溶氧水平对翘嘴鲌及其新品种全雌1号的影响研究

翘嘴鲌对低氧环境较为敏感，因此，本研究以翘嘴鲌及其新品种全雌1号为研究对象，探讨不同溶氧水平对其生理指标、抗氧化酶活性、肝脏组织学的影响。结果表明，翘嘴鲌及全雌1号从浮头点到死亡点，溶解氧值曲线均呈逐渐下降趋势，且总体上翘嘴鲌的溶解氧值均略高于全雌1号；且翘嘴鲌及全雌1号在20℃下的浮头点、昏迷临界点、昏迷点显著高于30℃时的相应值。翘嘴鲌及全雌1号超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性均为先逐渐升高，在12 h达最大值，之后下降，至24 h仍高于0 h的值；其中全雌1号SOD指标升高时升高幅度更大，活性下降时下降幅度更小，且总体上全雌1号SOD指标在相同低氧胁迫时间下比翘嘴鲌活性更高。组织学观察结果显示，随着低氧胁迫时间的持续，肝细胞逐渐无序排列，肝细胞间血窦扩张，肝细胞融合等现象愈加明显，且肝组织空泡化变性加剧。即低氧胁迫使肝出现病理学组织损伤变化，且损伤程度随低氧时间的持续逐渐增强。总之，本研究推测全雌1号对低氧环境的耐受力可能略微高于普通翘嘴鲌；在实际生产过程中，要实时监测水中的溶氧，避免长期缺氧对机体造成影响。     

基于微卫星标记的瓯江唇鱼骨增殖放流效果评估

为评估瓯江唇[HT5”,7]鱼[KG-*3]骨(Hemibarbus labeo)的增殖放流效果,利用已开发的10对微卫星引物,基于亲子鉴定技术,开展了瓯江增殖放流唇[HT5”,7]鱼[KG-*3]骨对野生群体的资源贡献率评估。结果显示:28尾繁殖亲本群体和103尾回捕群体中共检出等位基因数(N_a)133个,单个位点等位基因数(N_a)、多态信息含量(PIC)、观测杂合度(H_o)和期望杂合度(H_e)的变化范围分别为7~19个、0.501~0.883、0.328~0.787和0.523~0.897,对应的平均值分别为13.3个、0.703、0.598和0.737,10对微卫星引物均表现为高度多态性,可用于后续亲缘关系鉴定。亲缘关系分析表明,在亲本性别未知的情况下,非亲排除率(NEP)范围为0.043～0.400,10座位累计非亲排除率(CEP)达到0.999 999 62。亲子鉴定结果表明,在回捕的103尾唇[HT5”,7]鱼[KG-*3]骨个体中,3尾确认来源于增殖放流群体,由此推算出放流群体对野生群体的资源贡献率为2.91%。综合分析表明,瓯江唇[HT5”,7]鱼[KG-*3]骨增殖放流具有一定的资源恢复效果。     

杂交黄颡鱼、雄性瓦氏黄颡鱼和黄颡鱼的形体指数及肌肉营养组成比较分析

为评估商品规格杂交黄颡鱼的食用营养价值,对杂交黄颡鱼[Pelteobagrus fuividraco(♀)×P.vachelli(♂)]、雄性瓦氏黄颡鱼和黄颡鱼商品鱼的形体指数、出肉率和肌肉的营养组成、氨基酸含量及脂肪酸组成进行了比较分析。结果表明,杂交黄颡鱼的肥满度与雄性黄颡鱼无显著差异;杂交黄颡鱼的胴体率、含肉率和脏体比均与雄性瓦氏黄颡鱼及雄性黄颡鱼无显著差异(P0.05)。杂交黄颡鱼肌肉水分含量最高,脂肪含量最低,而蛋白质和灰分含量与雌、雄黄颡鱼均无显著差异;雄性瓦氏黄颡鱼肌肉中水分、蛋白质和灰分的含量较低,脂肪含量最高;杂交黄颡鱼肌肉的氨基酸总量和7种人体必需氨基酸与黄颡鱼无显著差异(P0.05),但均显著高于雄性瓦氏黄颡鱼(P0.05);杂交黄颡鱼肌肉脂肪中C22:6n3的比例和n3系列不饱和脂肪酸总量的比例与雌性黄颡鱼无显著差异(P0.05),但均高于雄性瓦氏黄颡鱼,均低于雄性黄颡鱼。试验表明,杂交黄颡鱼的体形和出肉率与雄性黄颡鱼一致,其肌肉为低脂蛋白食品,营养价值与黄颡鱼接近。     

草鱼呼肠孤病毒HZ08株抗体IPMA检测方法的建立及应用

为建立一种检测草鱼呼肠孤病毒HZ08株(HZ08)抗体的免疫学方法,本实验以接种HZ08病毒的细胞培养板为抗原板,以免疫弱毒疫苗的草鱼血清为抗体,通过反应条件优化,建立了检测GCRV HZ08血清抗体的免疫过氧化物酶单层细胞实验(IPMA)方法,并对该方法特异性、敏感性、重复性、与ELISA检测结果的符合率及对临床血清样品的检测效果等进行了验证。结果显示,HZ08株种毒按照1×103拷贝/μL浓度接种后72h固定,HRP-Ig G二抗1∶1000稀释,待检血清1∶100稀释时效果最佳;该IPMA方法与草鱼阴性血清、免疫细菌三联疫苗的草鱼血清、感染GCRV JX0901(GCRVⅠ型)的草鱼血清无交叉反应;GCRV HZ08株阳性血清稀释至1∶800时仍能检出;批内和批间重复性实验显示,该方法具有良好的重复性;符合性实验结果显示,该IPMA方法与ELSIA方法的阳性和阴性符合率分别为95.7%和87.5%;用建立的IPMA方法检测草鱼出血病弱毒疫苗免疫草鱼,免疫2周后抗体水平达到峰值;对现地送检的126份草鱼血清样本进行检测,平均检出阳性率为72.2%。研究表明,建立的HZ08株IPMA方法特异性强、重复性好、敏感性高,为GCRVⅡ型的流行病学调查、疫苗免疫效果评价及抗原抗体检测提供了一种有效的检测手段。     

一株湖北源大口黑鲈蛙病毒的分离鉴定

采用电子显微镜观察和细胞培养等技术, 从湖北黄陂某养殖场患病大口黑鲈(Micropterus salmoides)体内发现并分离到一株蛙病毒。患病大口黑鲈的临床症状主要表现为体表出血、溃疡, 肝脏发白。将病鱼内脏组织匀浆超微滤液接种鳜脑细胞系(mandarin fish brain, MFB)细胞能产生典型细胞病变效应(cytopathic effect, CPE), 病毒滴度达到 10^8.36±0.15 TCID₅₀/mL。细胞培养病毒的超薄切片电镜观察结果显示, 细胞质中存在大量直径约为 150 nm 左右的正六边形病毒粒子, 呈晶格排列。细胞培养病毒的人工感染大口黑鲈试验结果显示, 7 d 内试验鱼死亡率高达 100%, 其临床症状与自然发病鱼相似。采用大口黑鲈病毒(largemouth bass virus, LMBV)的特异性 PCR 检测方法对患病鲈组织样品和细胞培养病毒样品进行检测, 均能扩增出 241 bp 的单一目的条带。进一步根据 GenBank 中 LMBV 主衣壳蛋白(major capsid protein, MCP)基因序列设计特异性引物, 均能从上述样品中扩增出 1392 bp 的 MCP 基因开放阅读框(open reading frame, ORF)全长。将 MCP 氨基酸全序列进行比对, 结果显示其与 Santee-Cooper 蛙病毒、孔雀鱼病毒 6 型及大口黑鲈溃疡综合征病毒的 MCP 氨基酸序列同源性高达 100%。系统进化结果显示, 与感染鱼类的虹彩病毒科蛙病毒属病毒, 如鳜鱼蛙病毒、Santee-Cooper 蛙病毒、孔雀鱼病毒 6 型和大口黑鲈溃疡综合征病毒等聚成一支。这些结果证明, 该分离株为虹彩病毒科蛙病毒属的成员, 暂命名为大口黑鲈蛙病毒(largemouth bass ranavirus, LMBRaV)湖北株 LMBRaV-HB001。病毒敏感细胞系筛选试验结果表明, 病毒 LMBRaV-HB001 感染鲤上皮瘤细胞(epithelioma papulosum cyprinid, EPC)、草鱼性腺细胞(grass carp ovary, GCO)、大鲵肌肉细胞(giant salamander muscle, GSM)和鲫脑组织细胞(gibel carp brain, GiCB)均能产生典型 CPE, 病毒滴度可达 10^8.0 TCID₅₀/mL 以上。本研究首次在湖北省养殖大口黑鲈体内分离与鉴定了 LMBRaV 病毒, 建立了病毒的细胞培养方法, 为进一步研究该病毒的传播、诊断和防控技术提供了重要参考。     

哈维氏弧菌GYC1108-1胞外蛋白酶的制备及免疫原性研究

胞外蛋白酶(ECPase)是哈维氏弧菌GYC1108-1胞外产物的主要致病因子,经鉴定其为半胱氨酸蛋白酶,分子量约55kD,能够分解脱脂奶中的酪蛋白,命名为1108-ECPase。本实验建立了胞外蛋白酶活性平板法检测1108-ECPase和YZ-ECPase的相对酶活(YZ为由本实验室构建的能够分泌目的蛋白酶的重组菌),并利用这个方法确定了细菌分泌ECPase达最高峰的培养时间为36h,粗提ECPase最适的饱和硫酸铵浓度为70%。GYC1108-1和YZ培养上清经硫酸铵盐析,SephadexG-25凝胶过柱后,得到较为纯化的1108-ECPase和YZ-ECPase。选择白油、蜂胶和弗氏3种不同佐剂与适量抗原混匀,分别免疫3只ICR小鼠,并设不加佐剂免疫组及空白组作为对照。3次免疫后制备小鼠血清,间接ELISA测定抗体效价,除空白对照外,其他8组小鼠的免疫血清效价达1∶1.6×104～1∶2.56×105,免疫组的效价从高到低依次为弗氏白油蜂胶不加佐剂,不同佐剂的免疫效果依次为:弗氏白油蜂胶。免疫印迹实验结果表明,小鼠血清在55kD处有明显的反应条带。     

瓯江干流丽水段渔业资源现状评估与修复研究

为了科学有效地保护瓯江渔业资源及其生态环境， 2009年6月至2010年3月逐月按照《内陆水域渔业自然资源调查方法》，采用实地调查、走访了解等多种手段对瓯江干流丽水段的渔业资源现状进行了调查研究，同时运用数学统计法和多样性指数法将本次调查结果与1972年瓯江水系渔业资源调查结果进行了对比分析，并探讨了瓯江干流丽水段渔业资源的致危原因。结果表明， 瓯江干流丽水段流域浮游植物的种类、细胞密度和生物量相对于1972年分别增加42.3%、30.23%和17.6%，优势种由硅藻变成硅藻和绿藻，优势度增加6.07%；浮游动物的种类和细胞密度也均有增加，且原生动物所占比例大大增加，由45.24%增加为67.44%；底栖动物种类、密度和生物量均有减少，水丝蚓所占比例增加；鱼类的种类、数量和可捕量大大降低，珍稀鱼类种类减少甚至濒临灭绝，许多鱼类出现低龄化和小型化问题。水工建筑的大量建造、工农业污水的大量排放和过度捕捞是造成上述变化的主要原因。     

锯缘青蟹凝集素的提取及单克隆抗体制备

凝集素是无脊椎动物非特异性免疫系统的重要组成成份，可凝集外来病原菌、进行非己识别、调理和介导血细胞吞噬。开展了锯缘青蟹血清凝集素的提取、单克隆抗体制备及凝集素定位研究，以N-乙酰基葡萄糖胺（N-Acetyl-D-glucosamine，GlcNac）为配基制备了Sepharose 4B亲和层析柱，可选择性结合青蟹血清凝集素；青蟹血清通过亲和层析柱后，以0.45 mol/L NaCl洗脱，得到有较高凝集活性的单一洗脱峰，该洗脱峰凝集素比活为血清凝集活性的32.6倍，SDSPAGE显示存在87 ku和79 ku主要蛋白成分；以纯化青蟹凝集素免疫BALB/c小鼠，经细胞融合、单抗筛选获得BF82等7株可稳定分泌抗凝集素单抗的小鼠杂交瘤细胞株，单抗腹水的ELISA效价为1∶10⁴～1∶10⁵；单抗可特异性抑制青蟹凝集素的血凝，血凝抑制效价为1∶32～1∶64，亚型鉴定表明7株单抗均为IgG1型，免疫印迹表明单抗可特异性结合87 ku、79 ku蛋白；采用凝集素单抗间接免疫荧光法进行了青蟹血淋巴细胞染色，结果显示凝集素主要分布于颗粒细胞的细胞质颗粒和透明细胞的细胞膜上。     

甘露寡糖对高糖饲喂下尼罗罗非鱼肌肉品质的影响

甘露寡糖是一种新型饲料添加剂，它具有保护肠道健康和降血糖的功能。然而，甘露寡糖对于鱼类肌肉品质的影响并无系统性报道。为此，本实验选择均重为2g左右的健康尼罗罗非鱼幼鱼315尾，随机分成对照组（Control，糖含量为35%）、高糖处理组（HC，糖含量为45%）和高糖饲料中添加甘露寡糖处理组（HM，糖含量为45%，甘露寡糖添加量为0.5%），每组3缸，每缸35尾，投喂10周后，测定其生长指标、肌肉营养成分和质构特性等相关指标。结果显示，与对照组相比，HC组尼罗罗非鱼肝体比，肌肉内聚性，肌纤维数量、肌苷酸含量、鲜味氨基酸占比、支链氨基酸/芳香族氨基酸比例、甘油三酯含量以及可促进肌肉生长的钙蛋白酶抑制蛋白基因CAST 相对表达量均显著升高；肌肉硬度、胶着性、咀嚼性、肌纤维直径、蒸煮损失，必需氨基酸占比以及在肌纤维的分化中起着重要作用的MyoG基因 相对表达量以及脂肪酸、甘油二酯和磷脂酰肌醇含量显著降低。与HC组相比，HM组尼罗罗非鱼的肌肉弹性、必需氨基酸占比，脂肪酸和甘油二酯含量以及CAST基因相对表达量显著增加；肌肉粘力、肌纤维数量、肌苷酸含量，磷脂酰乙醇胺和磷脂酰胆碱含量以及MyoG基因相对表达量均显著降低。与对照组相比，HM组尼罗罗非鱼增重率和肌肉内聚性，支链氨基酸/芳香族氨基酸比例，甘油三酯和脂肪酸含量显著增加；肝体比，肌肉硬度、咀嚼性以及磷脂含量均显著降低。上述结果表明，高糖饲喂可以使罗非鱼肌肉的保水能力增强，其肌肉更嫩更柔软紧密，提升肌肉鲜味，但会降低氨基酸营养价值。在添加甘露寡糖后，可以促进尼罗罗非鱼生长，提高产肉率和肌肉持水力，并且肌肉更加柔软紧密且富有弹性，提高氨基酸营养价值，但是会降低磷脂含量。     

剑尾鱼属鱼类种间杂交初探

设3个试验组, 以2种月光鱼与3种剑尾鱼进行属内种间杂交试验,并对子一代的眼睛色彩、体型、体色及雄鱼的尾鳍形状等与观赏性相关的表现性状进行了统计分析,初步判定:眼睛色彩的遗传规律为红色由隐性基因控制,黑色由显性基因控制；子一代体型、体色为中间型的比例均高于偏向父母一方的体型的比例；子一代中的雄鱼以继承母本月光鱼圆尾特征为主。