干扰素在兽医临床的应用

正干扰素具有广谱的抗病毒活性,它是一种类似于多肽激素的细胞功能调节物质,属于细胞因子,有一定种属特异性。兽用干扰素近几年发展迅速,利用基因工程生产的干扰素已经广泛应用于禽、猪、犬等动物病毒性疾病的预防和治疗。1干扰素作用机理动物感染病毒或是在诱导剂的刺激下,淋巴细胞、巨噬细胞、体细胞会产生干扰素。干扰素既可抑制RNA     

禽流感病毒宿主特异性与致病性的分子基础研究进展

禽流感病毒不断重排和变异导致新型流感病毒不断出现,其中有些毒株已经获得了感染哺乳动物的能力,严重危害人类公共卫生安全。近年来,对于禽流感病毒致宿主特异性和致病性的研究取得了一定进展。病毒蛋白某些氨基酸位点的突变就能够改变病毒的宿主特异性,使病毒能够跨宿主传播。而且,病毒的RNA聚合酶、NS1非结构蛋白和几种新发现的病毒蛋白都与病毒的致病性密切相关。论文阐述了禽流感病毒宿主特异性与致病性的分子基础,为禽流感跨物种传播机制研究及防控工作提供参考。     

生地提取物对接种H9亚型禽流感疫苗雏鸡非特异性免疫功能的影响

本试验旨在研究生地提取物对雏鸡非特异性免疫功能的影响,采用单因素分组设计,选用1日龄雏鸡随机分为6组饲喂基础日粮,于14日龄接种H9亚型禽流感疫苗,每组分别给予以下处理:生地提取物添加组(Ⅰ组、Ⅱ组和Ⅲ组),分别在基础日粮中添加1、2、3g/L生地提取物;黄芪多糖组(Ⅳ组),在基础日粮中添加0.4mL/L黄芪多糖;免疫不给药组(Ⅴ组),接种H9亚型禽流感疫苗并饲喂基础日粮,空白组(Ⅵ组),不免疫H9亚型禽流感疫苗只饲喂基础日粮。药物添加期为7d,对鸡群在14、21、28、35、42、49、56日龄进行心脏采血,进行白细胞计数、溶菌酶以及IFN-α、TNF-α含量测定。结果表明,在7周采样周期内,与空白组相比,黄芪多糖和生地提取物的添加能不同程度的促进雏鸡白细胞的增殖,提高溶菌酶和IFN-α、TNF-α的含量(P0.05)。其中,中药添加组(Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组)较空白组(Ⅵ组)的白细胞数目有显著增加(P0.05),而中剂量组(Ⅱ组)与黄芪组(Ⅳ组)无显著差异(P0.05),35日龄时中剂量组和黄芪组较高、低剂量组(Ⅰ组)能显著增加雏鸡溶菌酶和TNF-α的含量(P0.05),14日龄~28日龄,生地提取物中剂量组和高剂量组与黄芪组的IFN-α含量无显著差异(P0.05),与空白组(Ⅵ组)差异显著(P0.05)。综上所述,生地提取物具有增强雏鸡非特异性免疫功能的作用,可以作为一种新型的免疫增强剂,建议生地提取物在雏鸡日粮中的添加剂量以2g/L为宜。     

羊源性成分LAMP检测方法的建立

根据羊cyt B基因设计3对特异性引物,运用GenieⅡ等温扩增荧光检测系统,以LAMP荧光检测方法为基础,建立了检测羊源性成分的LAMP方法,并对该方法进行了反应体系和条件的优化。试验结果表明:该方法操作简单、特异性好;灵敏度比普通PCR方法高100倍,比q PCR方法低10倍,达到5.928×10-3μg/μL;反应时间短,最快10 min即可完成反应。     

空肠弯曲杆菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立

空肠弯曲杆菌（Campylobacter jejuni）是一种人兽共患病病原菌,给养殖业带来了较大经济损失。为实现对空肠弯曲杆菌的快速检测,针对其MapA基因序列设计特异性引物,优化反应条件和反应体系,建立了空肠弯曲杆菌SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性、重复性进行了评估。结果显示：建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法具有良好的特异性,仅能特异性扩增出空肠弯曲杆菌,对胎儿空肠杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌无交叉反应;敏感性较强,最低检测限为6.42 copies/μL;以5个稀释度的重组质粒为模板分别进行组内和组间重复性试验,发现组内和组间Ct值变异系数（CV）均小于2.50%,说明该方法具有良好的可重复性。结果表明,本研究建立的SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR具有良好的特异性、敏感性及重复性,可用于空肠弯曲杆菌的快速诊断和流行病学调查。     

虾青素对鲈鱼生长性能、抗氧化及非特异性免疫能力的影响

试验旨在研究不同水平虾青素对鲈鱼生长性能、血清抗氧化和非特异性免疫指标的影响。选择健康、体重相近的鲈鱼480尾,随机分为4组,每组6个重复,每个重复20尾鲈鱼。对照组鲈鱼投喂基础饵料,各试验组分别在鲈鱼基础饵料中添加50、100、150 mg/kg虾青素。预试期7 d,正式试验期60 d。结果显示,100 mg/kg组和150 mg/kg组鲈鱼末重和存活率显著高于对照组（P<0.05）。150 mg/kg组鲈鱼增重率和特定生长率显著高于对照组（P<0.05）,所有试验组鲈鱼的饵料系数显著低于对照组（P<0.05）。100 mg/kg组和150 mg/kg组鲈鱼粗蛋白含量显著高于对照组（P<0.05）。所有试验组鲈鱼血清中总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶的活性显著高于对照组（P<0.05）,血清丙二醛含量显著低于对照组（P<0.05）。150 mg/kg组鲈鱼血清中溶菌酶活性显著高于对照组（P<0.05）,各试验组鲈鱼补体C3含量显著高于对照组（P<0.05）。研究表明,饵料中添加虾青素可改善鲈鱼的生长性能、抗氧化功能与免疫...     

植物基因启动子的克隆方法及其应用

植物基因的表达调控已成为分子生物学研究热点,启动子是基因表达调控的重要顺式元件,启动子的克隆对于研究基因表达调控、构建基因工程载体、表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,从常用的启动子陷阱技术筛选启动子到PCR方法的应用,此后相继问世的一些基于PCR的克隆启动子技术,如载体锚定PCR、反向PCR、接头PCR、交错热不对称PCR等,为克隆启动子提供了更可靠,更合理的方法。本文着重介绍了几种植物基因启动子的克隆方法,分析了它们的优缺点,并展望了今后的研究前景。     

一对等位基因互作控制的核雄性不育性

通过遗传工程能够产生由两个基因共同作用而形成的雄性不育。一个可以是能够导致雄性不育的基因,另一个可以是该雄性不育基因的活化基因,它们共同存在的时候表现雄性不育。利用位点特异性重组和转基因技术能够将这两个基因安排在植物同源染色体的相同位置上表达,成为等位基因,而获得分别只具有其中一个基因的两转基因系。它们之间杂交,F1中两个基因同时存在,F1产生雄性不育而成为不育系。常规品系与此F1不育系杂交,在杂种植株中,这两个基因不能同时存在,所有植株育性恢复。利用光温敏核不育性,化学杀雄和人工去雄可解决此不育系繁殖问题。该雄性不育性利用方式优越,育种简便易行,能够满足对最佳组合选育的要求,且能够定向培育目标杂交组合。     

中国野生葡萄抗霜霉病相关基因VpPR4b及其启动子的克隆和功能分析

以中国野生葡萄(Vitis piasezkii)‘留坝-8’(抗霜霉病)和欧亚种葡萄(V.vinifera)‘黑比诺’(易感霜霉病)为材料,克隆得到抗霜霉病相关基因VpPR4b和VvPR4b。序列分析发现VpPR4b和VvPR4b核苷酸序列相似性为98.61%。VpPR4b编码区为432 bp,编码143个氨基酸,含有BARWIN保守结构域,属于典型的Ⅱ型PR4蛋白。VpPR4b和VvPR4b均可在霜霉菌侵染后诱导表达。亚细胞定位表明VpPR4b定位于细胞膜上。分别从‘留坝-8’和‘黑比诺’中克隆得到了VpPR4b和VvPR4b的启动子,其序列相似性高达95.65%,并且含有相似的顺式作用元件。通过酵母单杂交验证了转录因子WRKY40和WRKY75可以结合VpPR4b启动子。本研究的结果表明PR4b可能在葡萄抵御霜霉病侵染过程中发挥一定作用。