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991.
992.
牛Nramp1基因启动子的克隆及其活性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
【目的】牛Nramp1基因是主要的抗病候选基因,但其转录调控的分子机制尚不清楚。本研究欲确定牛Nramp1基因的启动子区域,找到启动子核心序列和主要的调控区,探索Nramp1基因表达机制。【方法】采用基因克隆、DNA测序、半定量RT-PCR和荧光素酶报告基因系统等技术手段,构建牛Nramp1基因5′侧翼区长片段及固定3′端的不同节段的pEGFP-N1和/或pGL3重组质粒,分别转染293T和RAW264.7细胞,并进行脂多糖(LPS)诱导,对不同片段的启动子活性进行定性和定量测定。【结果】牛Nramp1基因5′侧翼区长片段具有较强的启动子活性,+58—-89区域具有基本的启动子功能,+58—-1 748启动子活性最强。进一步研究表明,-89—-205 bp区域、 -278—-1 495 bp区域存在着正调控元件,在-205—-278 bp区域内存在着负调控元件;另外,LPS能显著增强启动子活性,其诱导牛Nramp1基因的表达具有细胞特异性和剂量依赖性。【结论】成功构建了含推测的牛Nramp1基因启动子片段的重组报告基因载体, 确定了启动子核心区域和主要的调控区域。 相似文献
993.
994.
根据猪乳铁蛋白N叶(PLF-N)的蛋白序列和毕赤酵母(Pichia pastoris)密码子的偏嗜性,通过全基因合成法合成改造后的PLF-N基因片段,将其克隆到pGAPZα-A质粒中构建分泌型重组酵母表达载体 pGAPZα-A- PLF。pGAPZα-A- PLF 通过限制性内切酶Avr Ⅱ酶切线性化后,经电穿孔法转入毕赤酵母细胞SMD1168内。PCR检测结果发现,PLF-N基因与毕赤酵母染色体稳定结合,Zeocin抗性筛选,得到高拷贝转化子。在GAP启动子调控下,PLF-N重组蛋白获得分泌表达,其分子质量约为38 ku,上清表达量约为364 μg/mL。琼脂糖孔穴扩散法检测结果显示,该表达产物对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌均具有较好的抑菌活性,且对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌最小抑菌浓度(MIC)分别为12.5、25.0 μg/mL。 相似文献
995.
996.
乳铁蛋白是能与铁结合的糖蛋白,它广泛分布于动物的外分泌物中,由一条多肽链组成(氨基酸组成见表1),分子量大概为80000Da。有研究表明,乳铁蛋白有三种异构形式:即α型、β 相似文献
997.
大蒜素是从蒜的球形鳞茎中提取的挥发性油状物,也可以人工合成。大蒜素的有效成分是大蒜油,是大蒜中大蒜辣素、大蒜新素及多种烯丙醛硫醚化合物等重要成分的总称。近年来广泛应用与医药、兽药、食品添加剂、饲料添加剂中。大蒜素在饲料添加剂,可增强动物抗病力,提高免疫力,改善饲料风味提高动物的采食量。促进动物生长发育,提高动物的肉蛋产量,提高饲料报酬。 相似文献
998.
999.
以含猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增猪IL-2成熟蛋白基因。将猪IL-2成熟蛋白基因定向克隆到杆状病毒转移载体pFastBac Dual中,转化含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,经抗性及蓝白斑筛选得到含猪IL-2基因的重组质粒rBacmid-IL2,转染昆虫细胞。间接免疫荧光试验表明重组猪IL-2在Sf9昆虫细胞中获得了表达,SDS-PAGE可检测到相对分子质量为20000的重组蛋白,Western-blot证实该重组蛋白可与兔抗猪IL-2单克隆抗体发生特异性反应,重组猪IL-2经纯化后能明显促进猪T淋巴细胞转化。结果表明,重组猪IL-2在昆虫细胞中得到表达,表达的重组蛋白具有一定生物学活性,为进一步开发研制新型免疫佐剂奠定了基础。 相似文献
1000.
螨病(俗称癞子)是螨侵袭水牛皮肤而引起的一种接触传染的慢性寄生性皮肤病。螨虫中以疥螨科的疥螨属(sarcoptes)和痒螨科的痒螨属(psoroptes)对家畜的危害最大。在临床上以发生剧烈的痒觉、湿疹性炎症、脱毛、患部逐渐向周围扩延为特征,并具有高度的传染性,严重影响畜牧业的健康发展。 相似文献