鸡胚胎原始生殖细胞的体外培养

旨在对影响鸡胚胎原始生殖细胞（PGCs）体外培养、传代过程的各种影响因素进行探讨。将分离到的19期鸡胚胎生殖腺的PGCs在以鸡胚成纤维细胞（CEF）为饲养层，添加细胞因子的培养体系中进行培养、传代。经冷冻保存的PGCs在添加细胞因子的培养体系中能增殖，并具有分化能力。从细胞形态、集落形态、增殖生长能力、核型检测、碱性磷酸酶测定等方面对培养过程中的鸡胚胎PGCs进行检测。结果表明，采用传至3代的CEF为饲养层，多次离散法进行传代所获得的5代鸡胚胎PGCs不但能有效维持PGCs的未分化状态和正常二倍体核型，也具有其作为多能性胚胎干细胞的一系列特征。     

第十九期鸡胚原始生殖细胞的冷冻保存

采用Ficoll密度梯度离心,提取第 19期(孵化 72h)性腺中的PGCs,对其应用不同的冷冻保护液和不同的平衡方法进行冷冻保存,并于复苏后进行体外培养。复苏后的PGCS用台盼蓝染色检测其存活率,结果发现:从第 19期性腺中获取的PGCs在同一种冷冻保护液下,采用不同的平衡方法进行冷冻,对PGCs的存活率有显著影响(P<0.05)或极显著影响(P<0.01);平衡方法相同,在不同冷冻保护液之间存在显著(P<0.05)或极显著 (P<0.01)差异。PGCs经体外培养 24h后再进行冷冻保存,复苏后其存活率、体外培养存活时间均极显著(P<0.01)短于分离后直接冷冻的PGCs。     

第28期鸡胚原始生殖细胞的冷冻保存与体外培养研究

利用Ficoll密度梯度离心,提取鸡胚第28期(孵化132h)性腺中的原始生殖细胞(PGCs),用不同的冷冻保护液,对PGCs采用分离后直接冷冻保存和体外培养24h后冷冻保存2种方法,以筛选合适的冷冻保护体系。结果发现,分离提纯后直接进行冷冻保存的PGCs,存活率最高为(87.07±1.29)%;体外培养24h后进行冷冻的PGCs,存活率最高为(44.08±1.19)%。对复苏后的PGCs进行体外培养结果发现,分离提纯后直接进行冷冻的PGCs,在体外培养过程中具有形成细胞克隆的能力,且可传代和进行体外分化;而体外培养24h后进行冷冻的PGCs,复苏后在体外培养过程中不能形成细胞克隆,且在体外培养40h左右死亡。     

鸡胚盘细胞的研究进展

鸡胚盘细胞存在于未孵化的新鲜种蛋中，是一种具有多潜能性的胚胎干细胞。通过胚盘细胞移植法可制备体细胞或种系细胞嵌合体。如果将外源基因转入受体胚盘，受体胚后代则可能成为转基因鸡。利用胚盘细胞作为转基因载体，生产转基因鸡是研究禽类转基因的一种理想方法。作者就胚盘细胞及其研究进展给予综述。     

鸡胚原始生殖细胞诱导分化为神经元样细胞的研究

原始生殖细胞（Primordial Germ Cells：PGCs）是指能够发育为性细胞的前体细胞,可作为胚胎干细胞（ES）分离与克隆的一种新型材料,其形态、表面标志、体内外分化潜能及体外培养条件均类似于胚胎干细胞.体外培养过程中,在培养液中加入一定的诱导分化剂,PGCs细胞将发生定向分化.长期以来神经系统损伤和神经退行性病变是临床上难以解决的问题,由于原始生殖细胞具有发育全能性,可以在体外通过对其进行定向诱导,得到特定类型的细胞,这将使原始生殖细胞成为今后细胞替代疗法和组织器官移植的来源.本试验采用不同的诱导剂对PGCs进行诱导,以探讨PGCs细胞向神经细胞分化的适宜条件.     

好氧堆肥-蚯蚓堆肥结合法处理绿化废弃物与牛粪

为促进绿化废弃物和牛粪的资源化利用,采用赤子爱胜蚯蚓Eisenia fetida对绿化废弃物和牛粪的混合物进行好氧-蚯蚓结合堆肥处理。在绿化废弃物好氧堆肥60 d后,按0（T₁）,2%（T₂）,4%（T₃）,6%（T₄）,8%（T₅）,10%（T₆）的质量分数在绿化废弃物中添加牛粪,并加入蚯蚓,继续蚯蚓堆肥60 d,以无牛粪无蚯蚓的绿化废弃物堆肥作为对照（T₀）,最终将堆肥产品用作基质进行美丽竹芋Calathea veitchiana栽培试验。结果表明:蚯蚓堆肥处理（T₁~T₆）产品在营养元素含量和美丽竹芋生长量上显著高于对照（T₀）。不同蚯蚓堆肥处理中,绿化废弃物与牛粪混合处理在蚯蚓存活率、蚯蚓生长和繁殖速度、纤维素和木质素降解率、堆肥产品营养元素含量及细菌、真菌和放线菌数量,以及美丽竹芋生长（株高、冠幅、叶片数、鲜质量）上均显著高于纯绿化废弃物处理（T₁）。在绿化废弃物与牛粪混合处理（T₂~T₆）中,添加质量分数8%（T₅）和10%（T₆）牛粪的处理在蚯蚓生长量、繁殖率、产品质量指标和美丽竹芋生长指标上优于其他处理。可见,利用好氧堆肥-蚯蚓堆肥结合处理方式可以有效应用于绿化废弃物处理,其中以添加质量分数8%（T₅）和10%（T₆）牛粪的处理效果最佳。     

冷冻保护剂和平衡方法对鸡胚原始生殖细胞冷冻保存效果的影响

采用Ficoll密度梯度离心，提取第19期(孵化72h)和第28期(孵化132h)性腺中的原始生殖细胞(PGCs)，应用不同的冷冻保护剂和平衡方法进行冷冻保存。PGCs解冻后用DMEM培养液进行体外培养，并采用苔盼蓝染色法鉴定复苏后PGCs的存活情况。结果表明：①从第19期或第28期性腺中获取的PGCs在同一种冷冻保护剂下，平衡方法对PGCs的存活率有显著或极显著影响，平衡方法1的冷冻保护效果优于平衡方法2。②采用相同的平衡方法，冷冻保护剂C的冻存效果与其他保护剂之间存在显著或极显著差异，冷冻保护剂E和F对PGCs的冻存效果次之，冷冻保护剂A、B和D对PGCs的冻存效果最差。复苏后PGCs进行体外培养．其存活时间与分离后PGCs直接培养相比未出现显著缩短现象。     

基于人工神经网络算法的2株木质素降解菌固体菌剂的制备

  目的  以2株不同的木质素降解菌[菌株A(构巢曲霉 Aspergillus nidulans) 、菌株Q(栓菌属1种 Trametes sp.)]为材料,分别制作应用于园林绿化废弃物降解或者堆肥的高效固体发酵菌剂。  方法  采用单因素试验确定固体发酵培养基的碳氮源和外加营养组分种类,再通过正交试验对碳氮源添加量进行优化,最后根据碳氮源优化结果,采用均匀实验结合人工神经网络算法寻找2株木质素降解菌的外加营养组分接种量和最佳固体培养基发酵条件。  结果  优化后的菌株Q固体菌剂培养基基质以麸皮30.000 g作为基底,添加豆饼粉3.000 g和玉米粉0.188 g;外加营养组分(按基质的质量比)为硫酸镁(MgSO₄) 1.434%、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)0.115%和硫酸亚铁(FeSO₄·7H₂O)1.497%;接种条件为接菌量6.000%、料水比(质量比)1.000∶0.992、保护剂1.000%。优化后的菌株A固体菌剂培养基基质以麸皮30.000 g作为基底,添加豆饼粉1.500 g和木质素磺酸钠1.500 g;外加营养组分(按基质的质量比)为MgSO₄ 0.123%、KH₂PO₄ 0.213%、FeSO₄·7H₂O 1.280%;接种条件为接菌量21.000%、料水比1∶1、保护剂19.000%。菌株Q和菌株A在优化培养基上发酵7~9 d获得最大发酵生物量,菌株Q的吸光度D(260)为0.596,菌株A的D(260)为0.478。  结论  2株木质素降解菌在优化后的发酵条件下制得的固体菌剂具有高生物量的特点,在降解园林绿化废弃物的木质素方面具有一定潜力。图6表5参22     

不同配比园林绿化废弃物和蘑菇渣混合蚯蚓堆肥的效果

为探究园林绿化废弃物和蘑菇渣混合堆肥最佳配比,采用‘大平2号’蚯蚓Eisenia fetida‘Daping 2’对园林绿化废弃物和蘑菇渣进行混合堆肥处理,以期为园林绿化废弃物和蘑菇渣的资源化利用提供理论基础。试验共设5个处理[园林废弃物+蘑菇渣（干质量比）]:A₁（100%+0%）,A₂（75%+25%）,A₃（50%+50%）,A₄（25%+75%）和A₅（0%+100%）,进行11周堆肥。对堆肥过程不同处理中,成熟蚯蚓数量、成熟蚯蚓质量、蚯蚓幼苗数量以及蚯蚓卵数量和堆肥前后材料化学性质进行测定;利用种子发芽实验研究堆肥效果。结果表明:A₂和A₃处理的蚯蚓生长和繁殖优于其他处理;A₃和A₄处理的堆肥养分（钾、铜和锌）增加率显著高于（P < 0.05）其他处理,A₃和A₄钾质量分数为（28.05 ±6.13）和（28.32 ±5.66）g·kg-1,A₃和A₄铜质量分数为（21.91 ±2.78）和（34.08 ±3.34）mg·kg-1,锌质量分数为（27.22 ±1.51）和（32.76 ±2.97）mg·kg-1并且堆肥达到腐熟。蘑菇渣添加比例大于50%会导致电导率值偏高,大于75%会限制蚯蚓卵的成长。综合各项指标表明:A₃堆肥品质优于其他处理。同时,建议在实际应用中将A₃堆肥用于低灵敏度植物的栽培基质或结合淋洗措施降低A₃堆肥产品的电导率值后使用。     

新型冠状病毒检测方法研究进展

新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS?CoV?2)传播能力强,易感动物种类多.目前,已出现多种变异株,可能存在逃脱现有疫苗保护的风险.认识人与动物界及其与疾病传播的相关性仍然是许多新兴的人畜共患病的关键控制点.本文简述了SARS?CoV?...