斑点免疫金渗滤法检测鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌抗体的应用研究

将鸡伤寒沙门氏菌LPS抗原包被于渗滤盒检测区（T区），针对沙门氏菌O9抗原单克隆抗体3-47-0包被在质控区（C区），用胶体金标记鸡伤寒沙门氏菌LPS抗原，建立了一种抗原夹心法快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌抗体的斑点免疫金渗滤法（DIGFA）。DIGFA比玻板凝集试验（PAT）灵敏度高，人工感染鸡试验表明在感染后第7d即可从32只鸡中的7只检测到抗体，在时间上早于PAT。722份现场血清样品的检疫结果表明，DIGFA的阳性检出率稍高于PAT，阳性样品抗体几何平均滴度DIGFA大于PAT法（P〈0．05）。DIGFA的结果得到细菌分离试验的验证。这些结果表明DIGFA快速、灵敏、准确，为鸡伤寒和鸡白痢的检疫提供了一个新的有效手段。     

麻鸭白细胞介素17的原核表达及鉴定

为表达麻鸭白介素17(duIL-17),本研究提取ConA刺激的麻鸭脾脏淋巴细胞总RNA,RT-PCR扩增duIL-17基因片段,将该片段插入克隆载体pCR2.1中构建重组质粒pCR2.1-duIL17.将duIL-17基因片段亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组质粒pGEX-duIL17,将其转化到大肠杆菌BL21中,IPTG诱导表达.测序结果显示,duIL-17与参考序列(EU366165.1)相比较第174位碱基由C突变为T,并且为沉默突变.SDS-PAGE和western blot分析显示,诱导表达的重组蛋白GST-duIL17主要以包涵体形式存在,分子量大小约为45 ku,duIL-17与抗鸡IL-17抗体具有良好反应性.本研究为制备duIL-17单克隆抗体提供了实验依据.     

病原性大肠杆菌人工感染鸡外膜蛋白抗体和脂多糖抗体的测定

以提纯的外膜蛋白（Ｏuter membuane puoteins,ＯＭＰs）作包被抗原,应用酶联免疫吸附试验（Ｅnzyme-linked immunosorbant assay,ＥＬＩＳＡ）,测定了禽病原性大肠杆菌Ｏ １８－５６６、Ｏ７８－１６６分离株人工感染鸡的ＯＭＰs抗体。上述分离株２次攻毒鸡的ＯＭＰs抗体高峰期在攻毒后的３～５周;同时,我们以间接血凝试验（Ｉndirict hemagglutination tist,ＩＨＴ）测定了其脂多糖（Ｌipopolysacchauide,ＬＰＳ）抗体,该抗     

减毒鸡沙门氏菌安全性和免疫效力初步研究

本研究将减毒鸡沙门氏菌９７Ａ、９７Ｂ分别经口服、皮下注射或滴鼻接种１日龄ＳＰＦ鸡和伊莎鸡,结果表明,９７Ａ株对１日龄雏鸡有良好的安全性,而９７Ｂ株仍有部分毒力。实验室免疫效力试验显示,９７Ａ能提供较强的免疫保护作用,表明９７Ａ是一株较理想的疫苗候选林。     

我国食源性人兽共患细菌病流行现状及其防控对策

食源性疾病是食品安全的主要问题,世界卫生组织(WHO)将食源性疾病定义为:"通过摄食进入人体导致人体惠感染性或中毒性的疾病".这里包括了由食品生物性污染和化学物质残留引起的食源性疾病.近年来,国内外食源性人兽共患细菌病事件频频发生,在我国,由于食物链中病原细菌污染及其造成的食源性疾病也屡见不鲜.另外,随着抗菌药物的广泛应用,细菌耐药性日趋严重,细菌耐药性也助推了食源性人兽共惠细菌病的流行.由此可见,人兽共患病原细菌是引起食源性疾病的主要原因之一,已成为威胁人们健康的重要公共卫生问题.因此,我国应加强对食源性人兽共惠细菌病的研究和防控工作.     

鸡α干扰素基因的原核表达及其活性测定

应用RT-PCR技术,从被刺激诱导的鸡脾脏淋巴细胞中扩增鸡α-干扰素(ChIFN-α)基因cDNA,经克隆和测序后,构建原核表达重组质粒pGEX-proChIFN-α(全长序列)和pET-ChIFN-α(不含信号肽序列),并分别转化相应的表达菌.重组菌经IPTG诱导,SDS-PAGE结果表明,ChIFN-α基因均获得表达,重组蛋白大小分别为45 ku、26ku左右,表达的蛋白以包涵体形式存在.表达产物经变性、提纯、复性,重组蛋白的含量约为1 mg/mL.复性后的ChIFN-α能够在鸡胚成纤维细胞上抑制H5N1禽流感病毒的复制;用水泡性口炎病毒检测结果表明,重组ChIFN-α具有较高的抗病毒作用,其生物学活性达到2×106 u/mg.     

分子微生物学在疫苗学中的应用与展望

19世纪后叶和 2 0世纪早期是微生物学发展的黄金时代 ,对控制人类和动物烈性传染病作出了重大贡献。分子微生物学的发展 ,对免疫学尤其是疫苗学带来了巨大推动力。简要概述了疫苗的分子技术、全基因组定序、核酸作为免疫原等发展态势 ,并展望了新世纪中疫苗学的任     

肠炎沙门氏菌鞭毛蛋白基因快速克隆和鉴定

以提纯的肠炎沙门氏菌染色体ＤＮＡ为材料,在一对含有ＣＵＡＣＵＡＣＵＡＣＵＡ的特殊引物引导下,应用ＰＣＲ扩增出鞭毛蛋白基因ｆｌｉＣｇ．ｍ,允１．８ｋｂ左右大小,然后以ＵＤＧ法快速克隆到质粒,ｐＡＭＰ１０中,转化第１宿主大肠杆菌ＴＧ１或大肠杆菌ＤＨ５ａ,在氨苄青霉素平板上筛选转化子,小量制备重组质粒ＤＮＡ,再转入第２宿主大肠杆菌ＬＣ－２ａ（ｈａｇ－,ｒｅｃＡ－）,所有转化子均出现动力。其中的一个克隆ｐ     

肠炎沙门氏菌鞭毛蛋白基因快速克隆和鉴定

以提纯的肠炎沙门氏菌染色体ＤＮＡ为材料,在一对含有ＣＵＡＣＵＡＣＵＡＣＵＡ的特殊引物引导下,应用ＰＣＲ扩增出鞭毛蛋白基因ｆｌｉＣｇ,ｍ,约１．８ｋｂ左右大小,然后以ＵＤＧ法快速克隆到质粒ｐＡＭＰ１０中,转化第１宿主大肠杆菌ＴＧ１或大肠杆菌ＤＨ５α,在氨苄青霉素平板上筛选转化子,小量制备重组质粒ＤＮＡ,再转入第２宿主大肠杆菌ＬＣ－２ａ（ｈａｇ－,ｒｅｃＡ－）,所有转化子均出现动力。其中的一个克隆ｐＡＭＰ·ＧＭ经动力和动力抑制试验、血清学试验、鞭毛电镜观察及部分序列测定,均证实ｐＡＭＰ·ＧＭ中载有肠炎沙门氏菌鞭毛蛋白基因ｆｌｉＣｇ,ｍ。ｆｉｌＣｇ,ｍ克隆成功为寻求肠炎沙门氏菌防制新方法奠定了基础,研究中建立的快速克隆策略为广泛、深入地开展ｆｌｉＣ研究提供了便捷的新途径。     

表达绿色荧光蛋白重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建

应用DNA重组技术构建了表达绿色荧光蛋白（GFP）的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌。用EcorⅠ和NcoⅠ将pEGFP质粒中的绿色荧光蛋白基因EGFP切下，克隆进表达载体质粒pYA3334的EcorⅠ和NcoⅠ位点之间，构建成重组表达质粒pYAGFP，然后转化大肠杆菌X6212、中间宿主X3730、终末宿主X4550。X4550于LB培养基上呈绿色，在荧光显微镜下观察，整个菌体发绿色荧光。构建的表达GFP的重组鼠伤寒沙门氏菌为减毒沙门氏菌活载体基因工程疫苗的研制提供一个良好模型。