特别策划：牛病新技术的研究不要忽视现有防控技术的应用——牛新发传染病流行概况及防控措施

第三届中国兽医大会的牛羊病诊疗技术专场上，我们可以明显感觉到牛羊病的防治技术似乎并没有猪，禽，甚至水产技术专场的报告引起更多代表的关注，这是为什么呢？中国农业科学院哈尔滨兽医研究所的于力研究员在介绍牛新发病的同时，揭开了这层层“疑雾”。由于我国牛病的研究比较滞后，猪病和禽病发生后都会有许多的技术专家，诊断方法和科学的防控方案来支持，但是牛病的诊断技术相对落后，可用的防控疫苗种类很少．     

新疆维吾尔族、汉族学生体质状况的比较分析

本文应用文献资料法、体质测试法、体育与医学统计法、逻辑分析法和数理统计法等研究方法,对新疆18-20岁维、汉学生的身体形态、机能及部分身体素质指标进行了系统的比较、分析。为新疆民族体质的研究,民族教育方针、政策的制定,提供基础资料和科学依据。     

健康牛、羊血清及牛奶中游离色氨酸的微量测定

用三氯醋酸沉淀蛋白,用SS-2锥状和平板型超滤膜离心超滤及CXA-50超滤膜压滤超虑截留蛋白,用荧光法测定牛、羊血清和牛奶中总的色氨酸(Trp)和游离型Trp含量。重复试验和回收试验结果表明,除压滤超滤法测定值和回收率偏低外,其余方法均适用于临床和科研工作。应用上记方法测定了235例总Trp和119例游离型Trp正常值:牛血清正常值总Trp为42.21±10.82μM/L(游离型Trp为4.61±1.16μM/L)、羊血清总Trp为33.07±.70μM/L(游离型Trp为3.19±1.03μM/L)、牛奶总Trp为3.07±0.86μm/L。但由于动物品种、饲料组成及5采样季节和时间不同,正常值变动范围较大。     

用于ELISA的牛白血病病毒抗原的制备

人工感染牛白血病病毒(BLV)的绵羊血清IgG与溴化氰活化的Sepharose4B偶联,制成免疫吸附柱Ⅰ:用兔抗牛血清IgG与之偶联,制成免疫吸附柱Ⅱ.将BLV粗提抗原经柱Ⅰ和柱Ⅱ亲和层析后获得无色透明抗原。该抗经AGID试验表明具有gp和P抗原活性,回收率分别为38.8％和51.8％;经SDS-PAGE分析表明,含有5种蛋白组分,分子量分别为15、24、64、70和80K道尔顿;经薄层扫描,测得5种组成的百分含量之和为72.08。将提纯抗原同提纯各阶段不同纯度的抗原同时进行ELISA测定,结果以提纯抗原最理想,本底很浅,工作浓度仅为5μg/ml。     

表达小反刍兽疫病毒F基因重组腺病毒的构建及对小鼠的免疫原性

为构建表达小反刍兽疫病毒(PPRV)F蛋白的重组腺病毒,本实验合成密码子优化的PPRV F基因,将其克隆至腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,并以Pme I线性化后转化含有人5型腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞,通过细菌内同源重组构建表达PPRV F蛋白的重组腺病毒质粒pAdV-F,经Pac I线性化后转染AD-293细胞,获得重组腺病毒rHAdV-F.经PCR和Dot-ELISA鉴定,F蛋白在AD-293细胞中获得表达.该重组腺病毒与野生型腺病毒复制能力相近,但病毒滴度略低.间接ELISA方法检测显示rHAdV-F可以诱导小鼠产生抗PPRV特异性体液免疫应答.     

O型泛亚谱系口蹄疫病毒cDNA感染性克隆的建立

本研究采用RT-PCR技术将O型口蹄疫病毒(FMDV)O/YS/CHA/05株全长基因组分4个cDNA片段进行克隆、拼接,构建了具有感染性的FMDV cDNA克隆pOKT7-OY/S/CHA/05.将线性化的pOKT7-O/YS/CHA/05在细胞外转录获得的病毒RNA转染BHK-21细胞,经培养可见典型的细胞病变(CPE).同时,将线性化的pOKT7-O/YS/CHA/05与含有编码T7 RNA聚合酶的真核表达重组质粒共转染BHK-21细胞,同样也观察到典型的CPE.对拯救的病毒进行RT-PCR扩增、酶切和序列分析鉴定表明,拯救病毒含有不同于亲本病毒的分子标记,即在病毒核酸的3 510位人工消除了Xba Ⅰ酶切位点.免疫电镜观察和间接免疫荧光试验进一步表明,拯救出了FMDV.病毒生长比较试验表明,拯救病毒与亲本病毒具有相似的增殖特性.本研究构建了O型口蹄疫病毒的感染性克隆并获得了拯救病毒,为深入研究FMDV的致病机理以及开发新型疫苗提供了有效的反向遗传操作平台.     

噬菌体展示技术与病毒抗原表位研究

噬菌体展示技术(Phage display technology)始创于1 985年,Smith首次将外源基因插入丝状噬菌体f1的基因Ⅲ,使目的基因编码的多肽以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面,从而创建了该技术[2].     

山羊痘病毒p32基因原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPV p32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti).表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV标准阳性血清具有良好的抗原性.以纯化的重组p32-opti蛋白作为ELISA包被抗原,建立间接ELISA抗体检测方法.该方法检测小反刍兽疫、蓝舌病和口蹄疫阳性血清均无交叉反应;与中和试验(VNT)比较,两者的符合率为95.7%;ELISA批内和批间重复性试验显示,OD值的变异系数小于10%.上述结果表明.该ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性.对来自黑龙江、内蒙古和新疆自治区的390份山羊和绵羊血清进行检测,抗体阳性率为80.2%,表明这些地区的山羊和绵羊群普遍存在羊痘病毒抗体.本研究建立的间接ELISA方法可用于GPV感染的流行病学调查以及疫苗接种动物的抗体水平监测.