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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是影响世界养猪业的重要病原,为了解析该病毒N蛋白抗原表位,本研究制备获得纯化的重组N蛋白,经过BALB/c小鼠免疫、细胞融合、间接ELISA方法筛选和Western blot鉴定,获得了7株稳定分泌抗PRRSV N蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,细胞培养上清液抗体效价为1∶800~1∶25 600,其中8F1、5E2、2B1、12E1的重链类型为IgG1,4F1、2H2、5A2的重链类型为IgG2b,轻链类型都为κ型。间接免疫荧光试验显示7株单克隆抗体均与PRRSV感染细胞产生反应,可识别3种不同的B细胞线性表位,分别位于47~57 aa、57~67 aa及67~77 aa区域,其中57~67 aa为新发现的抗原表位。本研究结果为PRRSV诊断试剂盒的开发和流行病学调查提供了有用工具。 相似文献
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为了构建荷包猪SLA-3-HB01基因四聚体前体链原核表达载体,并获得SLA-3-HB01表达蛋白,试验以SLA-3-HB01/pMD18-T为模板进行PCR扩增四聚体前体链SLA-3-HB01-BSP,并克隆至pMD19-T载体中,经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切筛选阳性克隆并测序,目的基因连接至表达载体pET-21a(+),转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测目的蛋白大小及表达情况,提取包涵体并进行检测。结果显示,PCR成功扩增得到SLA-3-HB01-BSP,大小为896bp左右。酶切鉴定证实,目的基因成功克隆至pMD19-T载体中,插入片段大小为876bp,阳性克隆经测序后所获序列与原序列一致,并在3′端带有BSP标签序列。酶切鉴定进一步证实成功构建SLA-3-HB01-BSP/pET-21a(+)重组表达载体,经转化及诱导表达,SDS-PAGE检测显示目的蛋白分子质量在33.5ku左右。包涵体蛋白分子质量约33.5ku,与菌体中目的蛋白大小一致,经凝胶成像系统UVP扫描分析,包涵体蛋白纯度接近于90%,符合进行相关结构和功能研究的要求。本研究成功构建了荷包猪SLA-3-HB01基因四聚体前体链的pET-21a(+)重组表达系统,并获得了一定纯度的包涵体蛋白。 相似文献
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<正>1猪圆环病毒病流行现状目前,我国圆环病毒病感染的猪场较多,圆环病毒病流行越来越广泛,甚至育肥猪早期也常有感染。流行引起的主要原因有四个,一是,圆环病毒抵抗力强,一般消毒剂无效。此病毒对醇、氯、碘、苯酚等有机消毒剂具有抵抗力,但能够被碱性消毒剂(氢氧化钠)氧化剂(次氯酸钠)和季铵盐化合物灭活。二是,PCV2基因变异。三是传播 相似文献
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随着农村城镇化进程的加快,经济总量快速增长,村镇基础设施建设大规模展开,居民生活水平明显上升。但是长期以来,我国在推进城镇化的过程中,在提高社会生产力的同时,也使广大农村地区不得不承受着环境恶化、资源枯竭的沉重代价。本文从土地生态系统与土地经济系统角度分析了城镇化进程中土地生态问题的成因及具体的危害表现,并提出了相应的对策。 相似文献
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本研究对我国华东地区猪生殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)分离株S1主要结构蛋白基因(ORF5~7)进行了PCR扩增和DNA测序分析。结果表明,长度为1520bpDNA序列含有3个阅读框ORFs,即ORF5、ORF6和ORF7,ORF5和ORF6及ORF6和ORF7间有部分碱基重叠,且与欧洲型和美洲型PRRSV相似。ORFs推导的氨基酸序列与美国VR2332和欧洲LV毒株同源性分析为99%~100%和59%~78%。ORFs预测的蛋白质分子量、等电点、糖基化位点、亲水性分布图及跨膜螺旋区与VR2332毒株相似。 相似文献