狂犬病病毒修饰基因组的构建

[目的]利用反向遗传学技术在DNA水平上构建了狂犬病病毒修饰基因组.[方法]提取狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)口服疫苗株SRV9基因组总RNA作为RT-PCR的扩增模板,并根据GenBank已发表的SRV9基因组序列设计引物, 缺失狂犬病基因组Ψ区并在缺失位置插入人细胞色素C基因,再设计引物删除糖蛋白(G)胞质区(CD区).缺失Ψ区及删除CD区时采用基因同源重组的方法进行.在缺失的Ψ区插入人细胞色素C基因时,利用引物引入酶切位点NheI和EcoRI, 用PCR扩增出人细胞色素C基因并插入NheI和EcoRI位点.[结果]获得含预期的人细胞色素C基因,同时缺失了CD区与Ψ区的质粒pBSK- LA.[结论]全基因组测序结果表明已成功构建了狂犬病病毒修饰基因组.     

猪囊尾蚴AgB重组质粒在免疫小鼠体内的表达及其抗体水平检测

为评价猪囊尾蚴副肌球蛋白(AgB)真核表达重组质粒作为候选DNA疫苗的免疫效果,本研究将猪囊尾蚴AgB基因亚克隆于真核表达载体pVAX1中构建了重组表达质粒pVAX1-AgB;将pVAX1-AgB与ISA206佐剂按1:1体积比乳化,以每只100μg的剂量,肌肉注免疫5周龄左右的BALB/c小鼠,3周后加强免疫。同时,通过原核表达制备重组AgB蛋白作为ELISA检测抗原,通过间接ELISA方法检测免疫小鼠的抗体水平。结果显示,在小鼠免疫后2周即可检测到抗AgB抗体,6周达到峰值,并维持在较高水平,持续达8个月;实验组血清抗体水平明显高于对照组(p0.01)。本研究为pVAX1-AgB作为候选DNA疫苗提供了实验依据。     

增敏微生物抑制法检测恩诺沙星药物残留

建立一种基于显色反应来定性判断动物源性食品中的恩诺沙星药物残留的微生物检测方法。在培养基中添加适量已知浓度的恩诺沙星来提高敏感菌的敏感度,协同显色剂来检测动物源性食品中的恩诺沙星残留。该方法使检测限从50μg/kg降低至10μg/kg。建立的方法可用于动物源性食品中恩诺沙星药物残留检测,且能满足各国限量要求。     

新疆铁路动物卫生检疫监督的现状、存在的问题及对策

<正>动物疫病的传播是动物疫病从一个群体向其他群体的传播,或者动物疫病从一个地方向另一个地方,从一个饲养场地向另一个饲养场地传播,导致动物疫情扩散的过程。动物疫病的传播是由三个环节构成的。即:传染源——传播途径——易感动物。作     

犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因的克隆和原核表达质粒的构建

通过设计特异性引物,以犬传染性肝炎患犬的全血基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得了犬传染性肝炎病毒Hexon蛋白基因,将其插入到pMD18-T载体进行测序、鉴定,构建原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hex-on。结果显示,犬传染性肝炎病毒Hexon基因已被成功地克隆,基因全长2 718 bp,包含从起始密码子ATG到终止密码子TAA的完整序列。与犬传染性肝炎病毒国际标准株Hexon蛋白基因的同源性为99.7%,通过实验鉴定表明pMD18-Hexon克隆载体和原核表达质粒载体pGEX-6p-1-Hexon已成功构建。     

犬副流感病毒NP基因的克隆与原核表达

以犬副流感病毒RNA为模板,采用RT—PCR方法,连接pMD18-T载体获取NP蛋白编码基因核苷酸序列,并应用定向克隆技术,构建原核表达载体pGEX-6P-1-NP。经测序鉴定证实获取的NP蛋白核苷酸序列与GeneBank中标准序列存在两处碱基变异,导致编码的蛋白质出现一个氨基酸的变异。测序结果表明,克隆出的目的基因序列已定向克隆到pGEX-6P-1载体,成功构建了其原核表达载体,并能在大肠杆菌BL21（DE3）中得到表达。Westen—Blotting分析结果显示,表达的GST—pGEX-6P-1-NP重组融合蛋白为82．1kDa,可被犬副流感阳性血清所识别,表明NP基因所编码的蛋白具有一定的免疫活性。     

冷冻保护剂在卵母细胞上的研究进展

系统综述了细胞松弛素B、紫杉醇、咖啡因和谷胱甘肽4种冷冻保护剂在增强卵母细胞抗冻能力方面的研究,并分析了Bcl-2和Bax2种凋亡基因的表达程度与卵母细胞凋亡之间的关系,     

牛源无乳链球菌CAMP因子(cfb)的克隆及原核表达

提取能产生CAMP反应的牛源无乳链球菌山东分离株的基因组DNA,PCR扩增CAMP因子基因,重组到pMD18-T载体中.测序结果表明,扩增片断含有768 bp的ORF,可编码含255个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的无乳链球菌CAMP因子蛋白的氨基酸组成相比, 第8位Tyr→Cys,第95位Pro→Ser,第126位Thr→Ala的3个氨基酸发生了点突变,同源性为98.4;.成功构建原核表达载体pET32a+/cfb,SDS-PAGE分析蛋白质表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为48 kD,表达量占菌体总蛋白的52.7;.这为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了条件.     

新疆牛巴贝斯虫MSA-2c可溶性融合蛋白的高效表达

量大小一致.MSA-2融合蛋白的优化表达为牛巴贝斯虫病的分子免疫学诊断和亚单位疫苗的研制奠定了基础.     

新疆动物源葡萄球菌多重耐药基因 cfr 及其移动元件检测

从新疆部分地区采集动物源粪样及鼻腔样共计1 781份,从中分离葡萄球菌1 667株,进行临床常用11种抗菌药物的药敏试验,采用PCR方法进行酰胺醇类耐药基因(cfr、fexA和fexB)及与cfr转移相关的移动元件IS21-558和转座酶基因Tn558的检测。结果显示:新疆动物源葡萄球菌对临床常用抗菌药物耐药严重程度为羊源宠物源猪源禽源牛源,对被检抗菌药物中的青霉素耐药最严重,耐药率为54.7%～93.6%。除牛源菌外(36.3%),其余动物源分离的葡萄球菌对苯唑西林的耐药率为51.1%～98.2%。动物源葡萄球菌对阿米卡星、庆大霉素和克林霉素均有较好的敏感性。多药耐药结果显示,羊源菌以4～5耐为主,禽源菌和宠物源菌以3～5耐为主,猪源菌以4耐和7耐为主,牛源菌以1耐为主,不同动物源分离的葡萄球菌耐药谱型多样化。酰胺醇类耐药基因检测结果显示,仅在猪源菌中检出4株菌携带cfr基因。除牛源菌外,在其余动物源中均检出fexA基因,检出率为宠物源猪源禽源羊源,未检出fexB基因。16SrRNA序列扩增结果显示4株携带cfr基因的阳性菌都为模仿葡萄球菌。此外,在4株阳性菌中都检出移动元件IS21-558(包括:istAS和istBS)和Tn558转座酶基因(tnpA、tnpB、tnpC)。新疆动物源葡萄球菌耐药情况严重,耐药谱型多样化,酰胺醇类耐药基因以携带fexA基因为主。此外,多重耐药基因cfr及其移动元件的检出,提示应加强耐药性的监测,防止耐药菌的暴发和超级耐药菌出现的概率。