绵羊Musclin基因真核表达载体的构建及其对肌细胞糖代谢和胰岛素作用的影响

为了研究绵羊Musclin对糖代谢和胰岛素作用的影响,本试验运用生物信息学软件对其结构特征进行预测,并构建绵羊Musclin基因真核表达载体。分4组对绵羊胎儿成肌细胞进行处理：空载体组（pcDNA3.1）、Musclin过表达组（pcDNA3.1-Musclin）、空载体+胰岛素组（pcDNA3.1+Insulin）、Musclin过表达+胰岛素组（pcDNA3.1-Musclin+Insulin）。然后分别在分化48和72 h时收集细胞,检测Musclin对正常或添加胰岛素培养的分化状态绵羊肌细胞糖代谢的影响,并利用荧光定量PCR检测相关基因表达的变化。酶切鉴定和测序结果表明,成功构建了表达载体pcDNA3.1-Musclin。生物信息学分析表明,绵羊Musclin蛋白含有一个信号肽,并在28氨基酸位点处存在一个酶切位点。亚细胞定位在胞外,属于分泌蛋白。其二级和三级结构以α螺旋和无规则卷曲为主。细胞试验表明,绵羊Musclin基因过表达明显减少了正常或胰岛素处理的绵羊肌细胞糖原含量并增加了培养液中葡萄糖含量。诱导分化72 h时,过表达Musclin抑制了Musclin过表达组和Musclin过表达+胰岛素组绵羊肌细胞中IRS1、AKT1、AKT2、GLUT1、GLUT4基因mRNA表达,并促进了GSK3β mRNA表达;而诱导分化48 h时,只有GLUT4基因的表达受到抑制。综上所述,绵羊Musclin基因过表达可以影响肌细胞糖代谢并减弱胰岛素的作用,二者相互协调以维持糖代谢稳态。其作用机制涉及到上述相关基因的表达变化,且与绵羊成肌细胞的分化状态有关。     

日粮中添加双氢青蒿素对宫内发育迟缓断奶仔猪胰岛素水平和肝发育的影响

旨在研究宫内发育迟缓（IUGR）对断奶仔猪胰岛素水平和肝发育的影响,以及日粮添加80 mg·kg^-1双氢青蒿素（DHA）对其修复作用。本试验选取10头正常出生重（NBW）仔猪和20头IUGR仔猪,分为NBW组、IUGR组和IUGR-DHA组,每组10头仔猪。NBW组和IUGR组饲喂基础日粮,IUGR-DHA组饲喂基础日粮+80 mg·kg^-1 DHA。所有仔猪21日龄断奶后饲喂相应日粮至49日龄,试验期为29天。结果显示,与NBW组相比,IUGR组显著降低了血清空腹葡萄糖（FBG）和胰岛素生长因子1（IGF-1）含量以及肝重量（P<0.05）,显著提高了空腹胰岛素（FINS）含量和胰岛素抵抗（HOMA-IR）指数以及肝脏指数（P<0.05）。同时,IUGR组断奶仔猪肝组织形态结构受损,出现明显的空泡化,细胞器结构受损,线粒体和内质网明显肿胀,细胞核严重变形。与IUGR组相比,IUGR-DHA组显著升高了肝重量和IGF-1含量（P<0.05）,显著降低了血清FINS含量和HOMA-IR指数,且肝组织形态结构得到明显改善。与NBW组相比,IUGR断奶仔猪显著下调了肝中IGF1、胰岛素受体底物1（IRS1）、磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）和蛋白激酶B（AKT2）的mRNA相对表达量（P<0.05）。与IUGR组相比,IUGR-DHA组显著上调了断奶仔猪肝中IRS1和AKT2的mRNA相对表达量（P<0.05）。结果表明：DHA对IUGR导致的断奶仔猪胰岛素抵抗以及肝发育受损具有一定的修复作用。本研究为畜牧生产中对IUGR的早期治疗以及DHA的推广应用提供了一定的理论依据。     

胰岛素突变体合成中不对称PCR条件的探讨

在胰岛素定点突变体合成中，对不对称PCR反应中突变位点的引物和末端引物的比例以及退火温度进行优化。结果表明：PCR反应5′末端引物与突变引物的配比为50：1～100：1；第2轮PCR反应退火温度在65～70℃较为理想。     

EGF和IGF-I对21日龄断奶仔猪内分泌功能的影响

选择3窝21日龄断奶的长白仔猪,随机分为自然哺乳、基础日粮.表皮生长因子,胰岛素样生长因子一I共4组,表皮生长固子和胰岛素样生长因41的剂量为17.86μg·d-I个.研究断奶前16及断奶后1,7, 14 d血清三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、胰岛素,生长激素、皮质醇、促肾上腺皮质激素水平的变化.结果表明,添加该剂量的表皮生长固子使21日龄断奶仔猪血清中胰岛素,皮质醇、促肾上腺皮质激素水平显著升高(p＜0.01),而对血清中三碘甲腺原氨酸、甲状腺素、生长激素水平没有显著的影响(p＞0刀5),表明表皮生长因子可能是通过增加胰岛素、皮质醇,促肾上腺皮质激素水平,促进肌肉蛋白质的合成与周转,进而促进细胞对氨基酸和葡萄糖的摄取,增加蛋白质、,脂肪、糖原的合成,刺激细胞的增殖与分化.而添加胰岛素样生长固子-I的效果不如表皮生长固子的作用明显.     

鸡胰岛素样生长因子-1基因的遗传多态性与其体重的关系

对宁都三黄鸡、万载康乐黄鸡两个鸡种共295个样本,采用PCR RFLP技术对胰岛素样生长因子—1(cIGF 1)基因的5'端调控区进行遗传变异研究,发现该调控区的扩增产物经PstⅠ酶切后出现3种基因型(AA、AB、BB)。结果表明:性别对宁都三黄鸡这3种基因型的分布呈现显著差异(P<0 05)。分析这3种基因型与其体重的关系发现,这3种基因型对初生重、30日龄体重、60日龄体重、90日龄体重及120日龄体重影响差异均不显著(P>0 05),但体现出AA型有较高体重的趋势,公母表现出一致的规律。在万载康乐黄鸡中,均呈现出杂合优势,在8周龄及18周龄时差异不显著(P>0 05),而在12周龄表现为差异显著(P<0 05)。宁都三黄鸡公母基因型分布均符合哈代 温格伯定律,而万载康乐黄鸡基因型分布不符合哈代 温格伯定律。     

胆囊收缩素主动免疫产蛋鸡的营养生理效应研究

用胆囊收缩素(CCK)主动免疫产蛋鸡，研究产蛋鸡血清和卵黄中CCK特异性抗体的产生规律及不同CCK免疫剂量对产蛋鸡生产性能和胰腺、胆囊发育及内分泌激素的影响。结果显示：用CCK-8主动免疫产蛋鸡，可以提高血清和卵黄CCK抗体水平，降低血液中CCK水平；CCK抗体的产生量在第1次加强免疫后即可接近高峰，第2、第3次加强免疫可维持较高的抗体水平。CCK主动免疫产蛋鸡后，对蛋鸡胰腺、胆囊发育、胰蛋白含量以及蛋鸡体内的生长激素、胰岛素和瘦素水平均没有显著影响，同时对蛋鸡采食量和料蛋比等生产性能也没有显著影响。用CCK主动免疫产蛋鸡，在不影响蛋鸡正常生理功能的同时，可以获得含特异性CCK抗体的卵黄。     

分别阻断α和β-AR对豚鼠胰岛素低血糖休克的影响

在 30IU/kg的剂量下豚鼠的胰岛素低血糖休克率为 6 6 .6 7% ,出现休克的潜伏期为 (16 5 .1± 4 7.5 8)min。用心得安阻断 β-AR后其休克率增加到 95 .6 5 % (P <0 .0 0 5 ) ,潜伏期缩短到 (118.3± 33.7)min(P <0 .0 2 5 )。用酚妥拉明阻断α一AR后 ,其休克率 5 3.33%和潜伏期 (15 5 .5± 32 .88)min ,均无显著变化 (P >0 .0 5 )。结果说明阻断β-AR可显著加速豚鼠胰岛素低血糖休克的发生 ,而阻断α-AR无影响     

微量元素铜对软骨细胞胰岛素样生长因子mRNA基因表达的影响

分离培养仔猪关节软骨细胞，从中提取总RNA，采用RT-PCR法扩增出关节软骨细胞中胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF—Ⅰ)的cDNA，与pMD18-T载体相连，转化JM109大肠埃希氏菌，提取质粒，经鉴定，所扩增的片段为目的片段。在此基础上培养仔猪关节软骨细胞，并在培养液中添加不同水平的铜，分别在第0、12、24、48h收集软骨细胞，提取总RNA，采用RT—PCR法扩增出IGF—Ⅰ的cDNA，以β-actin为内参，用凝胶分析系统对扩增出的cDNA进行扫描分析，计算IGF—Ⅰ mRNA基因表达的相对水平。结果，在细胞培养液中添加不同水平的铜能促进软骨细胞中IGF—Ⅰ mRNA基因表达，其中以铜浓度31．2μmol／L的效果最好。表明铜对软骨细胞的增殖作用是通过促进IGF—Ⅰ mRNA的表达来实现的。