密闭法生物合成小口径细菌纤维素管

[目的]采用间歇式密闭培养法培养木醋杆菌,探讨该方法合成小口径细菌纤维素管的可行性并对管进行表征研究。[方法]以椰子水为培养基、硅胶管为渗氧载体,在密闭罐中培养木醋杆菌,以合成小口径细菌纤维素管,之后测定产物的湿态含水率,孔隙率,比较热干燥与冷冻干燥2种干燥条件的差异,并通过扫描电镜(SEM)观察培养产物的形貌。[结果]密闭式间歇培养法能生物合成小口径细菌纤维素管;通过不同干燥条件的比较发现,相比于热干燥,冷冻干燥更适合于管的储存及后续工作;通过扫描电镜观察合成的管壁及横截面结构,发现该管壁处有较致密的网孔结构,且管断面有明显的层状结构。[结论]小口径细菌纤维素管可通过间歇式密闭法合成,且管的管壁有纳米级孔径,提示其有作为分离膜的潜力。     

海南原鸡PDCD10的克隆、表达及其蛋白的生物信息学分析

通过克隆、表达海南原鸡程序性细胞死亡分子10(Programmed cell death10,PDCD10)基因,对其蛋白进行生物信息学分析。采用RT-PCR方法克隆得到海南原鸡PDCD10基因CDS区,将扩增产物与原核表达载体pET42a连接,构建pET42a-PDCD10重组质粒,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot分析;运用生物信息学软件对所获得基因的核苷酸序列进行分析,并预测其编码蛋白的理化性质及二级结构等。克隆获得了PDCD10639bp的CDS区核苷酸序列,融合蛋白分子量约为57ku,生物信息学分析发现,PDCD10CDS区包括1个639bp的开放读码框,编码212个氨基酸。该蛋白不含信号肽,无跨膜区,二级结构中存在大量α-螺旋。研究结果为进一步开展海南原鸡PDCD10的功能研究奠定了坚实的基础。     

MTT法在木醋杆菌活力检测中的应用

[目的]采用MTT法测定木醋杆菌静置培养时的活力,旨在探索一种快速检测木醋杆菌生长及繁殖的方法。[方法]以木醋杆菌为研究对象,探讨MTT法用于细菌计数的可行性及测量细菌数量的范围,并研究反应时间、MTT的用量、离心力等试验条件对MTT法的测定效果的影响。[结果]木醋杆菌活菌数在3.90×105～1.25×107cfu/ml范围内测出的OD570值与细菌浓度呈良好的正相关,且MTT法最优的试验条件是离心力7 000 g、孵育时间4 h,MTT添加量30μl,测量前用DMSO溶解。[结论]MTT法可快速、方便的检测木醋杆菌活力。     

芥子中甲代烯丙基异硫氰酸酯对k562细胞的抑制与诱导

从海南十字花科植物芥菜种子中提取异硫氰酸酯类化学成分甲代烯丙基异硫氰酸酯（MITC）,并将其作用于k562细胞,用MTT比色法测定增殖抑制效果,应用瑞式姬姆萨、4＇,6-二脒基-2-苯基吲哚（DA-PI）、罗丹明123染色观察细胞形态.结果表明,MITC作用k562细胞呈现一定的量效关系,MITC体积分数为120 μmol·L-1,作用时间为96 h时,抑制率达到最高,为（87.5±1.4）％.MITC作用k562细胞24,48,72,96,120 h的半数抑制体积分数（IC50）分别为250.007,100.584,39.030,54.701,88.719 μmol·L^-1.MITC处理的K562细胞出现凋亡形态特征：细胞皱缩,细胞核固缩,细胞核向内凹陷,线粒体电势下降.根据细胞形态变化初步判断MITC诱导k562细胞凋亡.     

聚赖氨酸接枝淀粉共聚物的制备及其作为基因载体的研究

以还原胺化反应制得PLL-S共聚物,并通过红外光谱以及核磁共振对其进行了结构表征,采用凝胶渗透色谱法检测了PLL-S的相对分子质量,激光粒度分析仪检测了其电位,琼脂糖凝胶电泳法研究了其结合DNA的能力及抗DNaseⅠ的能力,MTT法分析了PLL修饰前后的细胞毒性,并研究了其在293T细胞中转染质粒DNA的能力。结果表明：制备的PLL-S共聚物接枝率为2.8%,数均相对分子质量为60629,电位为23.7mV,达到细胞毒性评价等级0级和1级,材料是合格的,可结合DNA且能保护DNA免受DNaseⅠ的破坏,在293T细胞中的转染效率达到了（48±3.2）%。经对PLL-S的性能分析可以判断：该共聚物可作为基因载体在生物医学方面予以应用。     

双氧水脱色对油茶粕蛋白结构和功能特性的影响

为了除去油茶粕蛋白的色素,添加体积分数为4%的双氧水在40℃下作用蛋白提取液1h可取得较好的脱色效果,但双氧水脱色对油茶粕蛋白结构和功能的影响需要进一步研究。本文通过测定变性温度、表面疏水性和巯基的含量,分析红外光谱、X射线衍射峰、微观形貌等研究脱色前后油茶粕蛋白结构和功能的变化。结果显示:双氧水脱色使油茶粕蛋白的表面疏水性上升,巯基含量下降,二硫键含量基本不变;通过红外光谱分析,双氧水脱色减弱了油茶粕蛋白化学键强度,但没有影响油茶粕蛋白基本骨架,微观结构基本相似,油茶粕蛋白的X射线衍射峰的位置和强度基本一致,热变性温度升高,双氧水没有改变油茶粕蛋白的等电点,但油茶粕蛋白的溶解度、乳化性、乳化稳定性、起泡能力和泡沫稳定性均下降,持油性和持水性上升。本研究结果表明双氧水脱色未明显改变油茶粕蛋白的结构,但其功能性质受到一定影响。     

产碱假单胞菌产精氨酸脱亚胺酶的发酵条件优化

对产碱假单胞菌产精氨酸脱亚胺酶的发酵条件进行了优化,结果表明,产碱假单胞菌产ADI的最佳发酵条件为:10 g·L-1蔗糖为碳源,6 g·L-1蛋白胨为氮源,10 g·L-1精氨酸诱导物,4%的接种量和30%的装液量,发酵温度29℃,发酵时间24 h,摇床转速为150 r·min-1,发酵液的初始p H8.5。在此条件下,产碱假单胞菌产ADI的酶活最高。     

靶向bcr/abl融合基因的RNAi对慢性粒细胞白血病K562增殖活性的影响

构建含bcr/abl RNAi慢病毒重组质粒载体并包装病毒,转染K562细胞,通过Real-time PCR及Western blotting验证干扰效应。采用CCK-8法、软琼脂细胞集落形成实验检测RNAi对K562细胞的增殖影响作用。结果表明,慢病毒介导bcr/abl基因RNAi明显下调K562细胞中bcr/abl mRNA及P210bcr/abl融合蛋白,显著抑制了K562细胞的增殖,这说明靶向bcr/abl融合基因的RNAi有望成为治疗慢性粒细胞白血病的有效方法。