漆酶LAC表达与鸭梨果心褐变的关系

【目的】探究在不同成熟度和降温贮藏方式下,LAC表达模式与鸭梨果心褐变的关系,为进一步解析鸭梨果心褐变机制提供理论依据。【方法】以鸭梨作为材料,通过对不同成熟度（早采、中采和晚采）的鸭梨进行急速降温（急降）和缓慢降温（缓降）处理,观察贮藏期间鸭梨果心褐变情况,测定漆酶（Laccase,LAC）活性及其基因LAC的相对表达量,研究LAC在鸭梨果心褐变过程中的参与作用。【结果】冷藏60 d时,晚采鸭梨出现褐变,晚采缓降处理的鸭梨果心褐变指数为0.32,是同期急速降温处理的2.56倍;在贮藏90 d时,中采缓降处理的褐变指数是0.24,中采急降处理的褐变指数仅为0.01。各个处理组在贮藏期间LAC活性多数表现为先逐渐升高后下降的趋势,晚采的果实在贮藏60 d时出现活性高峰,褐变发生;早采和中采鸭梨LAC活性高峰均在90 d时出现,褐变程度低于晚采鸭梨。在贮藏期间,缓慢降温处理的LAC活性高于急速降温处理。鸭梨LAC14和LAC7表达量呈先上升后下降的趋势,LAC6表现为先下降后上升再降低的变化趋势;中采、晚采鸭梨在贮藏60 d时,LAC14和LAC7表达量最高。【结论】与缓慢降温相比,急速降温处理减少了鸭梨果心褐变的发生。在整个贮藏期间,LAC活性呈先上升后下降然后又上升的趋势,其峰值时的活性高低次序为：晚采>中采>早采,这与果心褐变趋势一致;LAC在鸭梨果心褐变过程中上调表达。相比缓慢降温处理,急速降温处理具有较低的LAC7、LAC14和LAC6表达量。急速降温结合适时采收能够抑制LAC的上调表达,减少鸭梨果心褐变发生。     

漆树酶在漆酚树脂上的固定化研究

介绍了漆酚树脂吸附金属离子后对漆树酶的固定化方法，比较了Ｆｅ＾３＋和Ａｌ＾３＋、漆酚树脂和漆酚－水杨酸接枝树脂对漆树酶的固定化结果显示，漆酚－水杨酸－Ａｌ螯合树脂对漆树酶的固定化活力最高，测定了溶液ＰＨ，环境温度对固定化漆树酶活性的航固定化漆酶的重作用性。另外，测定了固定化漆树酶的米氏常数，Ｋｍ＝４．９×１０＾－３，并讨论了Ｋｍ小于天然漆树酶的米氏常数的原因。     

漆酚热预聚漆研究（Ⅰ）──漆酚热预聚漆酶催化成膜

为了充分让漆酶在最后催化成膜中发挥作用，将生漆分离出漆酚和粗漆酶后，先将漆酚进行热预聚，再用粗漆酶配制成漆酚热预聚漆。试验结果表明：此法配制出的漆液，不仅能在漆酶催化下成膜，而且具有粗漆酶用量少、干燥性能好的特点。     

漆酚硼衍生物的研究(Ⅳ)──硼酸漆酚酯的聚合反应

硼酸漆酚酯具有较漆酚更易聚合的特性。根据元素分析、热分析、红外光谱、紫外光谱、核磁共振氢谱和电子自旋共振谱等的测试结果认为：硼酸漆酚酯的聚合反应发生于其不饱和侧碳链基上；该不饱和碳链基在干燥空气中进行游离基聚合；其分子中的硼原子对该游离基聚合反应具有催化作用。     

木耳漆酶高产菌株筛选及其发酵条件的研究

通过运用不同检测方法对木耳属中的三个种的 2 7个菌株的产过氧化物酶、漆酶能力的检测 ,筛选得到一漆酶高产菌株毛木耳 (Auriculariapolytricha)AP4。并且对AP4的产漆酶的发酵条件进行了初步研究。摇瓶实验产漆酶的最佳培养基的成分为 :碳源羧甲基纤维素(CMC) 5g/L ,氮源NH4NO3 L -天冬酰胺 (L -As paragine) 2 4mmol/L ,培养基的初始pH4 0 ,培养温度2 5℃。     

菌株Bacillus sp.CLb芽孢漆酶对染料、模拟染料废水脱色的研究

[目的]研究芽孢杆菌菌株CLb的芽孢漆酶在介体的互作下对不同类型的染料及模拟染料废水的脱色效果。[方法]制备芽孢粗酶液,在介体的互作下,测定具有漆酶活性的粗酶液对活性亮蓝、活性黑、靛红和结晶紫的脱色效果,筛选出对染料脱色有促进作用的漆酶介体,并且研究芽孢漆酶在不同pH条件下对染料和模拟染料废水脱色的影响。[结果]菌株CLb的芽孢漆酶在无介体参与下只能使活性亮蓝和结晶紫脱色。在介体乙酰丁香酮（ACE）的作用下,芽孢漆酶对4种染料的脱色率均超过70%。在pH 7.0条件下,芽孢漆酶浓度为44.74 U/L和介体ACE浓度为1 mmol/L时对模拟染料废水的脱色效果最好,6 h脱色率超过80%。在介体乙酰丁香酮存在,pH 7.0的条件下,菌株CLb的芽孢漆酶对合成染料脱色效率高于pH 9.0时的脱色率。[结论]在介体乙酰丁香酮的存在下,芽孢漆酶对染料和模拟染料废水均具有较好的脱色效果。     

辣椒疫霉漆酶基因Pclac3克隆表达

辣椒疫霉是一种侵染性植物病原,能引起多种茄科及葫芦科植物的病害。利用同源克隆法从辣椒疫霉基因组内克隆了漆酶基因Pclac3,该基因全长1 881个核苷酸,编码626个氨基酸,与已知的真菌漆酶基因具有较高的同源性,并且具备漆酶基因的保守区域。利用PCR将该基因克隆于pPIC9K载体,并转化于毕赤酵母GS115,经过1%甲醇诱导表达获得其异源表达产物。将表达产物进行SDS-PAGE检测,获得分子量大约为90 kDa的特异蛋白。利用ABTS法对Pclac3的表达产物粗酶液进行酶活性分析发现,其活性在第11天时最大,达到45 U/mL。这为研究辣椒疫霉漆酶基因家族及探索卵菌漆酶生物活性及其潜在的应用提供了理论依据。     

菜粕芥子碱酶降解反应的条件优化和机理研究

芥子碱是菜粕中的主要抗营养因子之一,为了绿色高效地降解芥子碱,选取了漆酶做催化剂,通过在线-紫外可见光谱实时监测的方法,测定了降解反应的动力学数据。该反应的动力学行为符合酶促反应过程,据此推导出酶解反应的米氏方程。利用薄层层析、高效液相色谱等分离手段,得到了纯化的降解产物,并进行了核磁共振波谱分析。根据动力学数据和产物信息,推测出反应机理可能是自由基过程。     

漆树不同种源果实表型性状与漆蜡含量相关性分析

对云、黔、陕等6省14县的15个种源地漆树[Toxicodendron verniciflum(Stokes)F.A.Barkley]果实的千粒质量、外果皮、蜡质层、种子、种仁、蜡质层占果实总重比率等表型性状进行分析。结果表明:(1)不同种源漆树果实各性状差异均达到了显著水平;(2)蜡质层质量及其占果实质量比率与种子及种仁质量呈极显著负相关;(3)漆籽蜡质层质量占果实质量比率与纬度、海拔没有发现明显的规律;(4)云南泸水县秤杆乡(15-YNW)白漆品种果实无外果皮,种子小,蜡质层含量高,蜡果比达到69%,较其他种源差异显著,因此,推荐白漆品种为产蜡优良品种。