MD病毒抗独特型抗体的研制

制备鸡马立克氏病病毒(MDV)抗独特型抗体(Ab2),探讨Ab2模拟抗原诱导免疫应答的能力.用MDV免疫SPF鸡,分离提纯鸡抗MD-IgG(Ab1),Ab1免疫BALB/C鼠,用鼠脾细胞与SP2/0细胞制备Ab2杂交瘤细胞株,间接ELISA筛选阳性杂交瘤细胞株,经克隆、纯化2×株抗MDV独特型抗体杂交瘤细胞株(6E5,7A12),其中6E5培养上清、腹水ELISA效价分别为4000×、10000×,免疫20 d攻毒,具有抗MDV感染保护.     

Development and characterization of monoclonal antibodies against canine trypsin

Canine cationic trypsin was purified by salting-out, gel filtration and affinity chromatography. Purity was confirmed by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). The molecular weight was ca. 28 kDa by SDS-PAGE.

Thirty hybridomas were obtained which produced mAb to canine cationic trypsin by the cell fusion technique. Twenty-two of these recognized cationic trypsin only, while eight hybridomas recognized both cationic and anionic trypsin. Several of the anti-canine cationic trypsin mAb were purified by salting-out and DEAE ion-change chromatography using ascites fluid of immunized BALB/c mice. The mAb proved to have very high specificity to canine cationic trypsin as shown by immunoblotting and it may be possible to use them to develop clinical assays.     

抗大肠埃希氏菌粘附素单克隆抗体诊断试剂的研制及其现场初步应用

作者从所研制的抗产肠毒素性大肠埃希氏菌(ETEC)粘附素K_(88)、K_(99)、987P和F_(41)单克隆抗体(以下简称单抗)44株中的7株,建立了检测以上粘附素抗原的单抗诊断试剂,并确定了以4单抗和3单抗夹心ELISA为特征的检测大批量临床样品的诊断方法与程序,对1038例自然发生下痢仔猪粪样ETEC粘附素的检测结果表明,本试验所建立的诊断方法与程序,具有敏感、准确、快速和简便的特点。     

Development of Immune Response to Experimental Bovine Trichophyton vervucosum Infection

Abstract— Cell mediated and humoral immune responses to experimental Trichophyton verrucosum infection were assessed by sequential cutaneous biopsies, antibody assessments and microscopic monitoring of fungal presence. Histopathologic examination showed the accrual of lymphocytes and other inflammatory cells in the dermis of infected sites. Immunoperoxidase staining of frozen sections with monoclonal antibody preparations revealed an influx of macrophages, BoCD4+ and B0CD8+ lymphocytes and γδ T cells from the 5th day to the 33rd day of infection. A moderate influx of B cells was observed. Protein G-colloidal gold staining revealed the presence of immunoglobulins in the dermis and superficial epidermal layers. Trichophyton specific serum antibodies appeared between days 33 and 55. Microscopic assessment of infected tissues revealed an increase in T, verrucosum elements (mycelium and ectothrix spores) from days 19 to 55. Fungal elements in infected areas did not decrease until after both humoral and cell mediated elements of the immune response were established. These responses imply a combination of cell mediated and humoral events were associated with T. verrucosum immunity and clearance in the calf. Résumé— Le réponse immunitaire humorale et cellulaire a une infection expérimentale àT. verrucosum a été appréciée par des biospsies cutanées successives, des dosages d'anticorps et la recherche microscopique de champignons. L'examen histopathologique a montré un afflux de lymphocytes et d'autres cellules inflammatoires dane le derme des sites infectés. Les marquages en immunopéroxydase par un anticorps monoclonal de coupes congelées a montré un influx de macrophages, lymphocytes BoCD4+ et BoCD8+ et des cellules T γδ, du 5e au 33e jour de l'infection. Un marquage par une protéine G—or colloidal a révélé d'immunogolglobulines dans le derme et les couches supéerficielles de l'épiderme. Les anticorps spécifiques de Trichophyton sont apparus entre 33 et 55 jours. L'examen microscopique des tissus infectés a révélé une augmentation du nombre d'éléments de T. verrucosum (mycelium et spores ectothrix) du 19e au 55e jours. Les éléments fongiques dans les zones infectées n'ont pas diminué avant que les réponses humorales et cellulaires ne solent établies. Ces résponses impliquent qu'une coopération des réponses humorales et cellulaires étaient associées dans l'immunité et la défense contre T. verrucosum. Zusammenfassung— Die zellvermittelten und humoralen Immunantworten auf die experimentelle Infektion mit T. verrucosum wurden durch eine Serie von Hautbiopsien, Antikörperuntersuchungen und mikroskopischer Untersuchung auf das Vorhandensein von Pilzen ausgewertet. Die histopathologische Untersuchung zeigte eine Ansammlung von Lymphozyten und anderen Entzündungszellen in der Dermis der infizierten Stellen. Die Immunperoxidasefärbung der Gefrierschnitte mit monoklonalen Antikörperzubereitungen zeigte einen Influx von Makrophagen, BoCd4-und BoCD8-Lymphozyten und gamma-delta-T-Zellen vom 5. bis zum 33. Tag der Infektion. Es wurde auch ein mäßiger Influx von B-Zellen beobachtet. Die Protein-G-kolloidale Goldfärbung zeigte die Anwesenheit von Immunglobulinen in der Dermis und den oberflächlichen epidermalen Schichten. Trichophyton-spezifische Serumantikörper traten zwischen Tag 33 und 55 auf. Die mikroskopische Untersuchung infizierter Gewebe zeigte eine Zunahme von T. verrucosum-Bestandteilen (Myzel und exktothrixe Sporen) vom Tag 19 bis 55. Pilzteile in infizierten Bereichen verminderten sich weder, nachdem humorale, noch nachdem zellvermittelte Elemente der Immunantwort auftraten. Diese Reaktionen deuten an, daß eine Kombination von zellvermittelten und humoralen Vorgängen im Zusammenhang mit T. verrucosum-Immumtät und Abheilung beim Kalb vorliegt. Resumen Por medio de biposias cutáneas secuenciales, medida de anticuerpos y exámen microscópico de presencia de hongos, se estudió la respuesta inmunitaria de tipo humoral y celular producida por la infección experimental con T. verrucosum. El exámen histopatológico reveló la presencia de agregación de linfocitos y otras células inflamatorias procedentes de la dermis de los puntos infectados. La tintura por medio de inmunoperoxidasa de las secciones congeladas, con preparaciones monoclonales de anticuerpos, demostró un aflujo de macrófagos BoCD4 + y BoCD8 + linfocitos y linfocitos, Tαδ, desde el quinto hasta el día 33 la infección. También se observó un aflugo moderado de linfocitos B. La tintura aúrica de proteina coloidal G reveló la presencia de inmunoglobulinas en al dermis y capas superficiales de la epidermis. Los anticuerpos específicos para la especie Trichophyton aparecieron entre los días 33 y 55. El exámen microscópico de los tejidos afectados demostró un incremento, de los elementos füngicos T. verrucosum (micelio y esporas exótricas) desde los días 19 al 55. Los elementos fúngicos en áreas infectadas no disminuyeron hasta después del establecimiento de ambos tipos de respuesta inmunitaria, humoral y celular. Estas respuestas implican que la combinación de ciertos fenómenos de inmunidad celular y humoral, están relacionados con la desaparición y la inmunidad de la infección producia por T. verrucosum en el ternero.     

以CP23重组蛋白为抗原建立检测微小隐孢子虫抗体间接ELISA方法的研究

摘要：以在E.coli高效表达的微小隐孢子虫子孢子表面抗原CP23为抗原，以辣根过氧化物酶(HRP)标记的山羊抗鼠IgG为二抗，建立了检测微小隐孢子虫抗体的间接ELISA方法。经检测筛选出最佳反应条件为1μg／孔纯化的E.coli表达的CP23抗原包被酶标板，用10％免血清进行封闭，以正常E.coli裂解上清液稀释待检血清。实验表明应用CP23重组蛋白作为诊断C.parvum抗原具有特异性高、抗原易纯化和成本低等特点。     

用ELISA法观察模型小鼠原发性感染细粒棘球绦虫后特异性抗体的变化规律

分别用较高纯度的细粒棘球绦虫六钩蚴抗原和传统使用的囊液抗原对一次感染和二次感染细粒棘球绦虫六钩蚴的小鼠血清进行ELISA测定，认为寄生于不同部位的包囊刺激机体产生的抗体水平不同．同时检测早期抗体时，六钩蚴抗原比囊液抗原更具有阶段性优越性。小鼠二次感染六钩蚴后六钩蚴抗体水平得到明显加强，并推测认为一次感染产生的六钩蚴抗体可能是具有保护性的抗体。     

Production and characterization of a monoclonal antibody specific to the M serotype of plum pox potyvirus

A monoclonal antibody to an Albanian isolate of plum pox potyvirus (PPV) was obtained (MAbAL), that specifically recognized strain M of this virus. The specificity of MAbAL, assessed by comparative ELISA on 130 PPV isolates of different geographical origin, 22 of which were also tested by comparative IC-PCR, gave consistent and highly reproducible results. MAbAL seems to be elicited by a stable surface determinant that makes it particularly suitable for successful use under a wide range of conditions. MAbAL is an useful addition to the panel of PPV-specific MAbs available to date.     

动物组织中四环素类抗生素残留的ELISA检测研究——土霉素抗体的制备

四环素类抗生素属小分子半抗原物质 ,必须与大分子物质结合才能产生免疫原性。本试验采用重氮化法合成土霉素 牛血清白蛋白 (BSA OTC)及土霉素 鼠血清白蛋白 (RSA OTC)人工抗原 ,用紫外扫描对其进行鉴定。以BSA OTC免疫家兔制备抗血清 ,以RSA OTC为包被抗原 ,采用双向免疫扩散法和ELISA方法对抗血清进行鉴定。结果表明用重氮化法合成的人工抗原对四环素类药物有特异的抗原抗体反应 ,抗血清效价达 1 2 8× 1 0 5,完全能够满足四环素类药物残留的ELISA检测要求     

Evaluation of two commercial PRRSV antibody ELISA kits with samples of known status and singleton reactors

Two commercial PRRSV ELISA kits (IDEXX and Bionote) were evaluated for their sensitivity and specificity using 476 PRRS-positive serum samples collected from 7 animal challenge experiments and 1,000 PRRS-negative sera. Both ELISA kits exhibited 100% sensitivity with sera collected 14 to 42 days post-infection, and the results from the kits were highly correlated (R²=0.9207). The specificity of IDEXX or Bionote kit was 99.9% or 99.7%, respectively. In addition, the Bionote ELISA kit was used to examine 100 sera that were determined to be falsely positive either by IDEXX 2XR or 3XR ELISA, and only 7 of these samples were found to be positive. These results indicate that both ELISA kits exhibited similar levels of sensitivity and specificity and would complement one another for the verification of false-positive samples.