拟态弧菌感染黄颡鱼的动态病理损伤及病原分布研究

以1.0×106CFU·m L~(-1)拟态弧菌(Vibrio mimicus)浸浴感染黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco),于第0、第4、第8、第16、第24、第36、第48、第60、第72小时剖杀取样,研究病理损伤及病原菌的体内动态分布。结果显示,皮肤肌肉、鳃、肠道出现病变最早,其中皮肤肌肉损伤最严重。第16小时表皮变性、坏死,鳃上皮肿胀,肠绒毛水肿;第24~第48小时表皮坏死、脱落,真皮严重出血,肌纤维变性、坏死,鳃出血,上皮局部坏死,肠上皮变性与灶性坏死;第48~第72小时皮肤肌肉坏死更严重,形成溃疡灶,鳃灶性坏死。肾、肝、脾与心36 h后相继出现不同程度的淤血、出血,变性和灶性坏死。q PCR检测发现,第4小时即在鳃、肠、皮肤肌肉检出病菌,细菌含量分别为1.3×102CFU·mg~(-1)、2.6×102CFU·mg~(-1)、4.7×102CFU·mg~(-1);鳃与皮肤肌肉中菌量随时间延长而增加,第72小时皮肤肌肉中菌量达到4.5×107CFU·mg~(-1);第24小时后相继在肾、肝、脾、心检出病菌,菌量介于1.9×10~4.7×102CFU·mg~(-1)之间。结果表明皮肤、鳃和肠道是病菌的入侵位点,并在体内多组织、器官分布。     

RNA干扰对大鲵蛙病毒主要功能基因表达及其增殖的影响

采用q PCR与病毒滴度测定观察RNA干扰(RNA interference,RNAi)对大鲵蛙病毒(Chinese giant salamander ranavirus,CGSRV)主要衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)、甲基转移酶(methyltransferases,MTases)、DNA多聚酶(DNA polymerase)基因表达与病毒增殖的影响。结果表明,小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)能推迟鲤鱼上皮瘤细胞(epithelioma papillosum cyprini,EPC)出现病变,且病变程度也较对照组轻。在各功能基因表达量上,NC-FAM对照组与阴性对照组差异不显著(P0.05);而干扰组的干扰率极显著高于阴性对照组,其中siR-DP-1组siRNA对MCP基因的干扰率为79%,极显著高于其余组(P0.01);siR-MT-1、siR-MT-2组siRNA对MTases基因的干扰率为77%,极显著高于其余组(P0.01);siR-DP-1组siRNA对DNA polymerase基因的干扰率为79%,极显著高于其余组(P0.01)。干扰实验组病毒滴度与NC-FAM对照组和阴性对照组相比也有不同程度的降低。阴性对照组lg TCID50为8.362,NC-FAM对照组lg TCID50为7.848,siR-MCP、siR-MT、siR-DP实验组最低lg TCID50分别为5.764、5.317、5.362。证实RNAi能够抑制CGSRV主要功能基因的表达并影响病毒的复制。     

鮰爱德华菌外膜微孔蛋白ompN1、ompN2和ompN3基因生物信息学分析及截段基因的原核表达与其抗原性检测

根据GenBank中鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)外膜微孔蛋白N(outer membrane porin protein,OMP)基因序列(NC_012779.2)设计引物,以鮰爱德华菌Ms12基因组DNA为模板,经PCR扩增后克隆至pMD19-T载体,将阳性克隆菌送公司测序。测序结果通过生物信息学软件对ompN1、ompN2和ompN3序列的氨基酸序列相对分子质量、分子式、信号肽、跨膜区、亲/疏水性、B细胞表位进行预测,并构建系统发育树;根据去信号肽的B细胞表位相对集中区域设计特异性引物,经PCR扩增后,将截段序列克隆至pMD19-T载体,鉴定成功后克隆至原核表达载体pET32a(+)并转化至BL21(DE3)/Rosseta(DE3)进行IPTG诱导表达,最后用兔抗鮰爱德华菌血清对重组蛋白OmpN1、OmpN2和OmpN3进行免疫原性检测。结果显示扩增得到ompN1(1 143bp)、ompN2(1 056bp)和ompN3(1 053bp)的序列,获得的基因登录号分别为KJ831564、KJ831565和KJ831566。经生物信息学分析显示,OmpN1、OmpN2和OmpN3蛋白分子式分别为C1940H2993N543O622S7、C1817H2723N497O579S5和C1896H2843N519O563S7,相对分子质量大小分别为44 100、40 900和41 800,均为含有1个信号肽和跨膜区的疏水性蛋白,具有1个革兰阴性细菌OM_channels超家族结构域,是1种嵌入型的膜外蛋白;SDS-PAGE电泳检测发现,诱导表达的融合重组蛋白均以包涵体的形式出现在沉淀中,大小分别约为61 800、58 700和59 100;Western-blot分析表明,重组蛋白OmpN1、OmpN2和OmpN3均能与兔抗鮰爱德华菌全菌血清结合,表明鮰爱德华菌外膜微孔蛋白N具有亚单位疫苗开发的潜力。     

湖南珍珠蚌发病及其治疗简析

正一、珍珠蚌发病情况简述珍珠蚌又称珠母珍珠蚌,俗称蛤蜊。因其多产天然珍珠而得名珍珠蚌。壳大、厚而坚实,呈长椭圆形。位于长江流域的湖南地区,依托丰富的天然蚌种资源和优质的水域环境优势,其珍珠蚌养殖技术处于国内先进水平,珍珠蚌养殖作为湖南渔业的重要组成部分,已取得长足的进步与发展,并成为提高渔业效益,优化产业结构,发展农村经济的重要支柱产业。     

浸泡对浮性饲料粗蛋白含量及水质的影响

在11℃与25℃下,测定养殖池水浸泡浮性饲料24 h后粗蛋白及水体中总氨氮和总磷含量的变化。试验结果表明,随着浸泡时间的延长,饲料粗蛋白逐渐下降,而水体总氨氮和总磷浓度逐渐升高。浸泡4 h,25℃组饲料粗蛋白从初始(29.983±0.262)%降至(12.930±0.339)%,降幅56.9%,极显著高于11℃组的下降幅度(P<0.01),浸泡24 h,2个温度组饲料粗蛋白均下降80%以上。浸泡24h,11℃组和25℃组水体中的总氨氮浓度由初始的(0.135±0.001)mg/L分别增至(0.427±0.003)mg/L和(0.590±0.002)mg/L;总磷含量由初始的(0.075±0.001)mg/L分别增至(1.199±0.002)mg/L和(1.271±0.008)mg/L。建议在养殖过程中,尤其是高温季节,尽量缩短浮性饲料在水中的停留时间。     

鱼类鳃病的诊断与防治

近年来,我国渔业飞速发展,养殖规模不断扩大,随着密养、精养模式的不断推广,由生物性因素和非生物性因素引起的鱼类病害问题日益突出,其中由细菌、真菌、寄生虫、甲壳动物、营养和水环境等因素引起的鱼类鳃病在生产上最为常见,造成的危害也十分严重。     

2009年8-9月海南罗非鱼暴发性疾病初探

<正>2009年7月下旬起,在海南省多处罗非鱼养殖塘陆续暴发疾病,各地症状大同小异,据走访了解,该病往年也有发生,但2009年尤为突出,且药物治疗效果差,     

南方大口鲶锥体虫病初报

锥体虫属鞭毛虫,最早于１８４１年在鳟鱼的血液中发现。锥体虫个体小,寄生于血液,使鱼精神萎顿、不食、体质衰弱、贫血,最后死亡。我国从５０年代起就陆续有锥体虫感染青、草、鲢、鳙、鲤、鲫、鳊、黄颡鱼、黄鳝、鳗鲡等鱼类的报道。但至今尚未见感染南方大口鲶的报道。近年来,四川南方大口鲶养殖增多,规模不断扩大,最近相继在一些养殖场发生锥体虫病,造成很大的损失,其中尤以１９９７年５月上旬至６月上旬在仁寿黑龙滩水库网箱养殖的大口鲶发病严重。病鱼表现为不食、精神萎顿、浮于水面、活动滞缓、呼吸困难、体色变淡、鳃丝腐烂等,最初认…     

鱼类细菌性传染病防治实用处方

鱼类细菌性传染病是目前危害渔业生产最严重的疾病,据统计分析,鱼类细菌性传染病已占整个鱼类疾病的40%～50%。细菌性疾病可分为两种情况:一是急性细菌性传染病,此型发病急,病程短,死亡率高,而且多以败血症出现,有的已呈暴发性趋势,甚至发生大规模的流行,导致全池(箱)覆灭;另一种是慢性溃烂病,此型流行范围不广,多以慢性出现,主要以体表溃烂、损伤为主,一般不会造成大批养殖鱼类的死亡,但也会经常发生小批量死亡,即使未死,由于体表溃烂,这些鱼也丧失了商品经济价值。