辣椒上烟草轻型绿花叶病毒的鉴定

 辣椒源自南美洲，属于茄科辣椒属（Capsicum L.），为重要经济作物。病毒病是影响辣椒生产的主要病害，侵染辣椒的病毒有40余种［1］，烟草轻型绿花叶病毒（Tobacco mild green mosaic virus, TMGMV）是近年来在辣椒上发生和危害报道较多的病毒之一。TMGMV是McKinney［2］于1935年在烟草属植物（Nicotiana gluanca）上首次发现的，为烟草花叶病毒属（Tobamovirus）成员。除辣椒外，番茄［3］、凤仙花、蓝眼菊和矮牵牛也是TMGMV的自然寄主。     

台湾甜椒种子中辣椒轻斑驳病毒检测及其致病型鉴定

利用双抗体夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和基因序列分析法对一批台湾进境的辣椒种子进行病毒检测及致病型鉴定,同时使用特征序列扩增区域(SCAR)标记引物利用PCR方法对该辣椒品种进行L抗性基因检测。DAS-ELISA及RT-PCR结果表明,从该批种子中检测到辣椒轻斑驳病毒(Peppe rmild mottle virus,PM MoV)。PCR产物测序分析表明,该序列为PM MoV的外壳蛋白(CP)基因,与已报道的PM MoV序列同源性为92.4%～99.8%。CP蛋白氨基酸序列分析表明,该分离物(命名为TW分离物)属于PM MoV的P1,2,3致病型。抗性基因检测表明,该辣椒品种携带有L3抗性基因。TW分离物能够系统侵染该辣椒品种,意味着该分离物已经克服L3基因介导的抗性。本研究报道的PM MoV的P1,2,3致病型在中国大陆尚属首次,这对于抗病辣椒品种的选育具有重要的指导意义。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒西瓜、甜瓜种子的带毒率和传毒率

[目的]加强种子带毒检测,防止黄瓜绿斑驳花叶病毒 (Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)通过种子传播而导致该病害的扩散和流行.[方法]以感染CGMMV的西瓜、甜瓜病株收获的种子为材料,应用DAS-ELISA检测感染CGMMV的种子带毒率和传毒率.[结果]250粒西瓜种子全部为阳性,带毒率达100%;623株西瓜幼苗14株为阳性,传毒率为2.25%.130粒甜瓜种子122粒为阳性,带毒率达93.85%;2 050株甜瓜幼苗58株为阳性,传毒率为2.83%.灵敏度检测种子带毒量在感染种子研磨样体积与健康种子研磨样体积为1/1 000时仍检测是阳性;叶片带毒量在病叶研磨样体积与健康叶研磨样体积为1/10 000时仍检测是阳性.[结论]感染CGMMV西瓜、甜瓜种子带毒率高而传毒率相对较低,说明CGMMV主要以种子表面带毒为主.灵敏度检测表明DAS-ELISA能进行大批量的种子检测.     

藜草花叶病毒外壳蛋白基因的克隆与RT-PCR检测

 The nucleotide sequence of coat protein (cp)gene of Sowbane mosaic virus (SoMV)was determined. The cp gene of SoMV consists of 726 nucleotides and encodes a putative protein of 241 amino acid re-sidues. Sequence comparison showed that SoMV was most closely related to Rubus chlorotic mottle virus compared to other sobemoviruses. A primer pair was designed for the detection of SoMV based upon the determined cp nucleotide sequence. An expected fragment with 510 bp could be obtained from SoMV, while no specific band was observed from the healthy control. The result showed that the RT-PCR assay with the primer pair was suitable for the specific detection of SoMV.     

黄瓜绿斑驳花叶病毒低风险参照物质的研制

采用RT-PCR方法扩增黄瓜绿斑驳花叶病毒的外壳蛋白基因与3,非编码区,并将其构建到马铃薯X病毒(PVX)载体中.重组质粒经线性化及体外转录后接种烟草,获得含有病毒外壳蛋白基因的感病植株.感病组织可用于分子检测的质控,也可作为毒源来繁殖阳性参照物质.基于PVX载体制备的参照物质可降低检疫性病毒的生物安全风险,尤其对稳定性强、可造成严重经济损失的高风险病毒的检疫更具实用价值.     

蚕豆染色病毒CPS基因的序列测定及RT-PCR检测方法的建立

 The nucleotide sequence of small coat protein (CPS) gene of Broad bean stain virus (BBSV) was determined and compared with other comoviruses. The CPS gene of BBSV consisted of 687 nucleotides and encodes a putative protein of 228 amino acid residues. The CPS sequence of BBSV and those of other comoviruses shared identities of 36.5%-58.9% and 35.2%-70.3% at the nucleotide and amino acid levels, respectively. The RT-PCR method specific for BBSV detection was developed based on the determined CPS sequence. The RT-PCR assay presented here allows, for the first time, rapid and specific detection of BBSV.     

漳州琯溪蜜柚果实黑斑病菌的分子鉴定

2008年从漳州采集到疑似由柑橘球座菌(Guignardia citricarpaKiely)引起的黑斑病症状的溪琯蜜柚(Citrus grandis(Linn.)Osbeck cv.guanxi-miyou)果实。使用柑橘球座菌(G.citricarpa)特异引物对该果实上的病斑进行PCR检测及序列分析。PCR检测结果表明从溪琯蜜柚果实病斑上扩增到约490bp的条带。序列分析结果表明,与已知的亚洲柑橘叶点霉(Phyllosticta citriasiana)、G.citricarpa和G.mangif-erae的相应序列同源性分别为99.8%、98.2%和94.0%。该序列含有部分的内转录间隔区1(ITS1)、5.8S核糖体RNA基因(5.8S rRNA)和部分的内转录间隔区2(ITS2)序列。结果表明,引起溪琯蜜柚果实病害的病原菌并不是G.citricarpa,而是一种新描述的病原菌——亚洲柑橘叶点霉(Phyllosticta citriasianaWulan-dari,Crous&Gruyter),该病原菌引起的病害称为柑橘褐斑病。     

进境加拿大豌豆中豌豆细菌性疫病菌的检测

 利用MT选择性培养基从进境加拿大豌豆样品上分离到一株细菌分离物(编号1314),对该分离物进行PCR检测、16S和23S rRNA序列扩增、多位点序列分析、Biolog测定、烟草过敏性反应和致病性测试。豌豆细菌性疫病菌(Pseudomonas syringae pv. pisi, Ppi)特异引物AN7F/AN7R扩增分离物1314和Ppi菌株ATCC 11043得到预期272 bp的条带,二者的PCR产物序列一致,与GenBank中Ppi (X97405)的序列相似性为99.57%。分离物1314的部分16S rRNA、23S rRNA序列以及16S-23S序列均与Ppi菌株ATCC 11043一致。选择gap1、gltA、gyrB和ropD 4个看家基因进行多位点序列分析,系统发育树显示分离物1314与Ppi菌株聚在同一组内。Biolog鉴定结果表明:分离物1314为Ppi,PROB值为0.898,SIM为0.72。该分离物人工接种豌豆茎秆能引起水渍状症斑,接种烟草叶片产生过敏性反应。基于上述试验结果,将分离物1314鉴定为豌豆细菌性疫病菌。     

大豆制品转基因成分检测和定量标识分析

分别以大豆凝集素(Lectin)和5-莽草酸-3磷酸合成酶(CP4-EPSPS)为内源和目标基因,对28种大豆制品进行实时荧光PCR检测.检测结果表明,4种大豆制品的CP4-EPSPS扩增结果为阳性,含有转基因大豆成分.转基因成分的定量检测在贸易和可操作性方面要优于定性检测.