酵母菌属间杂交融合子筛选及其特性研究

通过对酿酒酵母(糖蜜酒精生产菌种)和耐热的马克斯克鲁维酵母原生质体融合,筛选到一株产酒率、耐热性状较两亲株有所提高的融合子R36,并测定了R36最适生长温度、生长曲线、致死温度等生理特性,以及耐酒精浓度、耐糖浓度等发酵性能。     

苹果酒酵母融合子W1发酵工艺参数的优化研究

该文利用所构建的苹果酒的模糊综合评判模型，以评判结果为目标，采用响应界面法研究了苹果酒发酵的规律，建立了优质苹果酒发酵的二次多项式数学模型，同时验证了模型的有效性，并考察了接种量、初始pH值和发酵温度对苹果酒品质的影响，优化出最佳发酵工艺参数为接种量5.33%、初始pH值3.37、发酵温度22.14℃。     

担子菌原生质体融合子的免疫学鉴定

TritonX一100提取香菇单核体L52~(-adc)“和金针菇单核体F_(v23)的菌体壁抗原,分别注射兔子制备抗血清。同样方法制备L52~(-adc)“和F_(v23)原生质体融合子F_(02),F_(03)的菌体壁抗原,琼脂糖双向扩散显示融合子F_(02)、F_(03)的菌体壁抗原能与所制备的亲本抗血清发生特异性沉淀反应。表明两个融合亲本的菌体壁抗原基因在融合子中得到表达。从而也进一步证实融合子确为两亲本的杂合子。     

多环芳烃降解菌的细胞融合及降解性能研究

以菲降解菌--鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sp.)GY2B和芘降解菌--假单胞菌(Sphingomonas sp.)GP3A为研究对象, 对两株菌进行融合前的抗药性标记筛选, 融合后的菌株通过形态学及分子生物学进行分析鉴定, 并测定其对菲和芘的降解效果。结果表明, 筛选出GY2B的遗传标记为哌拉西林抗性(80 μg·mL^-1),GP3A的遗传标记为头孢他啶抗性(80 μg·mL^-1)或红霉素抗性(100~150 μg·mL^-1).通过菲和芘的初步降解实验筛选出一株融合菌株F14, 通过平板菌落形态、扫描电镜(SEM)及PCR-RFLP分析鉴定F14是不同于亲本的菌株, 是GY2B 和GP3A 的融合子。融合菌株F14既可以降解菲又可以降解芘, 对初始浓度为100 mg·L^-1的菲和芘的降解率分别为99%(24 h)和18%(10 d),降解能力和降解效果明显高于其亲本。     

酿酒酵母和糖化酵母核倍性融合株的生长与生理特性研究

出发菌株是通过原生质体融合而获得的酿酒酵母（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）菌株ＨＵ－ＴＹ－１Ａ与糖化酵母（Ｓ．ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ）菌株５２０６－１Ｂ的不同核倍性融合株．经对其生长速率、生物量、耐渗性、耐酒精能力以及发酵力等的测定,表明均不同于原双亲株ＨＵ－ＴＹ－１Ａ和５２０６－１Ｂ;同时发现两株性状优异的四倍体菌株：４ＡＢ２－６０和４ＢＡ１－３．在３０℃培养时,其生长速率和生物量略高于亲株或与之相当,４０℃时明显高于双亲株,耐高渗、耐酒精能力高于５２０６－１Ｂ,与ＨＵ－ＴＹ－１Ａ相当;３０℃淀粉发酵与５２０６－１Ｂ接近,４０℃时则优于５２０６－１Ｂ;３０℃葡萄糖发酵,４ＢＡ１－３低于５２０６－１Ｂ,高于ＨＵ－ＴＹ－１Ａ,４ＡＢ２－６０则优于双亲株,４０℃时,４ＡＢ２－６０和４ＢＡ１－３均优于双亲株．同时我们还发现不同倍性的同株融合株之间存在一定的基因表达剂量效应．     

康宁木霉和白腐真菌原生质体融合子生物学特性的研究

为考察康宁木霉3.2774(Trichoderma.koningii 3.2774)和白腐真菌5.776(Phanerochaete chrysosporium 5.776)原生质体融合子生物学特性,采用同工酶聚丙烯凝胶电泳、插片培养、拮抗试验和生长曲线的测定,对康宁木霉和白腐真菌的融合子进行鉴定,结果表明:融合子酯酶同工酶电泳有不同于亲本的新酶带出现,融合子菌落与亲本之间存在拮抗,菌丝颜色不同,菌株生长速度慢于亲本菌株,这些生理生化性状上与亲本存在明显的差异,是一株融合双亲性状的新菌株。     

木霉融合子Tpf-2的定殖及其对番茄防御酶系的影响

利用qPCR检测木霉融合子Tpf-2在番茄根际土中的定殖,并采用生理生化法测定Tpf-2对番茄叶片中相关防御酶活性的影响。结果表明,在整个番茄生育期内(0~150d),Tpf-2均可在番茄根际土中定殖,相对定殖数量随时间的延长呈下降趋势,同时接种木霉和瓜果腐霉处理组中Tpf-2相对定殖数量高于同期无病原菌处理组。不同处理组番茄叶片中的超氧化物歧化酶SOD、过氧化物酶POD及过氧化氢酶CAT的活性不同,同时接种木霉和瓜果腐霉处理组中上述3种酶活性增加显著,与只接种瓜果腐霉处理组间存在极显著性差异(P0.01)。综上可见,木霉融合子Tpf-2的厚垣孢子定殖周期长,定殖后可诱导番茄叶片中相关防御酶活性的提高,本研究为揭示其生防机理及菌株应用提供了科学依据。     

香菇原生质体融合菌株培养条件的优化

对融合子Ｆ２的培养条件进行了正交试验,着重对温度、培养基ｐＨ,碳源种类和氮源浓度进行了优化。结果表明,３５℃,ｐＨ６．０,可溶性淀粉、２％（ＮＨ４）２ＳＯ４为其最适培养条件。其最适ｐＨ与两个亲本的基本相近,其最适生长温度接近虎皮－０１亲本的生长温度,这为融合子能在较高温度下生长和出菇提供了条件。     

酿酒酵母与糖化酵母的核倍性融合株的构建

在探讨原生质体制备、融合及再生条件的基础上，采用聚乙二醇（ＰＥＧ）对耐高温的酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＨＵ－ＴＹ－１Ａ菌株和淀粉发酵力最强的糖化酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｄｉ－ａｓｔａｔｉｃｕｓ）５２０６－１Ｂ菌株进行种间或同株间的原生质体融合，获得了数株ＨＵ－ＴＹ－１Ａ和５２０６－１Ｂ的同株以及种间融合株，融合率为（１．３～９．０）×１０￣（－６）．通过测定融合株的细胞体积大小、ＤＮＡ含量、遗传稳定性和营养要求等表明：融合株细胞体积和ＤＮＡ含量约为两亲株之和；种间融会株具有双亲株的遗传特性；融合株的倍性为２ｎ，３ｎ，４ｎ及５ｎ。     

生物质炭固定化融合菌株F14方法的研究及其对芘的去除

F14是一株用原生质体融合技术构建的能够降解多环芳烃(PAHs)的融合菌株,利用生物质炭固定化F14制备固定化微生物小球来提高该菌株对芘的去除能力。实验在确定聚乙烯醇(PVA)和海藻酸钠(SA)最佳组合比例的基础上,研究了不同温度下(300、500℃和700℃)制备的生物质炭形成的固定化小球的性能以及对芘的去除效果。结果表明:制备的固定化小球的直径约为3mm,对固定化小球成球效果、传质性能和机械性能的分析表明,载体PVA和SA的最佳组合比例为8%和1%;对不同温度下制备的生物质炭的固定化小球的传质性能和扫描电镜图进行分析,表明700℃制备的生物质炭的固定化小球性能较好。与游离菌相比,固定化小球对芘的去除能力更高且速率更快,对初始浓度为50 mg·L~(-1)的芘10 d内去除率高达94.91%,比游离菌对芘的去除率高了近58%,同时固定化小球可以重复使用高达9次。