猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp基因的克隆与原核表达

将猪繁殖与呼吸综合征病毒RNA依赖性的RNA聚合酶(RdRp)基因进行克隆、表达,并获得纯化重组蛋白,为进一步研究猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp的功能奠定基础.以RdRp基因cDNA为模板,用PCR扩增出RdRp基因片段,应用定向克隆策略将扩增后片段与高效表达载体pET32a(+)重组,阳性克隆重组质粒经酶切及测序鉴定,IPTG诱导高效表达.PCR法扩增出720 bp的片段,酶切及测序鉴定获得正确的重组质粒,在大肠埃希菌LB21中表达得到分子质量约为46 ku的融合蛋白.成功克隆及表达了猪繁殖与呼吸综合征病毒RdRp基因.     

内蒙古地区绵羊肺炎支原体的分离鉴定及序列分析

本试验无菌采取内蒙古地区某发病羊场的绵羊病变肺脏组织,接种于支原体液体培养基进行分离培养后获得1株支原体,根据分离株的培养特性、形态学观察及生化试验等,初步鉴定为绵羊肺炎支原体。然后提取分离株的基因组,用通用引物体外扩增出分离株16S rRNA序列,将该序列与GenBank中已知33种支原体序列进行比较,结果表明该序列与绵羊肺炎支原体标准株Y-98的16S rRNA序列的同源性为99%,鉴定该分离株为绵羊肺炎支原体。     

鸡源葡萄球菌的生物学特性研究

本项研究对内蒙古呼和浩特和包地区５个养鸡场进行了鸡源葡萄球菌的分离鉴定,并对其主要生物学特性进行了研究。从５个养鸡场分离到４８侏葡萄球菌,经鉴定金黄色葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）２３株、表皮葡萄球菌（Ｓ．ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）４株、腐生葡萄球菌（Ｓ．ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ）３株、中间葡萄球菌（Ｓ．ｉｎｔｅｍｅｄｉｕｓ）３株、禽葡萄球（Ｓ．ｇａｌｉｎａｒｕｍ）３株、人型葡萄球（Ｓ．ｈｏｍｉｎｉｓ）２株、科恩氏葡萄球菌亚种２（Ｓ．ｈｏｈｎｉｓｕｂｓｐ．２）２株、猪葡萄球菌产色亚种（Ｓ．ｈｙｉｃｕｓｓｕｂｓｐ．ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｅｓ）２株、松鼠葡萄球菌（Ｓ．ｓｃｉｕｒｉ）２株、另有４株未能确定种。     

金黄色葡萄球菌CP8-ClfA-FnBPB偶联物的制备及其免疫学特性

以己二酰肼为间桥,碳二亚胺为偶联剂,将纯化的血清8型荚膜多糖和纯化的ClfA-FnBPB融合蛋白偶联制备偶联物,并在偶联的过程中确定其最佳质量比和偶联比.用制备的偶联物免疫小鼠,同时用间接ELISA法检测抗体水平,并对三免后2周的小鼠进行攻毒保护试验.结果显示,用化学方法制备的多糖-蛋白偶联物在其质量比为1:2时可成功偶联,计算得到偶联比为1:1.89.采用间接ELISA法检测抗体水平,二免后7d,偶联物免疫组可产生抗体,且抗体效价最高可达1∶6 400.阴性对照组和单独多糖组均没有抗体产生,而单独融合蛋白组在二免后产生了抗体反应,但抗体效价较低,最高时仅为1∶100.对小鼠进行攻毒保护的结果表明,偶联物组的攻毒保护率最高,可达80％,而阴性对照组、单独多糖组以及单独融合蛋白组的保护率分别为20％、30％和60％.     

猪葡萄球菌脱落毒素多重PCR检测方法的建立与初步应用

根据GenBank已发表的猪葡萄球菌的6种脱落毒素基因序列,设计合成了6对相应的特异性引物,通过特异性、敏感性和重复性试验建立了可行的多重PCR检测方法。用该方法对临床分离到的9株猪葡萄球菌进行检测,均扩增出了与预期大小相符的23SrDNA（662bp）条带;同时,其中6株分别扩增出了EXHA（316bp,2株）、EXHC（525bp,2株）和Shet-A（814bp,2株）基因特异性条带;另外3株均未扩增出任何毒素基因特异性条带,鉴定为无毒力菌株,以上结果与生化鉴定及单一PCR检测测序结果一致。结果表明,本试验所建立的多重PCR方法不仅操作快速方便、节约试验成本,而且具有高度特异性、敏感性和良好的重复性,可用于仔猪渗出性皮炎的诊断和猪葡萄球菌的快速鉴定。     

奶牛乳房炎克雷伯氏菌的基因分型

采用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术对内蒙地区37株奶牛乳房炎克雷伯氏菌进行了基因分型。试验结果表明：利用引物（P1）将37株菌分7个基因型，37株的56．8％（21／37）是同一个基因型。本结果对克雷伯氏菌性乳房炎的防治研究有重要的参考意义。     

内蒙古地区鸡源霉形体的分离和鉴定

本实验对内蒙古呼和浩特和包头地区某些鸡场病鸡取样进行霉形体的分离及其生物学特性的研究。结果分离到３株霉形体，其中２株为鸡败血霉形体（Ｍｇｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｓｅｐｔｉｕｍ，ＭＧ），１株为鸡霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｎａｒｕｍ）。所鉴定的菌株符合相应菌种的形态，染色特性及其他生物学特性的标准     

水溶性苜蓿多糖对肉仔鸡巨噬细胞吞噬功能的影响

植物多糖具有免疫调节作用 ,植物多糖的提取方法不同 ,其生物活性也不一样。本试验从资源广泛的紫花苜蓿茎、叶中提取水溶性苜蓿多糖 (WSAP) ,将WSAP以不同方式给予艾维茵肉仔鸡 ,检测其在肉仔鸡不同生长阶段巨噬细胞的吞噬能力。1　材料与方法180只 1日龄艾维茵肉仔鸡 ,随机分为 9组 ,每组 2 0只 ,其中第 9组为对照组。参考NRC (1994)肉鸡饲养标准 ,结合内蒙古地区特点 ,9组鸡的饲养环境、饲料品质、饲养方法、饲养管理等均一致。将水溶性苜蓿多糖以 3种方式给予艾维茵肉仔鸡。第 1种方式 :WSAP肌注组 ,分别在 1、 14日龄按如下剂量…     

鸡输卵管囊肿病病原的分离与鉴定

用病鸡的输卵管囊肿液中脱落的上皮细胞感染SPF鸡胚及BHK21、Vero、L929细胞,观察3～10d鸡胚死亡情况及细胞生长情况,并进行病原分离、鉴定、检测等.结果为SPF鸡胚感染后盲传15代,1～11代基本无鸡胚死亡,12～15代鸡胚有死亡.细胞感染后第1代可见到CPE,敏感性L929＞Vero＞BHK21细胞,被感染的细胞及卵黄膜(第4代起)CF呈阳性;电镜观察到胞浆中有衣原体;Giemsa染色光镜下可见包涵体颗粒;碘染色及磺胺嘧啶敏感试验均呈阴性;病毒学及细菌学检测阴性;雏鸡感染试验阳性;病鸡肝、脾、输卵管等组织病理变化明显.     

水溶性苜蓿多糖对肉仔鸡免疫功能的影响

将水溶性苜蓿多糖以3种方式给予艾维菌肉仔鸡，对T淋巴细胞转化率和血清中鸡新城疫抗体滴度进行了测定。结果表明：水溶性苜蓿多糖经3种方式给予肉仔鸡后，T淋巴细胞转化率有明显提高，与对照组相比，差异显著。血清中鸡新城疫抗体的滴度与对照组相比有增高趋势，但差异不显著。