绵羊Musclin基因真核表达载体的构建及其对肌细胞糖代谢和胰岛素作用的影响

为了研究绵羊Musclin对糖代谢和胰岛素作用的影响,本试验运用生物信息学软件对其结构特征进行预测,并构建绵羊Musclin基因真核表达载体。分4组对绵羊胎儿成肌细胞进行处理：空载体组（pcDNA3.1）、Musclin过表达组（pcDNA3.1-Musclin）、空载体+胰岛素组（pcDNA3.1+Insulin）、Musclin过表达+胰岛素组（pcDNA3.1-Musclin+Insulin）。然后分别在分化48和72 h时收集细胞,检测Musclin对正常或添加胰岛素培养的分化状态绵羊肌细胞糖代谢的影响,并利用荧光定量PCR检测相关基因表达的变化。酶切鉴定和测序结果表明,成功构建了表达载体pcDNA3.1-Musclin。生物信息学分析表明,绵羊Musclin蛋白含有一个信号肽,并在28氨基酸位点处存在一个酶切位点。亚细胞定位在胞外,属于分泌蛋白。其二级和三级结构以α螺旋和无规则卷曲为主。细胞试验表明,绵羊Musclin基因过表达明显减少了正常或胰岛素处理的绵羊肌细胞糖原含量并增加了培养液中葡萄糖含量。诱导分化72 h时,过表达Musclin抑制了Musclin过表达组和Musclin过表达+胰岛素组绵羊肌细胞中IRS1、AKT1、AKT2、GLUT1、GLUT4基因mRNA表达,并促进了GSK3β mRNA表达;而诱导分化48 h时,只有GLUT4基因的表达受到抑制。综上所述,绵羊Musclin基因过表达可以影响肌细胞糖代谢并减弱胰岛素的作用,二者相互协调以维持糖代谢稳态。其作用机制涉及到上述相关基因的表达变化,且与绵羊成肌细胞的分化状态有关。     

胰岛素对雏鸡心肌发育及其超微结构的影响

选取16只体重相近的健康雏鸡,随机分为两组。试验组每天定时腹腔注射生理剂量胰岛素,对照组腹腔注射等剂量的生理盐水。连续注射10d后称重,剖检取样并制片,通过分析心体比和透射电镜观察雏鸡心肌的超微结构变化,探讨胰岛素对雏鸡心肌发育及其超微结构的影响。结果表明,与对照组相比,试验组雏鸡的体重、心脏重和心体比没有显著变化,但其心肌的线粒体数量和横截面积明显增加。提示生理剂量胰岛素有促进心肌细胞代谢的作用。     

胰岛素对雏鸡肝脏发育及其超微结构的影响

为研究胰岛素对雏鸡肝脏发育及其超微结构的影响,16只体重相近的雏鸡被随机分为两组,试验组每天定时腹腔注射生理剂量胰岛素,对照组腹腔注射等剂量的生理盐水.连续注射10 d后称重,取样并制片,分析肝体比并利用透射电镜对肝脏的超微结构变化进行观察.结果表明:与对照组相比,试验组雏鸡的体重、肝脏重和肝体比没有明显变化,但其肝脏的线粒体数量明显增加.提示生理剂量胰岛素可以刺激肝细胞线粒体的发生,进而促进肝脏的代谢作用.