米曲霉AS 3.951发酵豆粕对大菱鲆摄食生长的影响

以初始平均体重2.07 ± 0.02g的大菱鲆（Scophthalmus maximus L.）为实验对象,进行为期70 d的摄食生长实验,研究不同添加水平的发酵和未发酵豆粕对大菱鲆摄食生长的影响。用米曲霉（Aspergillus oryzae）AS 3.951对豆粕进行固态发酵。经检测,与未发酵豆粕相比较,发酵豆粕中胰蛋白酶抑制因子、植酸、大豆皂甙、水苏糖和棉籽糖的含量分别下降了46.5％,26.6％、11.7％、30.1％和19.7％。实验共制作6种等氮等能的饲料,其中以全鱼粉饲料为对照饲料;未发酵豆粕蛋白分别替代25％、40％和55％的鱼粉蛋白;发酵豆粕蛋白分别替代40％和55％的鱼粉蛋白。结果表明,饲料中添加一定量的豆粕对大菱鲆的成活率没有显著的影响（P>0.05）。饲料中未发酵豆粕蛋白替代鱼粉蛋白的水平为25％时,对大菱鲆的摄食率、特定生长率、饲料效率和蛋白质效率均没有显著的影响,但替代水平为40％和55％时,以上指标显著降低（P<0.01）。饲料中发酵豆粕替代水平为40％时,未降低大菱鲆的摄食率、特定生长率、饲料效率和蛋白质效率,替代水平为55％时,显著降低大菱鲆的摄食率和特定生长率（P<0.01）。     

饲料中不同种类的碳水化合物对大菱鲆生长性能和代谢反应的影响

为探讨在低蛋白水平(40%)下,饲料中不同种类的碳水化合物(葡萄糖、蔗糖和糊精)对大菱鲆幼鱼[(8.12±0.04)g]生长、成活、饲料利用、体组成和血液生理生化指标等的影响,实验在对照组饲料中未添加可消化碳水化合物,含40%的蛋白质和18%的脂肪,然后在对照组饲料的基础上,调节脂肪水平为12%,分别添加15%的葡萄糖、蔗糖和糊精配制3组实验饲料。在流水式养殖系统中进行9周的大菱鲆生长实验。结果显示,各处理组大菱鲆成活率均高于95.24%,并且各组间无显著差异;对照组和糊精组大菱鲆的增重率(WGR)和特定生长率(SGR)均显著高于葡萄糖组和蔗糖组。各组间的日摄食率(DFI)没有显著差异。对照组和糊精组饲料效率(FE)显著高于蔗糖组,但葡萄糖组FE与其它各组无显著差异;各处理组间蛋白质和脂肪表观消化率(ADC)未受碳水化合物种类的显著影响,而可消化碳水化合物的ADC依次为:葡萄糖组>糊精组>蔗糖组(。葡萄糖组的能量ADC最高,蔗糖组的最低;除对照组肌肉脂肪含量显著高于其它各组外,碳水化合物的种类对大菱鲆肌肉常规组成及糖原含量无显著影响,但显著影响了肝脏的脂肪和糖原含量。大菱鲆肝脏脂肪含量依次为对照组>糊精组>蔗糖组>葡萄糖组,肝脏糖原含量依次为葡萄糖组>蔗糖组>糊精组>对照组;不同碳水化合物种类对大菱鲆幼鱼血浆葡萄糖含量没有显著影响,但显著影响血浆总氨基酸、胰岛素、总胆固醇(CHO)和甘油三酯(TAGs)的含量。结果表明,本实验条件下,大菱鲆对糊精的利用效率优于葡萄糖和蔗糖,并且不同种类的碳水化合物通过糖脂关联代谢等途径对大菱鲆幼鱼的体组成和血液生理生化指标造成一定的影响。     

大菱鲆种质资源研究与开发

综合介绍了大菱鲆种质资源的分类、自然分布和生物学特性。从生化和分子生物学方面阐述了大菱鲆自然群体遗传结构及国内外研究现状。详述了大菱鲆野生资源的利用和养殖开发现状．特别是我国对引进的大菱鲆种质资源的养殖开发。指明了我国目前在引种及养殖方面存在的不足．提出了建立全国性大菱鲆良种引育中心,以保证我国大菱鲆养殖业的持续、稳定、健康发展的建议。     

大菱鲆热休克蛋白90基因cDNA的克隆及其表达特征

从大菱鲆脾脏cDNA文库中筛选到HSP90,采用基因克隆方法获得含有1个97bp的5’UTR、2190bp的开放阅读框和501bp的3’UTR的全长cDNA序列。整个开放阅读框编码729个氨基酸,包含HSP90家族5个保守信号区。与其他物种已知序列同源比对的结果显示,此编码氨基酸更接近于热休克蛋白90β亚型(HSP90β),与牙鲆HSP90β的同源性高达96.6%。RT-PCR分析表明,在胚胎发育初期就能检测到HSP90,其表达量伴随着胚胎发育,先增加后减少,在尾芽期达到最高。HSP90在健康大菱鲆各供试组织中均有表达。经鳗弧菌感染处理后,在胚胎细胞中也有HSP90的强烈表达。结果显示,大菱鲆HSP90cDNA序列为HSP90β,是一种组成型表达的基因,其在维持正常生理机能、胚胎发育和应激中发挥重要的作用。     

大菱鲆体重和体尺性状联合GWAS分析

为了揭示大菱鲆(Scophthalmus maximus)体重和体尺性状的分子遗传机制，探寻用于改良目标性状的分子标记及候选基因，本研究以大菱鲆育种群体为研究对象，分别测量其体重、体长、体宽和尾柄宽性状的表型值，利用简化基因组测序技术(2b-RAD)获得相应基因型数据，进行全基因组关联研究(Genome-wide association study, GWAS)，筛选与大菱鲆体重和体尺性状显著关联的数量性状核苷酸(Quantitative trait nucleotides, QTNs)遗传位点。结果显示，以多性状线性混合模型(mvLMM)对体重–体长和体长–体宽–尾柄宽2个性状组合进行多性状GWAS分析，分别检测到9个和2个一因多效QTNs；以单一性状线性混合模型(LMM)对各个性状进行GWAS分析，在体重性状中检测到4个与之显著关联的QTNs，在体长和体宽性状中各检测到1个QTN，而在尾柄宽性状中则没有检测到显著的遗传位点。比较2种模型的结果，发现mvLMM相较于LMM能够检测到更多QTNs，且检测到的QTNs为更具生物学意义的一因多效QTNs。本研究首次利用mvLMM和LMM对大菱鲆体重和体尺性状进行联合GWAS分析，共筛选到17个显著的QTNs，其中，有4个QTNs被重复检测到。以这些检测到的QTNs为探针，在大菱鲆全基因组上找到了距离其最近的12个候选基因，它们可能是影响大菱鲆体重和体尺性状的重要候选标记和功能基因，本研究为大菱鲆体重和体尺性状的分子标记辅助选育提供了理论素材和参考。     

大菱鲆4个不同地理群体生长性能的比较

在相同的养殖条件下,选取英国、法国、丹麦和挪威4个不同群体的大菱鲆ScophthalmusmaximusL.,进行了1年生长性能的比较。结果表明,在3、6、9和12月龄,群体间体长和体重的差异均较大,在每一个生长时期各群体体长和体重的差异排序相同。4个群体的大菱鲆体长以线性速度生长,体重以指数形式生长。综合0~3月龄、0~12月龄的绝对增重率和3~6、6~9、9~12月龄的绝对增重率和瞬时增重率,在生长速度上依次为法国、英国、丹麦和挪威群体,在生长差异上丹麦和挪威及英国和法国之间的差异较小,丹麦、挪威和英国、法国之间的差异较大。大菱鲆各群体在3、6、9和12月龄的体重变异系数分别为22.84%~33.48%、21.36%~30.30%、19.64%~26.97%和21.06%~35.07%,认为这4个群体的大菱鲆均可作为选育的基础群体。     

大菱鲆(Scophthalmus maximus)PRL基因、Na+-K+-ATPase a1基因对盐度胁迫的响应

采用荧光定量PCR技术对不同盐度胁迫下各时间点大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼鱼肠、鳃中催乳素(PRL)基因和Na+-K+-ATPase a1两种基因的表达量进行检测。以盐度30为对照组，盐度5、10、40和50为实验组进行数据分析。结果显示，两种基因在两种组织中均有表达，且基因的表达量具有组织和时间特异性。肠组织PRL、Na+-K+-ATPase a1基因的表达量，在盐度50和5条件下，随胁迫时间的延长呈先升高后降低的变化趋势；鳃组织PRL基因表达量，在盐度50和盐度5条件下，随胁迫时间延长先升高后降低，而Na+-K+-ATPase a1基因表达量在低盐条件下(盐度5)没有显著变化，在高盐条件下(盐度50)随时间延长呈现先降低后升高的变化趋势。在肠组织中，两种基因存在极显著的协同作用，随着盐度的升高，两种基因的表达量都呈现先升高后降低的趋势，且相关系数均接近于1；在鳃组织中，在10–40盐度范围内，两种基因的表达存在明显的拮抗作用，当PRL基因的表达量呈现升高(或下降)趋势时，Na+-K+-ATPase a1基因的表达量呈现下降(或升高)趋势，且两种基因的相关系数均为负值。研究表明，PRL具有抑制Na+/K+-ATP酶活性的作用，为今后盐度胁迫分子调控机理研究提供理论依据。