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1.
兔抗2,4-D多克隆抗体的制备   总被引:7,自引:0,他引:7  
采用水溶性碳化二亚胺法(EDC),将2,4-D与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)共价偶联,分别合成免疫原2,4-D-BSA和包被原2,4-D-OVA,经紫外分光光度计扫描鉴定。用合成的免疫抗原免疫新西兰大白兔,并用合成的包被原进行ELISA试验对抗血清进行定性定量测定,结果表明,获得的抗血清效价达1.6×105。用所制备的抗血清建立间接竞争ELISA方法。优化了ELISA的工作条件,方阵测定确定了包被抗原最佳浓度(5μg/mL),抗血清最佳稀释度(1∶50 000),并建立了ELISA标准工作曲线。工作曲线表明在50~2 000ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系,该法检测底限为50 ng/mL。  相似文献
2.
抗异丙隆多克隆抗体的研制   总被引:5,自引:1,他引:4       下载免费PDF全文
 【目的】为了建立测定脲类除草剂异丙隆残留的免疫分析方法(ELISA),对制备高效价抗异丙隆多克隆抗体的方法进行了研究。【方法】以对异丙基苯基异氰酸酯、N-甲基吡咯环酮和N-甲基己内酰胺为反应原料,经两步化学反应合成了两种异丙隆半抗原:1-(3-丙基羧基)-3-(4-异丙基苯基)-1-甲基脲(HAPTEN 4C)和1-(5-戊基羧基)-3-(4-异丙基苯基)-1-甲基脲(HAPTEN 6C)。通过活性酯法将半抗原与载体蛋白(BSA、OVA)偶联制备了两种异丙隆的人工抗原HAPTEN 6C-BSA和HAPTEN 4C-OVA。利用免疫抗原HAPTEN 6C-BSA免疫新西兰大白兔获得了高效价的异丙隆的多克隆抗体。建立了以HAPTEN 4C-OVA为包被原的间接竞争ELISA方法。【结果】合成的半抗原经薄层色谱、IR、1HNMR确证;人工抗原HAPTEN 6C-BSA和HAPTEN 4C-OVA的结合比分别为46﹕1和36﹕1。抗血清的最高效价为1.6105。经优化确定的间接竞争ELISA分析方法中包被抗原的浓度为0.1 g•ml-1,抗血清的工作稀释倍数为1.0×105。根据异丙隆的标准抑制曲线,异丙隆对免疫反应的的IC50值为0.07 g•ml-1。抗体对氯溴隆、绿谷隆、特丁塞隆等6种取代脲类除草剂的交叉反应率都小于0.1%。【结论】异丙隆是小分子,本身没有免疫活性,也没有与载体蛋白偶联的活性基团。高效价、高特异性抗体的制备是利用免疫学方法进行异丙隆残留分析的最关键因素。本研究合成的两种异丙隆的相似物具有不同长度碳链的羧基,并且使异丙基和苯基充分暴露,具备了异丙隆半抗原的特点。将半抗原偶联到载体蛋白上获得的人工抗原经免疫兔子后获得了高效价、高特异性的抗异丙隆抗体。  相似文献
3.
通过对比试验研究了蛋白提取液、提取时间、还原剂DTT、封闭液、包被物与抗体浓度等对小麦胚乳贮藏蛋白多克隆抗体的影响,建立了适宜于小麦胚乳醇溶蛋白(G liad in)和低分子量谷蛋白亚基(Low molecu lar we ight glute-n in subun it,LMW-GS)多克隆抗体的间接酶联免疫吸附测定法(ELISA)。  相似文献
4.
甲拌磷人工抗原的合成及多克隆抗体制备   总被引:2,自引:2,他引:0  
以五硫化二磷与无水乙醇为原料,首先制得硫化物中间体,再添加甲醛和2-巯基乙醇进行反应,得到甲拌磷半抗原.在DMAP作为催化剂的条件下,甲拌磷半抗原与丁二酸酐反应,得到甲拌磷半抗原的衍生物.通过碳二亚胺法将甲拌磷半抗原衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)共价偶联,得到免疫抗原和包被抗原.用免疫抗原免疫兔子获得了高效价的多克隆抗体,抗血清效价达到了1∶50 000.通过试验确立甲拌磷标准曲线,检测限为6.383μg/L,检测线性范围为6.383~10 000μg/L.  相似文献
5.
泉古菌Sulfolobus islandicus中PCNA有3个同源类似蛋白,本研究选取PCNA1作为研究对象,为获得可溶性表达的PCNA1蛋白,制备多克隆抗体,深入了解PCNA1基因的功能,将PCNA1基因片段克隆到组氨酸标签融合的表达载体pET30a中,利用IPTG诱导,金属螯合亲和层析进行纯化分析表明,融合蛋白大部分可溶。紫外分光光度法测定纯化蛋白的纯度可达90%以上,浓度约为2 mg/mL。免疫家兔制备多克隆抗体,ELISA检测抗血清效价可达1∶10 000以上,Western印迹检测证明抗体特异性良好。  相似文献
6.
磺胺母核抗原合成及多克隆抗体的制备   总被引:1,自引:1,他引:0  
制备磺胺类药物母核结构的半抗原(H),通过免疫家兔得到多克隆抗体,为制备针对多种磺胺类药物的单抗和磺胺药检测免疫胶体金试纸条研制奠定基础。以对乙酰氨基苯磺酰氯(ASC)和对氨基苯甲酸甲酯(PA-BA)合成磺胺母核的半抗原(H);以牛血清白蛋白(BSA)、卵清蛋白(OVA)为载体,采用混合酸酐法,合成了免疫原H-BSA和包被原H-OVA通过紫外光谱定性证明偶联物偶联成功与否,以H-BSA免疫家兔,制备多克隆抗体,ELISA法对其特异性及效价进行检测。成功合成了磺胺母核人工抗原即免疫原H-BSA和包被原H-OVA,二者的蛋白浓度分别为8.46 mg/mL和10.53 mg/mL,结合比分别为13∶1和9∶1;制备的多克隆抗体特异性良好,血清效价为1∶256 000。  相似文献
7.
应用RT-PCR技术得到鸡IL-18成熟蛋白基因(chicken mature interleukin-18),将克隆片段与原核表达载体pET28a+连接,构建了重组表达载体pET28a+-ChMIL18,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,获得重组表达菌株。经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析后,用含有融合蛋白的聚丙烯酰胺凝胶电泳颗粒免疫家兔,制备兔抗鸡IL-18多克隆抗体,Western-Blot检测抗体效价和特异性。结果表明,鸡IL-18在BL21中得到了表达,相对分子质量约为23kD,获得了具有较高效价的特异性多克隆抗体。为进一步研究鸡IL-18成熟蛋白的生物学活性和作用机制奠定了基础。  相似文献
8.
杀虫剂西维因特异性多克隆抗体的制备及鉴定   总被引:1,自引:1,他引:1  
采用室内实验方法,合成了保留有西维因分子结构特性的半抗原———6-(1-萘氧基甲酰胺)-己酸,将其与BSA偶联后免疫两只兔,获得了特异性的西维因多克隆抗体。对抗体进行纯化及鉴定,在优化条件下,用间接酶联免疫吸附分析(ELISA)法检测了西维因的浓度,西维因的最低检测限达14ng·mL-1。  相似文献
9.
球孢白僵菌HsbA蛋白的原核表达及免疫定位   总被引:1,自引:1,他引:0       下载免费PDF全文
【目的】明确虫生真菌球孢白僵菌(Beauveria bassiana)疏水表面结合蛋白HsbA(hydrophobic surface binding protein A)的致病过程。【方法】对HsbA进行克隆、亚克隆和原核表达,根据纯化后的蛋白制备多克隆抗体并进行抗原性分析,利用免疫电镜对HsbA蛋白进行定位观察。【结果】原核表达系统成功诱导了白僵菌的HsbA融合蛋白,制备多克隆抗体经Western杂交分析表明,该多抗能特异性识别目的蛋白。免疫电镜结果显示,HsbA蛋白在孢子和菌丝中呈随机分布。正常生长状态下,菌丝中的HsbA蛋白数量要明显多于孢子中被标记的数目,此外,孢子在侵染状态和正常生长状态下的HsbA蛋白数量也有显著差异,侵染状态下孢子的HsbA蛋白表达量更高,但菌丝在这2种状态下均呈现高表达。感染虫体中HsbA蛋白被标记的部位集中在体壁。【结论】原核表达实现了HsbA蛋白的高效表达,且制备的多克隆抗体具有较好的免疫原性。此外,免疫定位表明HsbA蛋白与菌丝的生长有关,并在白僵菌致病过程中参与了吸附作用,其作用部位位于昆虫体壁。  相似文献
10.
精喹禾灵酶联免疫吸咐分析(ELISA)研究   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
 【目的】制备精喹禾灵的特异性抗体并建立精喹禾灵的间接竞争ELISA测定方法。【方法】精喹禾灵在碱性条件下水解合成了半抗原精喹禾灵酸,并与载体蛋白BSA和OVA偶联,分别合成了免疫抗原和包被抗原,偶联比分别为29.23和7.87。将Hapten-BSA免疫兔子获得多克隆抗体。【结果】抗血清的效价为200 000。经酶联免疫吸附反应分析(ELISA)测定,精喹禾灵的抑制中浓度(IC50)为0.03495 μg•ml-1,最低检测浓度(IC10)为0.002 μg•ml-1,检测范围为0.002~0.5 μg•ml-1。其与结构相似的物质几乎没有交叉反应,表明该方法具有很强的特异性,且在水样中的添加回收率为89.02%~108.88%。【结论】成功获得精喹禾灵特异性抗体并建立了水样中精喹禾灵农药残留的ELISA测定方法。  相似文献
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