泥蚶能量代谢相关的同工酶的分析

利用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了泥蚶（Tegillarca granosa）能量代谢相关的10种同工酶。酯酶和α-淀粉酶是同能量吸收有关的酶，主要分布于消化腺里。苹果酸脱氢酶、苹果酸酶、异柠檬酸脱氢酶、琥珀酸脱氢酶、醇脱氢酶、乳酸脱氢酶、6-磷酸葡萄糖脱氢酶和三磷酸腺苷激酶是与能量代谢相关的酶。泥蚶的能量供应有3种途径：有氧呼吸、无氧酵解和磷酸戊糖途径。从泥蚶体内含有很高活性的6-磷酸葡萄糖脱氢酶可知，磷酸戊糖途径是泥蚶糖代谢的主要途径，NADP为供能体。同其它贝类相比，泥蚶的三磷酸腺苷激酶的活性很低，这与它们的埋栖生活不活跃运动的习性是一致的。     

泥蚶的营养与药用价值

对泥蚶营养成分和泥蚶的药用价值（泥蚶提取物一海生素,泥蚶多肽的抗肿瘤作用,泥蚶不同组织的抗氧化与抗菌作用等）研究进展进行了综述,以期为泥蚶的进一步开发利用提供思路。     

泥蚶促熟技术

将泥蚶放在对虾池中蓄养，其性成熟比放养在自然海区的提前3个月，此法提早并延长了泥蚶的繁殖期，是提高泥蚶苗种产量和经济效益的重要手段之一。     

温度和pH值对乐清养殖泥蚶蛋白酶的影响

应用分光光度计比色法测定了pH值和温度对乐清养殖泥蚶蛋白酶活性的影响。结果表明：乐清养殖泥蚶蛋白酶的最适pH值为2.6和5．8，最适温度为40℃。     

不同温度条件下氨氮对泥蚶的急性毒性影响

在不同的温度条件下,采用实验生态学方法,研究了氨氮对不同年龄阶段泥蚶的急性毒性试验。经双因子方差分析表明：氨氮浓度、温度以及氨氮浓度和温度的相互作用均极显著地影响二龄和三龄泥蚶96 h的成活率。在24℃、28℃、32℃时,总氨氮对二龄泥蚶的96 h LC50分别为348.40、312.99、219.06 mg/L,SC分别为34.84、31.30、21.91 mg/L;总氨氮对三龄泥蚶的96 h LC50分别为681.25、443.20、285.84 mg/L,SC分别为68.13、44.32、28.58 mg/L。     

盐度胁迫对泥蚶能量代谢的影响

在水温(26.4±0.79)℃、盐度11、14.5、18、21.5、25和28.5下,将壳长27~28mm泥蚶饲养在流水系统中24h,每一盐度梯度设置3个平行和3个空白对照,以研究盐度对泥蚶摄食、代谢、碳收支及能量代谢的影响。试验结果显示,随着盐度的升高,泥蚶的滤水率、摄食率、吸收率和O∶N均先升后降,而耗氧率与排氨率先降后升,在盐度18~21.5时显著达到极值(P0.05),但盐度对泥蚶的耗氧率、排氨率和O∶N影响不显著(P0.05)。泥蚶代谢所需要的能量主要由脂肪和碳水化合物提供,盐度18~21.5为泥蚶的适宜盐度范围,此时的能量代谢方程分别为:100C=26.12F+30.75R+5.78U+37.35P;100C=25.06F+32.03R+5.15U+37.76P。     

泥蚶与凡纳滨对虾混养比例和密度的研究

为优化泥蚶(Tegillarca granosa)与凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)混合养殖体系,利用围隔法研究了泥蚶与凡纳滨对虾的适宜混养比例及泥蚶的适宜养殖密度。比例优化试验中,设置泥蚶密度分别为750、1 150和2 250 kg/hm2,虾苗密度均为1.7×105ind/hm2,泥蚶与对虾的个数比分别为1.84(A组)、2.75(B组)和5.50(C组)。在泥蚶和对虾的优化比例(4:1)下,设计泥蚶密度梯度,分别为50 ind/m2(L组)、75 ind/m2(M组)和100 ind/m2(H组)。结果显示,B组水体氨氮浓度显著低于A组(P0.05),而A组硝酸盐氮浓度显著低于B组(P0.05),其它水化学指标不存在显著差异;B组对虾产量显著高于A组(P0.05),各处理组的收益率均存在显著差异(P0.05),依次为B组A组C组。泥蚶密度试验中,M组泥蚶的规格、存活率和日均生长速率均高于L和H组,水化学指标无显著差异。研究表明,混合收益最佳的条件是:泥蚶和凡纳滨对虾的个数比为4∶1,泥蚶的养殖密度为75 ind/m2。     

The effects of sperm–egg ratios on polyspermy in the blood clam,Tegillarca granosa

Polyspermy in Tegillarca granosa, which leads to failure or abnormal development of early embryos, appears to be directly related to varying sperm–egg ratios. We investigated the correlation between sperm–egg ratios and conditions of embryonic development by setting six strict sperm–egg ratios and subsequently scoring fertilization rate, abnormal rate, rates of trochophore and D‐shaped larvae. When sperm–egg ratios rose from 2 × 10²:1 to 1 × 10³:1, D‐shaped larvae rate dropped significantly from 78.8 ± 13.3% to 47.8 ± 14.9% (analysis of variance, P< 0.05), and to 3.6 ± 2.8% in the 2 × 10⁴:1 group. Using fluorescence microscope observation, polyspermy rates rose from 2.6 ± 0.8% to 72.9 ± 4.8% with increases in sperm–egg ratios. Sperm–egg ratios were therefore correlated with polyspermy rate, which seriously affected larval survival. Under the premise of higher fertilization rate, the sperm–egg ratios of ≤2 × 10²:1 appeared to be more beneficial for embryonic development of T. granosa.     

4种海洋贝类对海水中铜(Cu)的富集能力

为研究4种海洋贝类(泥蚶、菲律宾蛤仔、缢蛏、单齿螺)对海水中铜(Cu)的富集效应。设置Cu浓度分别为0.015、0.020、0.025、0.035、0.065和0.115 mg/L 6个试验组,采用半静水法进行泥蚶、菲律宾蛤仔、缢蛏、单齿螺对海水中Cu的富集试验,分别在0、1、3、5、10、15、20、25、30 d取出部分贝类用微波消解—原子吸收光谱法测定Cu含量。结果表明:4种贝类均对Cu表现出了一定的富集效应,单壳类对Cu的富集效应明显大于双壳类。水体中Cu浓度达到0.035 mg/L时,泥蚶和单齿螺对Cu的富集效应明显。水体中Cu浓度达到0.025 mg/L时,菲律宾蛤仔和缢蛏对Cu富集明显。贝类体内Cu含量总体上随水体中Cu含量增加而增加,但当水体中Cu浓度在某个浓度点时,贝类体内的Cu含量反而有个低点。这一低点对于泥蚶为0.025 mg/L、对于菲律宾蛤仔和单齿螺为0.035 mg/L,缢蛏并不明显。贝类体内Cu含量总体上随富集时间的增加而增加。在3～5 d时,贝类体内Cu含量明显降低,在5～10 d后Cu含量又继续增加。同时,实验还进一步探讨了贝类对重金属的富集机制,比较了不同贝类对重金的富集能力。     

泥蚶金属硫蛋白的鉴定、原核重组表达及其组织细胞分布

采用RT-PCR方法扩增、克隆和鉴定了泥蚶(Tegillarca granosa)的金属硫蛋白(Metallothionein,MT)基因(TgMT)的开放阅读框(ORF)。基于金属硫蛋白氨基酸序列构建的系统进化树表明,泥蚶和魁蚶(Scapharca broughtonii)的亲缘关系最近。利用ORF序列,构建原核重组表达质粒。重组质粒经PCR、酶切鉴定及测序验证后转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),经IPTG诱导,表达重组蛋白,重组蛋白的分子量约为28.3 kD。可溶性分析表明重组蛋白主要以可溶性形式存在。用His-tag柱亲和纯化重组蛋白,并利用重组蛋白制备了兔抗血清。Real-time PCR和Western blot实验表明,金属硫蛋白在泥蚶的各个组织中都有表达,并且在消化腺中的表达量最高。采用激光共聚焦显微镜,对泥蚶的消化腺进行免疫组化定位分析,发现泥蚶的MT主要存在于消化腺腺管上皮细胞的胞质中。泥蚶MT的克隆和表达研究为进一步研究该蛋白在环境监测中的作用、探讨细胞解毒的分子生物学机制奠定了基础。