广东地区猪群新发塞内卡病毒流行株的分离鉴定及遗传进化分析

【目的】检测广东两猪场新发的鼻镜与蹄冠水疱病病原,获得新发塞内卡病毒（Senecavirus A, SVA）流行株,为后续研究提供材料。【方法】应用 SVA RT-PCR、荧光 PCR 等方法对采集的病料进行初步筛 查,再将水泡皮进行处理接种于 ST 细胞、BHK-21 细胞上,用 SVA 特异性引物对细胞上清液进行扩增,测序 并分析序列,采用蔗糖浓度梯度方法纯化病毒进行电子显微镜形态观察,并对病毒分离株的 TCID50 进行测定。 【结果】 经 SVA RT-PCR 与荧光 PCR 方法初步诊断该猪群为 SVA 感染;细胞接毒培养发现,自第 6 代起, 细胞出现典型 CPE,电镜观察可见 25 nm 左右的病毒颗粒,扩增序列提交 NCBI Blastn 比对鉴定为 SVA;测得 毒株 SVA CH-GDBL1-2016 的 TCID50 为 106.8,毒株 SVA CH-GDBL2-2016 的 TCID50 为 106.7。【结论】SVA CH-GDBL1-2016 和 SVA CH-GDBL2-2016 可为后续塞内卡病毒病的诊断和疫苗研制提供材料基础。     

鹅－鱼立体养殖环境的菌群特征研究

禽－鱼立体混合养殖是全球罗非鱼养殖的一种重要模式．由于该模式可能存在着致病菌由禽向鱼类沿养殖链和食物链传递的风险,被认为会对罗非鱼的健康养殖造成危害,但目前缺乏相应的理论依据．通过连续采集某鹅－鱼养殖场中罗非鱼鳃、鹅粪便、池塘水体及底泥样品,采用高通量测序技术检测了其中的菌群结构及多样性,结果发现,在５次采集的鱼鳃、鹅粪便、池塘水及底泥样品中,平均分别鉴定到细菌２２门和１６９属、２７门和１７６属、３８门和２０６属、６０门和２０５属,菌群丰富度最高的为底泥样品（Ｓｈａｎｎｏｎ指数６.６４）．在门水平,鱼鳃、底泥、池塘水的菌群组成较稳定,其优势菌群依次为厚壁菌门、变形菌门、拟杆菌门和蓝藻门．鹅粪便则在随时间变化差异较大．在属水平,鹅粪便和鱼鳃上没有发现共同的致病菌．但值得注意的是,鹅粪便中含有众多病原菌如不动杆菌属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、梭杆菌属（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、梭菌属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）和空肠弯曲菌属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）．鱼鳃上则发现有丰富的乳酸杆菌属（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、土芽孢杆菌属（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）和芽孢杆菌属（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）等有益菌,同时也有假单胞菌属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ）和链球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）等病原菌．底泥中发现的大部分细菌为厌氧菌,如脱氯单胞菌属（Ｄｅｃｈｌｏｒｏｍｏｎａｓ）、厌氧粘细菌属（Ａｎａｅｒｏｍｙｘｏｂａｃｔｅｒ）和地杆菌属（Ｇｅｏｂａｃｔｅｒ）．β-多样性分析表明,不同来源样品的细菌组成相似性很小．结果表明立体养殖池塘中各类样品的菌群组成在属水平差别较大;没有直接证据表明,病原菌会由鹅水平转移至罗非鱼．     

狮头鹅和乌鬃鹅不同生长阶段肌纤维发育规律的研究

为研究狮头鹅和乌鬃鹅在不同生长阶段肌纤维的发育规律,分别选取健康的１、４０和１２０日龄乌鬃鹅和狮头鹅,屠宰并取其胸肌和腿肌做石蜡切片,观察并测定两种鹅不同部位不同时期肌纤维的直径和横截面积．结果表明两种鹅１日龄胸肌肌纤维差异不明显,腿肌肌纤维横截面积和直径差异显著（Ｐ＜０.０５）;４０日龄两种鹅胸肌肌纤维横截面积差异显著（Ｐ＜０.０５）,但胸肌直径和腿肌的直径和横截面积差异不显著（Ｐ＞０.０５）;１２０日龄两种鹅胸肌肌纤维和腿肌肌纤维的横截面积和直径差异极显著（Ｐ＜０.０１）．研究结果表明乌鬃鹅肌肉纤维在１至４０日龄期间生长发育迅速,但４０日龄后肌纤维生长潜力不如狮头鹅．     

广东省鹅细小病毒的分离及序列分析

从广东省鹅主要养殖区分离出2株鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV),分别命名为GDQY2017和GDYJ2017,纯化后测序分析。VP基因的系统发育分析结果表明,2株GPV单独形成一个分支,与疫苗株距离较远。选择压力分析结果表明,分离株的1位点有强烈的净化选择。氨基酸分析结果显示,与疫苗株相比,分离的GPV菌株含有22个不同的氨基酸残基,并且具有阳性选择的位点(Arg116Gln)。     

抗鹅IgY抗血清制备及在ELISA中的应用

为制备鹅免疫球蛋白特异性抗体,通过主动免疫兔子制备了抗鹅ＩｇＹ抗血清,并在ＥＬＩＳＡ中比较分析了该抗血清的应用效果．结果显示,将制备的抗鹅ＩｇＹ抗血清作为二抗,当抗原包被浓度（１６μｇ／ｍＬ）和血清（１∶１６００）、抗鹅ＩｇＹ抗血清（１∶５１２００）与酶标抗体（１∶２０００）稀释到合适浓度时,在ＥＬＩＳＡ检测鹅抗体水平中呈现出良好效果,其特异性和灵敏度明显好于以兔抗鸡ＩｇＹ作为替代二抗．结果表明所制备的抗鹅ＩｇＹ抗血清在鹅相关的酶联免疫研究方法中是合格和有效的．     

抗热应激添加剂对反季节生产马岗鹅繁殖性能的影响

为研究抗热应激添加剂和维生素Ｃ、Ｅ对反季节生产的广东鹅繁殖性能的影响,选取１１２２只正常反季节产蛋马岗鹅（♀９５４只,♂１６８只）,平均分为３组,分别为维生素组（添加质量分数为0.０８％的维生素Ｃ和０.０４％的维生素Ｅ）、试验组（添加质量分数为０.４％的抗热应激添加剂）和对照组,试验共持续６０ｄ,测定各组的产蛋率、孵化率和受精率．结果表明：在整个试验阶段,维生素组和试验组的产蛋性能、受精率和孵化率均大于对照组,其中两个处理组的受精率显著高于对照组（Ｐ＜０.０５）．试验结果表明,反季节生产中抗应激添加剂和维生素Ｅ、Ｃ对降低种鹅热应激和提高繁殖性能上均具有一定效果,可以显著提高马岗鹅的受精率和产蛋波谷期间的产蛋性能,其中抗热应激添加剂的效果更好．     

反季节生产中马岗鹅与狮头鹅繁殖性能的观察

为调查和了解广东鹅反季节生产中的潜在问题和改进空间,以广东省主导鹅种马岗鹅和狮头鹅为研究对象,观察并分析了反季节生产中两鹅种全年的产蛋性能、种蛋受精、孵化及孵化过程中胚胎死亡等情况.研究结果显示,马岗鹅和狮头鹅的年均产蛋数分别为41.5和29.7枚,受精率为66.3%和73.0%,种蛋孵化率为57.0%和62.2%,受精蛋孵化率为86.1%和86.4%,总死胚率为9.4%和9.0%;种鹅公母比例和气温条件对受精率和孵化率有明显影响;孵化前半段胚胎死亡率高于后半段.结果表明,狮头鹅的反季节生产技术更为成熟,马岗鹅的反季节生产技术还有待提高,环境温度、公母鹅比例等是影响马岗鹅生产性能和孵化效果的主要因素.     

不同光照时间对肉鹅生长性能及内毒素的影响

为研究不同光照时间对肉鹅生长性能和血清内毒素含量的影响,试验选取３个组,每组随机不分性别选取３２只４周龄马岗鹅．对照组接受正常光照（１２Ｌ∶１２Ｄ）（Ｌ∶光照ｌｉｇｈｔ,Ｄ：黑暗ｄａｒｋ）,短日照组每天９ｈ日照（９Ｌ∶１５Ｄ）;长日照组每天１５ｈ日照（１５Ｌ∶９Ｄ）,试验持续８周后,测定体质量增长速度、存活率、料重比、血 清内毒素等指标．结果表明,体质量从第７周开始对照组要显著高于短日照组和长日照组（Ｐ＜０.０５）．鹅生长发育早期（４～８周）对照组的饲料转化率最高,而后期（９～１２周）则是长光照组的饲料转化率最高．对照组和长光照组的存活率都达到８０.０％以上,而短日照组只有６６.７％．在整个试验期间对照组的血清内毒素含量均比其余两组小．试验表明,接受正常光照（１２Ｌ∶１２Ｄ）的鹅群有较好的生长性能,而长光照可提高鹅生长发育后期的饲料转化率．     

外源性褪黑素和脂多糖对育成期山麻鸭生长及免疫功能的影响

【目的】研究外源性褪黑素(MLT)和脂多糖(LPS)对鸭生长性能及免疫功能的影响。【方法】随机选用80只28日龄健康山麻鸭,平均分成4组,包括对照组、MLT组、MLT+LPS组和LPS组。试验过程中测定山麻鸭体质量和采食量,并于试验最后一天(第50天)进行采样和采血测定生化、生长相关激素等指标。【结果】与对照组相比,LPS降低了山麻鸭生长性能,MLT提高了山麻鸭生长性能,但差异不显著(P0.05);LPS使血清中胰岛素样生长因子、甲状腺素水平下降(P0.05),MLT显著提高了血清生长激素、胰岛素样生长因子和甲状腺素水平(P0.05);LPS使胸腺指数下降、脾脏指数上升(P0.01)。观察组织切片发现,LPS使胸腺、肝脏和脾脏出现一定程度的损伤,而MLT组无明显损伤;LPS显著提高了血清谷草转氨酶活性(P0.05),MLT显著降低了谷草转氨酶活性(P0.05),提高了血清白蛋白含量(P0.05)。【结论】LPS降低山麻鸭生长性能和免疫功能,MLT对LPS刺激引起的生长缓慢和免疫功能下降等机体损伤起到缓解作用。     

多重PCR检测副猪嗜血杆菌毒力相关三聚自转运蛋白

为建立快速检测副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)毒力相关三聚自转运蛋白(Trimeric autotransporters,Vta A)的多重PCR方法,根据HPS Vta A Vta A1和Vta A3基因为模板,设计合成了2对特异性引物,进行多重PCR扩增及反应条件的优化,并对多重PCR扩增的敏感性和特异性进行了分析.结果表明:所建立的多重PCR检测方法对HPS Vta A1和Vta A3基因分别能扩增出406和291 bp的目的条带,最小检测限为3.4×107cfu/m