猪链球菌2型四川分离株毒力基因的检测及其序列分析

根据猪链球菌2型的MRP、EPF和SLY基因设计合成了四对引物,对我们分离鉴定的2005四川分离株进行毒力因子检测,并对阳性产物测序比较。结果以分离株为模板,获得了与预期结果一致的867bp(MRP)、572bp(EF)的2个片段,以及SLY的长度为1502bp目的片段(外引物)和1443bp的目的片段(内引物)。说明分离株SSsc0501为MRP+EF+SLY+,属于具有3种主要毒力因子的强毒株。经对PCR阳性产物测序及序列分析,结果其与P1/7株的核苷酸序列完全一致,与1933株的同源性达99.7%,仅在128位、217位、744位、1380位、1386位的5个核苷酸发生突变。在氨基酸水平上SSsc0501株与1933株的同源性达99.6%,有2个氨基酸发生替代。     

鉴别H5亚型两种分支禽流感病毒双重实时荧光RT-PCR方法的建立及应用

为准确区分H5亚型禽流感病毒2.3.2.1分支和2.3.4.4分支的毒株,通过对GenBank和GISAID数据库中发表的以及本实验室保存的H5亚型禽流感病毒HA基因序列进行比对,设计1对特异性引物和2条探针,建立了区分H5亚型禽流感病毒不同分支毒株的实时荧光RT-PCR方法,并对该方法的反应体系和反应参数进行了优化,同时开展了特异性和敏感性试验,以及临床应用检测。结果显示:该方法具有良好的特异性,与其他亚型禽流感病毒及常见禽病病毒无交叉反应;对H5亚型禽流感病毒2.3.2.1分支和2.3.4.4分支毒株的检测灵敏度分别为495.0 copies/μL和22.3 copies/μL;100份临床家禽拭子禽流感病毒检测结果与常规RT-PCR和病毒分离检测结果一致,符合率为100%。结果表明,该方法特异、敏感、准确、耗时少,同时还可区分不同分支,可应用于H5亚型禽流感病毒的准确、快速检测。     

微流控芯片技术在微生物检测中的应用

微流控芯片是一项以芯片为基础,结合化学、物理学、生物学等多学科形成的技术平台,能够在一个芯片上实现样品制备、反应、分离、检测等流程,具有高通量、高效率和易操作的特点。随着材料科学和纳米技术的发展,该项技术得到迅速发展并应用于化学分析、微生物检测等,尤其是在微生物检测和分析方面发挥着重要作用,并逐步产生了商品化的微流控芯片。微流控芯片因具有小型化、节约试剂、速度快、集成化程度高等优点,适用于处理突发公共卫生事件,但目前在动物疫病检测中的应用还很少见。本文对微流控芯片的技术原理、结构及其在微生物检测中的应用进行综述,以期为动物疫病的高通量检测提供借鉴。     

鸡副粘病毒病防制的探讨

新城疫病毒是禽副粘病毒Ⅰ型唯一的成员 ,在许多教科书及研究论文中均认为水禽有甚强的抵抗力 ,不引起感染发病。但鹅副粘病毒病的发生已被江苏省的王永坤和广东省的辛朝安两位教授所发现。鹅副粘病毒病的出现大大增加了新城疫防制的难度。１禽副粘病毒病流行概况自１９２６年在印度尼西亚的巴塔维亚和英国的新城发现并分离到新城疫病毒 ,该病至今还在全世界流行发生。在７０多年中全世界新城疫病毒曾发生几次大流行。第一次大流行从１９２６年至６０年代初期 ,在３０余年中从印度尼西亚和英国传播到世界各国 ,造成养鸡业的严重损失 ;第二次…     

我国新出现的禽副黏病毒14型基因组特性

为了解我国新出现的禽副黏病毒14型（APMV-14）的基因组特性,对2022年从我国家禽中新分离到的2株APMV-14毒株进行了基因组测序和序列分析。结果显示：两株毒株基因组长度均为15 444 nt,结构均为3''-N-P-M-F-HN-L-5'',3''前导序列和5''尾随序列长度分别为55和277 nt,各基因间隔序列长度不等（2~36 nt）;2株毒株F蛋白裂解位点均为99REGR↓L103,具有低致病性禽副黏病毒分子特征;2株毒株HN蛋白长度均为607 aa,明显长于2011年日本分离株APMV14/duck/Japan/11OG0352/2011（580 aa）。同源性分析显示,我国分离的2株不同宿主来源的APMV-14毒株基因组核苷酸同源性为99.5%,与APMV-14代表株11OG0352同源性最高（91.0%）,与其余禽副黏病毒同源性仅为45.0%~52.3%;遗传进化分析显示,2株APMV-14毒株与日本APMV-14分离株（11OG0352）位于同一分支。综上所述,本研究中的2株来源于不同宿主（鸡和鸭）的APMV-14毒株基因组序列高度同源,说明APMV-14已具备水禽—陆禽的跨种传播能力。本研究为APMV-14生物学特性等相关研究奠定了基础。     

新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

为满足新城疫病毒高通量快速检测的需要,针对新城疫病毒M基因序列,通过基因比对分析保守区域,经同源性分析后,设计合成多条引物和探针并对其筛选,建立了一种能够快速检测新城疫病毒的实时荧光RTPCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性进行了评估。结果显示,该方法检测耗时短、特异性好,检测下限达10~(-4) ng/μL。利用该方法,对480份临床采集的各类家禽咽拭子样品进行检测,共检测出25份阳性,与常规RT-PCR检测方法结果一致,κ值为1(P 0.001)。结果表明,该方法快速、准确,可用于新城疫病毒的快速检测。     

我国台湾地区H5亚型禽流感病毒遗传进化分析

2019年以来,我国台湾地区多次暴发H5亚型禽流感疫情,病原包括H5N2、H5N5、H7N7等亚型禽流感病毒。为了解台湾地区流行的H5亚型禽流感病毒的分子流行特点,下载GenBank Influenza Virus Database和GISAID中公布的台湾地区所有H5亚型禽流感病毒HA序列,对近年来公开报道的台湾地区流行的H5亚型禽流感病毒进行遗传进化分析,并与大陆地区流行的H5亚型禽流感病毒进行比较。结果显示:台湾地区同时存在欧亚谱系和美洲谱系两个分支的H5亚型禽流感病毒流行,而大陆地区流行的H5亚型病毒都是欧亚谱系。欧亚谱系中,台湾地区流行的主要是第2.3.4.4a分支病毒,而大陆地区流行的主要是2.3.4.4d分支病毒,两个地区流行的H5病毒谱系并不完全一致。由于台湾地区的禽流感生态系统与大陆地区南方相似,因此台湾地区流行的美洲谱系H5亚型禽流感病毒有通过野鸟传播传入大陆地区的潜在风险,应提高警惕,加强禽流感调查监测,严厉查处非法走私禽类及其产品的活动。本研究为我国H5亚型禽流感防控提供了信息支持。     

从鸡和水离分离到的新城疫病毒在细胞受体特异上的差异

Toshihiro等人通过与不同动物种类红细胞的凝集试验，比较了从多种禽类体内（包括鸡和野生水禽）分离到的新城疫病毒受体的特异性的差异。所有从野生水禽分离到的毒株均可凝集马的红细胞，然而鸡源的分离株却不能凝集马的红细胞。其原因在于新城疫病毒的受体特性取决于病毒分离株来自禽的种类。     

一株基因Ⅶ型新城疫病毒的分离及分子鉴定

从一起新城疫暴发的病例中分离出1株新城疫病毒（NDV），命名为铜山分离株（TS）。运用RT-PCR技术，克隆了该分离株F基因的重要功能片段（约0.5kb)，并进行了序列测定。序列分析表明，TS分离株在F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为^112-R-R-Q-K-R-F^117，与NDV强毒株特征相符，且具有101外的K（赖氨酸）和121处V（缬氨酸）2个特征性氨基酸，与基因Ⅶ型NDV的特性完全相符。     

宁夏某猪场猪流行性腹泻紧急流行病学调查

2017年5月10日,宁夏回族自治区动物疾病预防控制中心接到青铜峡市某规模化猪场发生大规模腹泻的报告。经流行病学调查和实验室检测,确定猪流行性腹泻病毒是导致该猪群发生大规模腹泻的主要原因,生物安全管理水平不高、运输车辆或人员进场管理不严是疫病传入的主要风险因素;场内管理不严是疫情扩散的原因。按照调查建立的病因假设,采取了针对性防控措施,包括对猪场的入场清洗消毒设施等进行升级改造,加强饲养管理等。半年内该场未再发生大规模猪腹泻疫情。