蜡样芽孢杆菌致吐毒素的毒性作用与生物合成研究进展

蜡样芽孢杆菌是一类兼性厌氧的革兰氏阳性杆菌,可以产生芽孢抵抗不良环境,并广泛存在于土壤、水、空气和多种食物中。致病性蜡样芽孢杆菌是常见的食源性条件致病菌之一,其引发的食物中毒主要是由其产生的毒素导致的。致吐毒素cereulide是致病性蜡样芽孢杆菌产生的重要毒素之一,是一种小分子亲脂性十二环肽,结构性质十分稳定。Cereulide能够引起恶心、呕吐等轻微的食物中毒症状,也可导致如肝性脑病、急性肝脏衰竭等严重致死的疾病。当前对于cereulide的毒性作用机制研究局限于其刺激传入迷走神经引起呕吐症状,以及作为钾离子载体,诱导线粒体膜电位丧失,并最终导致细胞死亡,而对于其导致的严重肝脏和脑部病变的毒性作用机制研究仍十分不足。Cereulide是由cereulide合成酶基因簇(ces)编码,非核糖体肽合成酶(nonribosomal peptide-synthetase, NRPS)系统控制合成的。Cereulide由两个羟基酸和两个氨基酸残基[-D-HIC-D-Ala-L-HIV-L-Val-]经3次迭代组成三聚体缩酚酞,其结构特殊并有很强的代表性,但因NRPS合成系统的灵活性会产生许多变体,因此cereulide的毒性与其生物合成过程息息相关。文章在现有文献报道和研究数据的基础上,总结并提出了cereulide的生物合成机理：首先,cereulide合成基因簇的CesA和CesB结构域分别识别D-α-酮羧酸、L-丙氨酸、L-α-酮异戊酸和L-缬氨酸,通过共价结合形成cereulide的主要合成单元二肽;其次,依照上述过程重复合成四肽;再通过重复反应合成第二个四肽,两个四肽通过酯化形成八肽;再次重复上述反应,形成三元络合的产物肽;最后,由于ces-NRPS的硫酯酶结构域活性中心表面结构阻止外部水分子进入,并诱导内部亲核攻击反应,最终释放出环状cereulide。目前,由产cereulide的蜡样芽孢杆菌引起的食物中毒风险被低估。并且,本团队前期研究发现部分芽孢杆菌微生态制剂中混有产cereulide的蜡样芽孢杆菌菌株。因此,产cereulide蜡样芽孢杆菌的存在对食品安全和公共健康均构成了潜在风险。文章综述了cereulide的毒性作用及机制,为进一步研发cereulide防控措施提供科学依据;总结并提出了cereulide的生物合成机理,强调了催化酮酸形成酯的酮还原酶域(KR),及形成重复单元和环肽的硫酯酶域(TE)在其合成中的重要作用,为阐明类似结构的非核糖体肽合成提供新的思路。     

PCV4 SYBR Green I实时荧光定量PCR方法的建立及应用

为建立一种灵敏、可快速检测猪圆环病毒4型（PCV4）的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法,根据PCV4 Rep基因的保守区域设计引物,建立针对PCV4的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性和重复性进行评价。结果显示,该检测方法的Ct值与标准品在5.64×102~5.64×109 copies/μL范围内呈良好的线性关系,R2为0.999,斜率为-3.638,检测下限为5.64×102 copies/μL,且无非特异性扩增。利用该方法对56份临床样品进行检测,发现PCV4核酸阳性率为3.57%,比普通PCR更灵敏可靠。结果表明,本试验建立的SYBR Green I实时荧光定量PCR方法可用于PCV4的快速诊断。     

不同日粮对高海拔地区中华绒螯蟹生长性能及生化指标的影响试验

为了研究不同日粮对高海拔地区中华绒螯蟹生长性能与生化指标的影响,采用3组饲料对中华绒螯蟹开展60 d饲养试验,A组(70%玉米+30%稻谷,补饲干鱼+水草+紫花苜蓿)、B组(70%玉米+30%豆饼,补饲干鱼+水草+杂草)、C组(100%玉米,补饲干鱼+水草),测定其生长性能和相关生化指标。结果:A组、B组、C组中华绒螯蟹的增重率分别为158.11%、152.21%、136.32%,特定生长率分别为2.02%/d、1.80%/d、1.56%/d,A组生长性能显著优于B组和C组(P0.05);血清指标和肝胰腺消化酶活性各组间差异不显著(P0.05)。结论:采用"70%玉米+30%稻谷,补饲干鱼+水草+紫花苜蓿"饲料配方在高海拔地区饲养中华绒螯蟹可获得较好效果。     

外观健康家犬携带狂犬病病毒状况调查

为了解外观健康家犬携带狂犬病病毒的状况,采用RT-PCR方法对广西13个城市外观健康家犬的脑组织进行了检测,结果阳性率为1.76%(5/283),证明广西外观健康家犬在一定程度上存在带毒现象。     

2012～2014年广西猪蓝耳病疫苗的免疫副反应分析

为了了解高致病性猪蓝耳病疫苗使用的免疫副反应情况,调查了广西部分地区2012 ～2014年使用8个疫苗生产厂家的猪蓝耳病疫苗的免疫副反应情况,并对不同年度、厂家,不同类型疫苗的副反应情况进行分析.结果表明,不同年度的副反应情况呈下降趋势;不同疫苗厂家生产的疫苗对应激反应有一定的差异;活苗和灭活苗的副反应差异显著.若要降低免疫副反应,防治人员的素质是重要的影响因素,应全面做好免疫前的准备工作,并根据猪群的健康状况调整免疫程序对降低免疫副反应有重要意义.     

鸡痘病毒在哺乳细胞内复制的研究

将重组鸡痘病毒在1种禽类细胞和13种哺乳动物及人的细胞内培养.通过电镜观察可见重组鸡痘病毒在CEE、BHK、PK、BTC、Vero细胞内的复制,同时用PCR方法扩增出目的基因,Western-blotting检测到目的蛋白,验证是鸡痘病毒.试验表明鸡痘病毒在禽类、个别哺乳动物细胞中可以复制,但尚未发现在人的细胞内复制;在CEF中可以稳定传30代以上;在BHK内第1代可以观察到细胞病变(CPE);在PK、BTC、Vero内第2代可以观察到CPE,证明鸡痘病毒在个别哺乳动物细胞发生复制,但不能稳定遗传.     

不同规模猪场O型口蹄疫免疫抗体监测和效果分析

按100头以上和100头以下母猪的标准,从广西4市27家养殖场分别采集已经免疫过口蹄疫疫苗后1个月的仔猪、肉猪和母猪血清1 080份,使用阻断ELISA方法对样品的抗体水平进行检测。结果:100头母猪以上的猪场抗体合格率和100头母猪以下猪场差异极显著。抗体离散度均较高,均不符合要求。使用合成肽疫苗比灭活疫苗能产生较好的抗体,差异显著。结果提示,应该加强对种猪的口蹄疫免疫,根据个体的抗体消长规律进行有针对性的免疫,以达到提高群体抗体均匀度。     

我国农机购置补贴政策实施效果

农机购置补贴政策是我国重要的惠农政策之一。从2004年起,该政策就已经正式实施了,要想提高购机补贴政策的良好实施,根据农机购置补贴政策实施的现状,将其划分为3个阶段,初步形成阶段、快速发展阶段和成效发展阶段。分析我国农机购置补贴政策实施效果,利用实证对农机购置补贴进行研究,认为农机购置补贴政策有助于提升我国农业的现代装备水平,有助于提升我国农业产业结构,这项政策是很值得坚持的良好政策。因此,农机购置补贴资金、补贴范围、农机种类和收益农户数等方面,都是在各阶段内我国农机购置补贴的实施对象。通过结果表明,经过宏观调控,引导农民购置并使用现代化先进适用的农机器具,推进农机产业结构的全面调整和更新换代,以及对农机工业结构的调整和先进技术的进步。     

浸渍毛白杨锯材的干燥工艺

以25 mm厚浸渍毛白杨木材为研究对象,基于百度实验法,根据浸渍木干燥特性,得到浸渍毛白杨木材的干燥工艺.结果表明:浸渍后杨木干燥特性的初期开裂等级降低,但内裂、截面变形、干燥速度的等级提高.采用此干燥工艺,干燥周期为12.74 d,各项可见缺陷指标均达到国家标准,能满足实木地板的加工要求.     

H9亚型禽流感病毒钦州株HA基因的克隆与遗传进化

采集钦州活禽交易市场的鸡气管和泄殖腔的棉拭予样品,用H9亚型分型引物进行PCR初步筛选,阳性样品经SPF鸡胚尿囊腔接种分离病毒,通过RT-PCR方法扩增HA基因,并将其克隆到pMD—18T载体后进行序列测定和分析。结果表明,获得1株H9亚型禽流感病毒命名为：A／Chicken／Guangxi／qz40／2009（简称qz40）。测序结果表明qz40的HA基因片段全长1683bp,编码560个氨基酸;序列同源性比较结果表明,该毒株与参考毒株的核苷酸序列同源性为82．8％．99．9％,推导氨基酸同源性为87．5％．99．6％;HA基因的裂解位点氨基酸顺序为RSSRIGLF,为低致病性毒株;含有7个潜在的N-糖基化位点,其中5个位于HAl部分、2个位于HA2部分;基于H9亚型HA基因的进化树分析表明,qz40株属于欧亚种系的A／Chicken／Beijing／1／94（Ck／Bei—like）群系。