欧文氏杆菌CXJZ95-198基因组文库的构建

采用改良鸟枪法构建了草本纤维精制高效菌种Erwinia carotovora CXJZ95-198的基因组文库,结合透明圈法,筛选到了8个甘露聚糖酶基因阳性克隆,并采用PCR方法对它们进行了分析鉴定,结果表明它们含有同一个甘露聚糖酶基因.     

一种适合于cDNA文库构建的高质量棉花RNA的简单抽提法

Duetothelargeamountsofpolyphenolicsandpolysaccharides,theextractionofhighqualitybiochemicalmoleculeslikeRNAand DNAisalwaysanobstacletothemolecularbiologystudyofcotton.TheconventionalRNAextractionmethodsandcommercialkits alwaysfailedtogethighqualityRNAorevennothing.PerfectRNA wasextractedfromembryogeniccallusincottonusingTrizol(Invitrogen,#15596026)butfailedtoothertissuesinthisstudy.Hereamodifiedsimpleprotocolwasdescribedusingguanidinium thiocyanatetoextracthighqualityRNAfromcottonwithl…     

细菌人工染色体及其在分子克隆化病毒中的应用

细菌人工染色(BAC)是一种新的用于大分子DNA克隆的载体系统。它具有容量大。遗传稳定。操作简单等优点。本文综述了近几年来BAC的发展。及其常用的分析和修饰方法。同时，介绍了BAC在分子克隆化病毒中的应用。     

野桑蚕脑组织cDNA文库的构建及化学感受蛋白基因(CSP3)的克隆和序列分析

利用TAKARA公司生产的cDNA Library Construction Kit构建了野桑蚕脑组织的cDNA文库,经鉴定文库的滴度达3.5×105pfu/mL,文库插入片段的平均大小为1.2kb。从文库的测序结果中获得野桑蚕化学感受蛋白基因(CSP3)完整的开放阅读框(登录号:EU439267)并对其进行了序列分析。结果表明:该基因读码框由384个核苷酸组成,编码127个氨基酸,分子质量为14.6kD。通过对该基因编码的氨基酸和其它17种昆虫的CSP编码的氨基酸进行进化分析,发现该基因与家蚕CSP3的同源性最高,达96.85%。该基因的发现对于研究家蚕和野桑蚕对化学农药的敏感性差异具有重要意义。     

龙角蚕中肠组织cDNA文库的构建

用建立非表达文库的方法 ,从龙角性状家蚕中肠组织的mRNA合成cDNA片段 ,重组入噬菌体λgt10的EcoRI的位点之间 ,所构成的基因非表达文库库容量为 1.3× 10 6,经大肠杆菌C60 0与C60 0hlf菌株平皿测定 ,重组率为 70 %。     

表达序列标签(ESTs)及其应用

表达序列标签(ESTs)是指从(ESTcDNA文库中随机挑取克隆并对其3'或5'端进行单轮自动测序所获得的短cDNA库列,一般长度为300～500bp.要有效获取ESTs,必须对cDNA文库进行预处理,处理方法有衰减杂交法、均一化法和差异显示法.在dbEST中收录了大量各种生物的ESTs.ESTs广泛应用于鉴定基因、发现新基因、电子克隆、构建遗传学图谱、制备DNA芯片、分子标记、研究基因的差异表达及检验病原微生物等方面.     

甜瓜果实发育早期cDNA文库的构建

甜瓜的品质主要决定于可溶性糖的含量和种类.因此,在甜瓜果实发育过程中可溶性糖的积累一直得到了人们的关注[1～3].甜瓜果实中糖的含量主要决定于酸性转化酶和蔗糖磷酸合成酶的活性.为了克隆甜瓜果实蔗糖代谢酶基因,我们构建了甜瓜幼果cDNA文库,为今后从分子水平上改善甜瓜品质提供基本资料.     

有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库的构建

利用 Stratagene公司 Hybri ZAP- 2 .1建库试剂盒构建了经有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞 c DNA文库。采取健康鲤鱼外周血 ,分离白细胞 ,经 L PS、PHA和 Con A分组作用不同时间后 ,分别提取总 RNA,将各组样品混合后 ,以 Oligo(d T)纤维素柱分离纯化 m RNA,经逆转录合成 c DNA的第 1链和第 2链 ,与 Eco R 接头连接 ,酶切后 ,用CHROMA SPIN- 4 0 0柱离心层析纯化 ,与 Hybri ZAP- 2 .1载体连接 ,体外包装后转染 E.coli XL I- Blue宿主菌 ,进行滴度测试和文库扩增。结果构建的经有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞 c DNA文库原始库容量为 1.6 7× 10 6 pfu,插入片段长度在 0 .4× 10 3～ 3.0× 10 3bp,重组率为 98.9% ,扩增后的文库滴度为 6 .16× 10 9pfu/m L ,该文库符合 c DNA文库构建的标准 ,为克隆和研究鱼类免疫应答相关基因提供了有效的工具