牛环形泰勒虫病PCR诊断方法的建立及其应用研究

[目的]建立快速检测牛环形泰勒病的PCR诊断方法.[方法]根据牛环形泰勒虫裂殖子的表面抗原(Tams1)基因,设计一对特异性引物,以地方阳性病例提取的DNA为模板,用PCR扩增出目的条带,经克隆、测序分析后,通过优化反应体系,建立牛环形泰勒虫病的PCR检测方法,并对该方法的特异性、敏感性进行验证试验.[结果]测序结果表明,扩增的目的片段与已知基因序列相似性为99;;该方法检测与牛的其他血液原虫无交叉反应,其最低检出限量为1.6×102 copies/μL.应用所建立的PCR检测方法对新疆吐鲁番市周边疑似地区419份牛全血进行了检测,结果阳性率为52.3; (219/419),而血液涂片检出率为43.7;(183/419).[结论]建立的牛环形泰勒虫PCR快速诊断方法具有有一定的特异性和敏感性,可用于牛环形泰勒虫病的分子诊断和流行病学调查.     

新疆多源喹诺酮类耐药大肠杆菌耐药基因检测及分析

【目的】了解新疆不同动物源喹诺酮类耐药大肠杆菌携带质粒介导的喹诺酮耐药因子（plasmid mediated quinolone resistance,PMQR）的流行现状,及其与主要的β-内酰胺酶基因和 16S rRNA 甲基化酶基因的共存情况。【方法】通过 PCR 方法对猪源（79 株）、牛源（8株）和羊源（96株）喹诺酮类（环丙沙星,诺氟沙星和恩诺沙星）耐药大肠杆菌进行 PMQR（qnrA, qnrB, qnrC, qnrD, qnrS, qepA, oqxA, oqxB, aac(6’)-Ib-cr）、β-内酰胺酶基因（bla_TEM, bla_CTX-M, bla_SHV, bla_KPC, bla_CMY-2, bla_LAP-1）及16S rRNA（armA, rmtB）等基因检测,对目的条带进行DNA测序,确定阳性菌株,对检出携带 β-内酰胺酶基因和16S rRNA 甲基化酶基因的大肠杆菌进行β-内酰胺类及氨基糖苷类药敏试验,分析其携带的基因型与耐药表型之间的关系。【结果】猪源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS（5/79,6.33%）,oqxA（35/79,44.30%）,oqxB（40/79,50.60%）和aac(6’)-Ib-cr（4/79,5.06%）,检出的β-内酰胺酶基因为bla_TEM（79/79,100%）,检出的16S rRNA 基因为rmtB（3/79,3.80%）;牛源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS（1/8,12.50%）,oqxA（1/8,12.50%）,oqxB（1/8,12.50%）和aac(6’)-Ib-cr（1/8,12.50%）和qepA（1/8,12.50%）,检出的β-内酰胺酶基因为bla_TEM（8/8,100%）和bla_SHV（1/8,12.50%）;羊源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS（6/96,6.25%）,oqxA（32/96,33.3%）,oqxB（37/96,38.5%）和aac(6’)-Ib-cr（22/96,22.91%）,检出的β-内酰胺酶基因为bla_TEM（96/96,100%）和bla_CTX-M（2/96,2.08%）,检出的16S rRNA 基因为rmtB（2/96,2.08%）;未检出qnrA,qnrB,qnrC,qnrD,bla_KPC,bla_CMY-2和bla_LAP-1被检基因。不同动物源大肠杆菌中存在基因共存现象,携带β-内酰胺酶基因和16S rRNA 甲基化酶基因的喹诺酮类耐药大肠杆菌对β-内酰胺类和氨基糖苷类药物耐药呈一定的相关性。【结论】不同动物源喹诺酮类耐药大肠杆菌中存在PMQR因子,可与主要的 β-内酰胺酶和/或16S rRNA 甲基化酶基因共存。此外,首次在羊源大肠杆菌中检出PMQR 因子、β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶基因。     

新疆阿克苏地区初冬时节肉牛舍环境空气质量的测定与评价

[目的]为了解新疆阿克苏地区初冬时节肉牛舍的环境空气质量情况,对肉牛舍的环境空气质量进行了评价。[方法]对阿克苏地区具有代表性的肉牛养殖场的1栋牛舍中的CO2、NH3、CH4和H2S4种主要有害气体以及空气中的PMl0、TSP进行现场测定,并对牛舍的环境空气质量进行分析评价。[结果]测定结果显示,肉牛舍的环境空气质量指标中CO：平均浓度为404mg/m3;NH3平均浓度为4.0mg/m3;CH4和H2S平均浓度〈0mg/m3;PMl0平均浓度为0.04mg／m3;TSP平均浓度为1.222mg/m3;C02、NH3、CH4、H2S、PMl0、TSP最高浓度和日平均浓度均低于：畜禽舍的环境空气质量标准。[结论]该肉牛舍的空气质量属于清洁级别,符合肉牛养殖环境标准。     

微波消解-氢化物发生-原子吸收光谱法测定养殖场水中汞的研究

[目的]探索建立微波消解法与氢化物发生-原子吸收光谱法相结合测定养殖场水中汞.[方法]采用氢化物-原子吸收光谱法进行测定,同时与国家标准消解方法测定结果进行比较.[结果]该方法的线性范围为10～ 80 μg/L,检出限(3S/N)为0.381 μg/L,线性相关系数＞0.999,回收率为87.6;～94.5;,相对标准偏差为4.5;.[结论]与国标消解法相比,该方法线性好、精密度高、准确度高、操作简便、样品消解完全、试剂用量少、空白值低、干扰少等优点,适用水中微量元素检测分析.     

羊粪沼液微生物总DNA提取方法优化比较研究

[目的]目前沼液污泥中99;的微生物不可培养的,为开展羊粪沼液中微生物多样性的研究,须对沼液总DNA进行提取.[方法]研究以总DNA及其PCR产物的琼脂糖电泳结果为判定依据,以SDS结合酚氯仿抽提总DNA的方法为基础,采用逐步增加净化菌泥、溶菌酶裂解以及DNA纯化等优化方法,并测定优化效果.[结果]后续增加的步骤对提高总DNA的提取效率及质量十分有效,所得DNA在得率、大小以及纯净度方面都有所提高,可以满足后续分子实验的要求.[结论]以SDS法为基础,用TENP和PBS洗涤菌泥,添加适量溶菌酶,并适当延长反应时间至3h,再经纯化柱吸附和洗脱的方法可以获得更高质量的羊粪沼液总DNA.     

伊犁地区马肉嫩度的测定与分析

[目的]对伊犁地区不同年龄、不同性别及不同部位的马肉嫩度进行测定,比较不同年龄段、不同性别及不同部位马肉嫩度的差异性,为马肉食用品质指标提供数据参考.[方法]选择3岁、4·7岁和8岁及以上三个年龄阶段的马匹为对象,屠宰后取前腿、背部和后腿的肌肉为试验材料.用C-LM3型数显式肌肉嫩度仪对马肉的剪切力进行测定.[结果]在不同年龄段中,3岁马肉的剪切力值最小,为4.49 kg.f.4·7岁与8岁及以上马肉剪切力值差异不显著(P＞0.05),与3岁马肉嫩度差异显著(P＜0.05).雌性马肉剪切力值较雄性马肉剪切力值小,肉质较嫩.不同部位间,背部肌肉剪切力值最小为5.68 kg.f,前腿部和后腿部剪切力值分别为6.10和6.13 kg.f,但三个部位差异不显著(P＞0.05).[结论]年龄越小其肌肉剪切力值越小,肉质越嫩,但同时也会受其他因素影响;母畜肉较公畜肉质更细腻,嫩度稍高;前腿部和后腿部肌肉因运动量大,其肌肉有致密的结缔组织支持,故其嫩度较背部肌肉低.     

新疆伊犁某牛场大肠杆菌耐药性调查

为了调查新疆伊犁某牛场饮水、饲料和粪样中分离的大肠杆菌对临床常用抗菌药物的耐药情况。本试验采用微量肉汤稀释法,对饮水源、饲料源、牛粪源样品中分离出的大肠杆菌进行最小抑菌浓度测定。结果显示,25份牛场饮水源样品,大肠杆菌分离率为100.0%（25/25）,对阿莫西林/克拉维酸（12.0%）、氨苄西林（4.0%）、诺氟沙星（4.0%）、恩诺沙星（8.0%）和安普霉素（8.0%）5种抗菌药物耐药;72份牛场饲料源样品,大肠杆菌分离率为65.3%（47/72）,对阿莫西林/克拉维酸（36.2%）、氨苄西林（19.1%）、诺氟沙星（4.3%）和安普霉素（4.3%）4种抗菌药物耐药;80份牛粪源样品,大肠杆菌分离率为100.0%（80/80）,对阿米卡星（12.5%）、氨苄西林（7.5%）、恩诺沙星（7.5%）、庆大霉素（5.0%）、诺氟沙星（2.5%）、环丙沙星（2.5%）、阿莫西林/克拉维酸（1.3%）和头孢噻呋（1.3%）8种抗菌药物耐药,仅对安普霉素敏感。该牛场分离的大肠杆菌对常用抗菌药物耐药情况一般,但中介率较高,须在临床治疗细菌性疾病中避免使用不敏感和中介率高的抗菌药物,养殖场饮水和饲料有被耐药大肠杆菌污染的风险。     

马疱疹病毒1型LAMP检测方法的建立

本试验旨在建立一种检测马疱疹病毒1型（EHV-1）的快速、灵敏、特异的环介导等温扩增技术（LAMP）,同时评价该方法的可靠性。根据马鼻肺炎糖蛋白B（gB）基因特异保守序列设计多对LAMP引物,利用LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测反应进程,进行引物筛选和反应条件的优化,建立能特异性扩增EHV-1 DNA的LAMP检测方法,并加入SYBR GreenⅠ通过肉眼判断结果。该方法在65 ℃恒温下作用50 min,使EHV-1 DNA获得了高效率的特异性扩增,与其他马易感病毒如马疱疹病毒4型（EHV-4）等无交叉反应;且具有极高的灵敏性,可检测到10^-4稀释的目标病毒,比普通PCR的灵敏度高10倍;反应结束后加入SYBR GreenⅠ肉眼观察的结果与LAMP Real Time Turbidimeter LA-320仪监测结果一致。通过将4份临床样品的LAMP检测结果与已得到验证的PCR结果进行比对,结果显示符合率为100%。本研究建立的LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏、简单易操作且设备要求低等特点,具有实地检测EHV-1的前景。     

绵羊妊娠毒血症发病机制及防治研究进展

近年来,随着养羊业的发展,特别是具有多胎特性的小尾寒羊养殖数量的增加,绵羊妊娠毒血症的发病率和死亡率均呈上升趋势,因此,所带来的经济损失也较大。该病发病机制复杂,主要从病因、发病机制及防治方面阐述了绵羊妊娠毒血症的研究现状,以期为有效防治该病提供参考。     

乳中掺尿素快速检测方法影响因素的探索

[目的]部分不法奶商在原料乳中加水后同时加尿素来提高蛋白质含量及增加密度,快速检测乳中掺尿素,找出并拒收这部分掺假异常乳.[方法]对年乳掺尿素的检测方法(格里斯法)所用的试剂浓度、用量、搭配比例进行筛选,对掺不同浓度尿素的牛乳采用试管法进行检测比较.[结果]用1;亚硝酸钠溶液0.4mL的剂量,格里斯试剂用量为0.2 g,浓硫酸用量为1 mL,对掺尿素乳检测的结果比较明显,尿素最低检出量为0.04;,能方便、快速的检测出牛乳掺尿素.[结论]该法用于牛乳掺尿素的检测,操作简单,检测快速,灵敏度较高,检测成本低,适用于各奶站及牛乳检测机构的快速检验.