淮南地区土壤氨氧化细菌属的组成研究

采用琼脂糖凝胶电泳法研究淮南地区土壤氨氧化细菌群落组成.将提取的土壤DNA溶液经过纯化、PCR扩增,与氨氧化细菌的4个属的细菌DNA进行琼脂糖凝胶电泳,发现土壤中主要含有亚硝化单胞菌属(Nitrosomonas)和亚硝化球菌属(Nitrosococcus),不含有亚硝化螺菌属(Nitrososoira).对土壤DNA的提取采用了SDS高盐提取法、Edgcomb改进法和Tsai报道法3种方法.比较电泳条带发现,Tsai报道法提取效果最好.     

23个玉米灰斑病菌菌株亲缘关系的血清学研究

利用血清学反应,可以对玉米灰斑病菌不同菌株间的亲缘关系进行分析。研究表明,利用菌丝研磨物的上清液作为抗原可成功制备抗血清,虽然效价不很高,但足以用来研究病菌间的亲缘关系。从血清学研究结果可以看出,在蛋白质水平上,玉米灰斑病菌存在普遍的相似性,说明玉米灰斑病菌具有广泛的同源性,是一种普遍分布的地区间相似的病原菌。研究表明,玉米灰斑病菌不同菌株的血清学反应不同,主要表现在沉淀线的条数和颜色深浅上,说明玉米灰斑病菌在血清学上存在多样性。     

一种木本植物RNA和DNA的简捷提取方法

将尾叶桉(Eucalyptus urophylla)叶片在液氮中研磨成粉,先用含山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、牛血清白蛋白、聚乙二醇和亚精胺的提取缓冲液使总核酸沉淀,同时去除了大部分次生代谢物质。然后用山梨醇、月桂酰肌氨酸钠进一步裂解细胞,释放核酸。再用CTAB与核酸结合成复合物溶于高盐溶液。用氯仿/异戊醇除蛋白质后,离心得含总核酸的上清液。运用钙盐分步沉淀法,先在上清液中加入1/10体积的10%氯化钙溶液,使DNA与Ca2+结合成DNA钙盐。向溶液中加入1/5体积的乙醇,使DNA钙盐形成沉淀析出,离心得DNA后,再增大乙醇浓度使RNA钙盐沉淀。得到的DNA和RNA用非变性琼脂糖凝胶进行质量检测,可得完整的RNA和DNA条带。此法经济、快捷,可同时得到DNA和RNA。     

六出花基因组DNA的提取

通过采用Doyle CTAB改良方法Ⅰ、Doyle CTAB改良方法Ⅱ、Doyle CTAB改良方法Ⅲ、Doyle CTAB改良方法Ⅳ、SDS(十二烷基硫酸钠)法和高盐沉淀法对六出花叶片基因组DNA进行提取,经紫外分光光度计分析及琼脂糖凝胶电泳检测对所提取DNA的浓度、纯度、产率进行比较分析,结果表明:提取DNA质量效果最好的方法是Doyle CTAB改良方法Ⅲ,得到的DNA产率为4 081.7 μg/g,其电泳条带也最为清晰;而提取DNA质量效果最差的方法是Doyle CTAB改良方法Ⅳ,其产率为723.3 μg/g.     

琼脂糖凝胶电泳检测烟粉虱Q型与B型微卫星位点BEM23的研究

近年来烟粉虱Q型和B型在国内外许多地区混合发生并造成危害,2种生物型的快速鉴定对于烟粉虱有效防控具有重要的指导意义。在前期研究基础上,使用琼脂糖凝胶电泳对2005—2009年山东各地采集的烟粉虱样品（139头Q型烟粉虱、239头B型烟粉虱）微卫星位点BEbi23进行了检测研究。结果表明,绝大多数Q型烟粉虱只扩增到约400bp的片段（占98．6％）,而多数B型烟粉虱扩增到的片段约200bp（占97．9％）。鉴于绝大多数Q型和B型烟粉虱分别只存在约400bp和约200bp产物片段,该方法可用于B型、Q型烟粉虱大量样品生物型的初步筛选。     

半抗原-载体蛋白偶联物的三种电泳鉴定方法

【目的】建立一种简单方便的半抗原-载体蛋白偶联物电泳鉴定方法。【方法】选用SDS-PAGE、非变性琼脂糖凝胶电泳、高效毛细管区带电泳3种方法对载体蛋白、偶联剂变性的载体蛋白、半抗原-载体蛋白进行比较鉴定,同时与光谱法结果比较。【结果】对分子量差异较小的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,SDS-PAGE不能有效分辨;但偶联前后载体电荷有变化时,非变性琼脂糖凝胶电泳却能有效分辨游离的载体蛋白和半抗原-载体蛋白偶联物,相对SDS-PAGE表现出更高的分辨灵敏度;毛细管区带电泳能高效分辨载体和半抗原-载体蛋白偶联物,结果直观,但需较贵重的专用仪器。琼脂糖电泳和毛细管电泳法与可见-紫外光谱法鉴定结果一致。【结论】3种电泳方法各有优缺点,非变性凝胶电泳简便、廉价、有效,较适合普通实验室使用。     

紫外辐射诱导草鱼肾脏细胞系（CIK）的程序性死亡

本文报道研究紫外辐射对离体培养的草鱼肾脏细胞系(CIK)的影响。实验结果显示,在距离15W紫外灯40cm下照射草鱼的CIK细胞3min后,CIK细胞核即产生固缩、碎裂现象,琼脂糖凝胶电泳可见典型的DNA梯形带,流式细胞仪检测发现有亚G1峰产生。结果表明,短时间的紫外辐射即可诱导CIK细胞发生细胞程序性死亡。     

枇杷RAPD扩增产物的不同电泳检测及其序列特征分析

为了更好地将RAPD技术应用于枇杷品种资源的鉴定以及遗传基础的研究,在选用11个碱基引物以及严格筛选PCR退火温度的最新RAPD技术优化的基础上,以16个枇杷品种为试验材料,对琼脂糖凝胶以及聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳检测的RAPD PCR扩增产物效果进行比较。结果表明,聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳检测出的总谱带数以及多态性谱带数均高于琼脂糖凝胶。根据两种电泳系统获得的标记信息进行枇杷品种遗传聚类分析,结果表明PAGE电泳的分析结果与枇杷的分类情况更为一致。随机对挑选的38个片段进行克隆与测序,发现37个片段都是对应引物的RAPD扩增产物,其中有6条是编码蛋白的基因片段,说明RAPD不仅扩增基因组上的非编码蛋白序列,而且可以扩增编码蛋白的基因片段,是能够揭示枇杷品种间基因组信息异同的理想的DNA标记技术。     

逆转录环介导等温扩增技术检测花生条纹病毒

花生条纹病毒病(Peanut stripe virus,PStV)是我国花生上流行最广[1]、田间发病率最高的一种花生病毒病,严重影响花生的产量和品质.由于PStV存在不同症状类型株系,在中国占优势的轻斑驳株系,引起花生症状较轻,并且与其他花生病毒病症状类似,不易分辨,目前主要利用PCR方法对PStV进行检测[2],但该方法检测时间长,并且需要专业仪器,较难普及.     

新疆军垦型细毛羊MHC基因临近区段3个遗传标记的研究

比较基因组学是基因组学的重要分支,现已成研究生物基因组的最重要的策略与手段.研究发现绵羊与牛及山羊之间基因组序列的同源性或同线性程度要高于其他物种,能利用牛和山羊的基因组研究结果进行比较基因组学研究,进而阐明绵羊的基因组功能.试验采用琼脂糖凝胶电泳技术,对新疆军垦型细毛羊20号染色体MHC基因邻近区段的DMB_EX2、MCMA36、CP73 三个分子标记分别进行了PCR产物的检测、测序和同源性比对.结果表明,这3个序列均与相关物种的对应序列具有很高的同源性:DMB_EX2与牛的对应序列的同源性为89;,MCMA36与山羊的对应序列的同源性为97;,CP73与羊的对应序列的同源性为96;.