金黄色葡萄球菌FnBPA D基因片段的表达

金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳腺炎的主要传染性病原菌.本实验采用分子克隆及蛋白表达技术,成功的表达了金黄色葡萄球菌纤维素结合蛋白A(FnBPA)D片段并对其免疫学活性进行了初步研究.表达产物免疫实验动物后,获得较高效价的抗体.用制备血清进行吞噬调理试验,抗金黄色葡萄球菌黏附等一系列试验,证明 抗体对金黄色葡萄球菌具有吞噬调理作用,也有抗金黄色葡萄球菌黏附的作用,这将为制备奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌黏附素疫苗奠定基础.     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌FnbpB-D基因的表达及其抗血清活性

纤维素结合蛋白B(FnbpB)是金黄色葡萄球菌(S.aureus)最主要的黏附因子之一,它能够介导S.aureus结合于细胞表面的纤维连结素(Fn)和纤维蛋白原(Fg)。FnbpB基因中D区为主要活性部位。本实验利用pET-32a表达载体表达了S.aureus FnbpB-D重组蛋白(34.7ku),并通过动物实验对重组FnbpB-D蛋白的抗血清活性进行了初步研究。采用ELISA对抗血清进行抗粘附性检测,结果显示实验组与对照组差异极显著(p0.01),抗血清具有较强的抑制S.aureus黏附纤维连结素的作用。此外,调理吞噬实验结果显示,免疫兔全血对S.aureus有较强的调理作用。这些实验结果将为制备奶牛乳房炎S.aureus黏附素疫苗的研制提供参考。     

牛结核病检疫方法研究进展

牛结核病主要是由牛分枝杆菌引起的一种慢性消耗性疾病,在许多国家尤其是发展中国家仍然广泛流行,该病不仅给畜牧业造成巨大的经济损失,而且严重威胁着人类的健康。因此,牛结核病的检疫意义重大。细菌学检测、免疫学检测及分子生物学诊断为牛结核病检疫的研究奠定了基础。然而,目前迫切需要研究快速、灵敏、特异的牛结核病诊断方法。牛结核病血清学诊断技术研究一直是研究热点之一,但至今仍存在许多问题。作者就这些诊断检疫方法进展作一简要介绍。     

牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白原核表达及间接ELISA检测方法研究

本研究以牛传染性鼻气管炎gE基因的原核表达产物为抗原建立检测IBRV抗体间接ELISA检测方法。通过DANStar比对分析牛传染性鼻气管炎病毒gE蛋白序列,通过亲和层析对重组表达产物进行纯化,经Western blot检测证明重组表达产物能被IBRV标准性鼻气管炎gE蛋白长度为500 bp的特异性肽序列,随后构建了pCold-TF-gE原核表达体系,并用Ni-IDA进行纯化。以纯化鉴定后的表达产物为抗原(1 μg/mL)包被酶标板制备多克隆抗体血清,并建立检测牛传染性鼻气管炎血清抗体间接gE-ELISA方法。结果显示:阳性OD₄₅₀值为0.369,组内组间重复性小于5%,敏感性强,与口蹄疫等阳性血清均无交叉反应且特异性达95%。利用建立的gE-ELISA方法,同时和IDEXX(IBR)抗体检测试剂盒对200份临床阳性血清进行检测比较,符合率均达到95%。该方法特异敏感高效,可用于牛传染性鼻气管炎血清抗体的检测。     

内蒙古地区鸡群沙门氏菌的分离及鉴定

本项实验对内蒙古地区７个盟市１１个养鸡场的鸡群进行了禽沙门氏茵的分离和鉴定。结果表明从不同生长阶段的鸡群中共分离到８４株沙门氏菌，鸡群的平均检出率为２５。５％，最高达６１．２％。血清学鉴定结果表明所分离的沙门氏菌分别属于４个种，它们是都柏林沙门氏茵（１５株）、鸡白痢沙门氏茵（２８株）、汤卜逊沙门氏菌（１０株）和猪霍乱沙门氏菌（１株），其中以都柏林沙门氏茵和鸡白痢沙门氏苗分布最广。４个种的沙门氏菌对雏鸡均表现致病性，致死率为１２．５～８７．５％。     

乳酸菌发酵骨泥的研究

在不同温度下，利用乳酸菌对不同浓度的骨泥进行发酵实验，发现发酵后骨泥液中离子钙的含量明显提高，总结出在一定温度、一定骨泥浓度下乳酸菌发酵骨泥产生离子钙的最佳条件。此外，对鲜骨泥液的营养成分与发酵后骨泥液的营养成分进行比较，结果表明乳酸菌发酵后的骨泥液中除离子钙含量明显升高以外，其它成分如氨基酸等的含量也有明显升高。     

猪传染性胸膜肺炎的研究进展

猪传染性胸膜肺炎(Porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的一种高度传染性和致死性呼吸道疾病.1957年英国Pattison等首次报道此病[1].此后,本病在欧洲、美洲、澳大利亚、日本、韩国等地均被发现.1990年我国的杨旭夫[2]首次正式确认了我国大型集约化养猪场存在PCP,同时分离出致病菌株,并确定了血清型.     

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌荚膜多糖研究概况

金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳房炎的一种主要致病菌,其中94%～100%的金黄色葡萄球菌都含有荚膜多糖.荚膜多糖共分11个血清型(CP1～CP11),而5型和8型占临床分离株的70%～80%,为优势血清型;由于荚膜多糖的抗吞噬作用和黏附作用,决定了金黄色葡萄球菌的致病性和免疫原性.因此,基于荚膜多糖的疫苗可能是更有效的抗奶...     

牛呼吸道合胞体病毒G蛋白抗原区原核表达及反应原性鉴定

本研究旨在获得重组牛呼吸道合胞体病毒（BRSV） G蛋白并对其进行反应原性鉴定。从NCBI上找出G基因的核苷酸序列，分析其抗原区域，利用Primer Premier 5.0软件设计1对特异性引物，利用RT-PCR方法扩增BRSV G基因片段，将目的片段连接到克隆载体pMD19-T后，对其进行双酶切鉴定和测序。将双酶切后的目的片段进行胶回收，构建重组质粒pET-32a-G，将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞，用Ni-IDA亲和层析法纯化经IPTG诱导表达的蛋白，并测定其浓度；通过SDS-PAGE和Western blotting方法对该蛋白进行分析与鉴定。结果显示，本试验成功克隆出大小约为567 bp的G基因，获得分子质量约为40 ku的可溶性重组蛋白，优化诱导条件后用SDS-PAGE对表达产物进行鉴定，在16℃、IPTG浓度1.2 mmol/L、诱导4 h时蛋白表达量最大；通过Western blotting检测发现，重组蛋白可与山羊源BRSV标准阳性血清发生特异性反应，说明该蛋白具有反应原性。综上，本研究成功表达并纯化了BRSV G蛋白，为建立BRSV抗体间接ELISA检测方法和BRSV亚单位疫苗的研制奠定了基础。     

鸡输卵管囊肿病病原的分离与鉴定

用病鸡的输卵管囊肿液中脱落的上皮细胞感染SPF鸡胚及BHK21、Vero、L929细胞,观察3～10 d鸡胚死亡情况及细胞生长情况,并进行病原分离、鉴定、检测等.结果为SPF鸡胚感染后盲传15代,1～11代基本无鸡胚死亡,12～15代鸡胚有死亡.细胞感染后第1代可见到CPE,敏感性L929>Vero>BHK21细胞,被感染的细胞及卵黄膜(第4代起)CF呈阳性;电镜观察到胞浆中有衣原体;Giemsa染色光镜下可见包涵体颗粒;碘染色及磺胺嘧啶敏感试验均呈阴性;病毒学及细菌学检测阴性;雏鸡感染试验阳性;病鸡肝、脾、输卵管等组织病理变化明显.