 bp、-2 389 bp、-2 338 bp和-2 191 bp 4个不同长度的调控序列片段,分别构建了EGFP表达报告载体.通过生产转基因猪早期胚胎和转染水牛胎儿成纤维细胞分析了不同长度调控序列片段的转录活性.结果发现,在猪4.5d胚胎中各调控序列均能成功启动下游EGFP表达,但转染水牛胎儿成纤维细胞48 h后均表观察到荧光.QRT-PCR分析显示,-2 571 bp片段在4.5d猪胚胎细胞中的转录活性极显著高于其他调控序列(P＜0.01),-2 389 hp与-2 338 bp之间差异不显著(P＞0.05),二者均极显著高于-2 191 bp(P＜0.01).上述结果表明水牛源OCT4基因5 '调控序列在猪早期胚胎中具有转录活性,且翻译起始位点上游2 191 bp片段足以介导OCT4在多能性细胞中的特异性表达；-2 389～-2 338 bp片段上游的CR4亦参与了猪4.5d胚胎中OCT4基因的转录调控.     

水牛SOX2基因5'调控序列的克隆与功能分析

为探讨水牛SOX2基因的转录调控机制,本试验克隆获得其长2555 bp 的5'调控序列片段,结合生物信息分析设计了-2263、-1816、-1275、-660和-407 bp 5个缺失体,并分别构建其EGFP表达报告载体,通过生产转基因早期胚胎和转染水牛胎儿成纤维细胞分析各缺失体片段的转录活性。结果发现,除-407 bp以外的各缺失体在猪4.5 d早期胚胎细胞中均能成功启动下游EGFP的表达,且随着片段缩短,其转录活性呈极显著递减趋势(P<0.01);而转染水牛成纤维细胞48 h后,除p-407-EGFP以外的各缺失体报告载体转染组均观察到少数细胞发光,转录活性两两之间差异均极显著(P<0.01),转录活性从高到底排布分别为-2263、-660、-1275和-1816 bp。p-407-EGFP载体在胚胎水平和细胞水平均未观察到荧光。以上结果表明,-660~-407 bp是构成水牛SOX2基因表达不可缺失的部分,-2263~-1816 bp中有非多能细胞特异性的增强子元件存在,而-1816~-1275 bp和-1275~-660 bp均含有多能性细胞特异性的增强子元件。     

混凝土工程中常见裂缝问题的预防措施

国家建筑部门一直在严重强调建筑施工过程中混凝土质量事故的发生,但是在实际施工过程中还是存在质量事故经常发生。其中混凝土工程中材料的特性决定了结构较易产生裂缝。从实践中来看施工中混凝土出现裂缝的概率也是很大的,由于裂缝的存在和发展通常会使内部的钢筋等材料产生腐蚀,降低钢筋混凝土材料的承载能力、耐久性及抗渗能力,影响建筑物的外观、使用寿命。混凝土裂缝产生的原因很多,有变形引起的裂缝:如温度变化、收缩、膨胀、不均匀沉陷等原因引起的裂缝;有外载作用引起的裂缝;有养护环境不当和化学作用     

混凝土工程中常见裂缝问题的预防措施

国家建筑部门一直在严重强调建筑施工过程中混凝土质量事故的发生,但是在实际施工过程中还是存在质量事故经常发生.其中混凝土工程中材料的特性决定了结构较易产生裂缝.从实践中来看施工中混凝土出现裂缝的概率也是很大的,由于裂缝的存在和发展通常会使内部的钢筋等材料产生腐蚀,降低钢筋混凝土材料的承载能力、耐久性及抗渗能力,影响建筑物的外观、使用寿命.混凝土裂缝产生的原因很多,有变形引起的裂缝:如温度变化、收缩、膨胀、不均匀沉陷等原因引起的裂缝;有外载作用引起的裂缝;有养护环境不当和化学作用引起的裂缝等等.在实际工程中要区别对待,根据实际情况解决问题. 1.材料选用 (1)水泥:应选用水化热较低的水泥,严禁使用安全性不合格水泥.(2)粗骨料:宜用表面粗糙、质地坚硬的石料;级配良好,孔隙率小,无碱性反应;有害物质及粘土含量不超过规定.(3)细骨料:宜用颗粒较粗、孔隙较小,含泥量较低的中砂.(4)外掺科:宜采用减水剂等外加剂,以改善混凝土工作性能,降低用水量,减少收缩.     

水牛脂多糖结合蛋白基因表达载体构建及其shRNA片段的筛选

试验旨在构建水牛脂多糖结合蛋白(LBP)基因融合蛋白表达载体,探讨其在293细胞中的表达情况;筛选获得可抑制水牛LBP基因表达的shRNA干扰片段。采用RT-PCR方法,以水牛肝脏cDNA为模板,扩增水牛LBP开放阅读框(ORF),将其连接到pMD18-T载体中。序列测定并分析正确后,采用SalⅠ和BamHⅠ进行双酶切,将水牛LBP基因编码区定向克隆至pDsRed-N1载体中,构建其融合蛋白表达载体pDsRed-N1-LBP。设计2个针对LBP靶基因序列的shRNA(774-792、1212-1231),同时设计无关序列1864作为阴性对照。合成好的shRNA序列先退火连接到pUC 57载体上,再亚克隆到慢病毒表达载体pSicoR-GFP中,将重组质粒命名为pSicoR-GFP-shLBP774/1212/1864(N.C),采用PCR和测序方法鉴定阳性克隆。将LBP融合蛋白表达载体和其shRNA慢病毒表达载体经脂质体共转染293细胞,48 h后观测荧光蛋白表达情况。收集共转染细胞样品,采用实时定量PCR(QRT-PCR)检测LBP基因的表达,筛选有效抑制LBP基因表达的shRNA干扰序列。结果表明,成功构建水牛LBP融合蛋白表达载体pDsRed-N1-LBP,并在293细胞中瞬时表达。PCR和测序结果均证实所构建的shRNA慢病毒表达载体pSicoR-GFP-shLBP774/1212/1864(N.C)为阳性克隆。共转染48 h后观测,红色和绿色荧光蛋白均有表达。QRT-PCR检测结果显示,shRNA-774和shRNA-1212对293细胞中LBP基因mRNA的表达均有抑制效果,抑制效率分别为49.53%、29.27%。因此,设计合成的2条shRNA序列能有效抑制水牛LBP基因的表达,这为进一步探讨LBP基因在LPS诱导的革兰氏阴性菌跨膜机制和信号转导中的作用机理研究奠定了基础。