饲料中牛羊源性成分的定性检测——定性聚合酶链式反应法(PCR)法

目的:为防止疯牛病和痒病的传播。方法:研究提供了一种利用从动物饲料中提取牛羊动物基因组DNA的方法,并依据牛、羊基因组DNA的特异性序列片段,利用种属特异性的引物,通过PCR扩增这一特定的DNA序列,通过电泳分离PCR产物,以长度的PCR产物作对照。结论:实现了对动物饲料中牛、羊源成分的检测。     

鲫鱼基因组DNA提取方法的探讨

以鲫鱼的血液、肌肉、肝、肾为材料，采用苯酚一氯仿法、试剂盒法提取鲫鱼基因组DNA，对不同方法提取的结果进行了紫外分光光度、琼脂糖凝胶电泳、微卫星PCR扩增等方法的鉴定。结果表明不同方法提取的鲫鱼基因组DNA浓度在385．8～3167．5ng/μL，A260／280比值处于1．66～1．87，所提取的DNA适合微卫星PCR扩增。因此，用苯酚-氯仿法对鲫鱼的血液、肌肉、肝、肾，用试剂盒法对鲫鱼的血液均能提取鲫鱼基因组DNA。     

旱稻原生质体培养和植株再生的研究

旱稻仿野生87-707品系具有多年生趋势，是我院研究多年生旱稻的一个材料。我们用它进行原生质体培养，想为研究多年生旱稻基因改良打下基础。现用该品系的成熟胚诱导的愈伤组织，在含有氨基酸丰富的AA培养基中进行细胞悬浮培养。取该细胞悬浮培养物游离的原生质体，用琼脂糖包埋于改良的KM8P培养基中，发生了持续分裂。经一系     

一株Ⅰ型鸽副黏病毒的分离与鉴定

2011年,江苏某鸽场饲养的美国白羽王鸽,4倍剂量饮水免疫新城疫La Sota株活疫苗,2个月后部分鸽出现食欲不振、呼吸困难、水样腹泻、颈部歪斜、瘫痪以及颈翅颤抖为主要特征的疫病,鸽群整体发病率在40％左右,死亡率达到30％.采集肺脏、脾脏、肝脏等组织进行病毒的分离鉴定,最终确认该病毒为Ⅰ型鸽副黏病毒(PPMV-1).     

对4家猪场猪细环病毒I型的分子流行病学调查

为了解猪细环病毒Ⅰ型（TTV1）的流行情况,对莱西、城阳、胶州、莱阳四家规模化养猪场的59份血清进行了TTV1分子流行病学调查,从血清中提取病毒DNA,然后通过TTV1引物进行PCR检测样品的感染情况。检测结果表明,所检测的4家养猪场均检测到TTV1感染。其中,莱西某猪场的感染率最高,为55.2%;莱阳、城阳、胶州猪场的感染率分别为30%、10%、20%。目前TTV1不能造成直接的致病作用,但是在我国很容易与其他病原发生混合感染,导致协同致病,因此了解TTV1在猪场中的存在情况具有重要意义。     

微量提取培养细胞总RNA的研究

从20世纪90年代开始,人类对基因组的研究进入到功能基因组时代,对RNA,特别是mRNA的研究已越来越受到人们的重视,因此RNA的提取技术也得到了极大的提高。本研究在对Chomlzynski介绍的异硫氰酸胍—酚—氯仿一步法进行改良的基础上,对比分析了3种微量提取培养细胞总RNA的方法,经琼脂糖凝胶电泳技术检验,发现利用水饱和酚分级法、RNA酶抑制剂—酚法提取RNA的效果较好,所得RNA适用于各种研究。     

猪伪狂犬病毒血清学调查及部分特性的研究

从山东某猪场疑似猪伪征犬病死亡的仔猪大脑、扁桃体等组织中分离到一株病毒。该病毒接种家兔后，使家兔产生典型的奇痒症状，且能在鸡胚成纤维细胞（CEF）上增殖，并可产生典型的细胞病变（CPE）。CEF细胞接种该病毒后，进行DNA琼脂糖凝胶电泳时，呈现“梯状”条带，说明病毒感染CEF细胞后，使细胞产生“凋亡”现象。综合本病毒的各种特性，初步鉴定为伪狂犬病毒。应用伪狂犬乳胶凝集诊断试剂盒对来自山东6个猪场共100份血清进行了血清学调查。共检出阳性血清25份，血清阳性率达25％。     

从猪血中提取高质量基因组DNA的研究

经研究改进 ,建立了一种从猪血中提取高纯度全基因组DNA的有效方法。经 2 %琼脂糖凝胶电泳检测 ,DNA带型整齐集中 ,无拖尾现象 ,证明DNA分子片段完整 ,没有降解。紫外分光光度计检测 ,DNA的OD2 60 /OD2 80 达 1.75± 0 .0 5 ,证明所提DNA质量较好 ,用于PCR扩增 ,可以得到满意的扩增效果 ,且避免了用苯酚等剧毒试剂 ,是一种理想的DNA提取法     

Zhangfei融合蛋白的纯化及其免疫效果

【目的】纯化Zhangfei融合蛋白并检测其免疫原性,为研究其在生殖内分泌调节中的作用提供理论依据。【方法】通过大肠杆菌原核表达系统进行Zhangfei融合蛋白的表达,筛选出最佳诱导表达条件,采用SDS-PAGE凝胶检测Zhangfei融合蛋白的表达情况,比较谷胱甘肽琼脂糖凝胶和电洗脱2种纯化Zhangfei融合蛋白的方法,并测定纯化的Zhangfei融合蛋白免疫Balb/c小鼠和家兔的效果。【结果】成功筛选出了表达Zhangfei融合蛋白的最佳诱导条件为IPTG终浓度3 mmol/L,诱导时间7 h;应用电洗脱方法可得到纯度较高的Zhangfei融合蛋白,其质量浓度为1.269 mg/mL,免疫小鼠的血清抗体效价达1∶5×103以上,免疫兔的血清抗体效价高达1∶3×106。【结论】电洗脱纯化Zhangfei融合蛋白的方法优于谷胱甘肽琼脂糖凝胶纯化法,Zhangfei融合蛋白具有良好的免疫原性。     

巯基乙醇在家蝇幼虫血淋巴中适宜添加量研究

[目的]为家蝇幼虫血淋巴抗菌活性物质的分离、纯化提供依据。[方法]以大肠杆菌为指示菌,利用琼脂糖孔穴扩散法研究巯基乙醇对家蝇幼虫血淋巴抑菌活性的影响,确定巯基乙醇作为抗氧化剂在家蝇幼虫血淋巴中的适宜添加量。[结果]巯基乙醇能抑制大肠杆菌的生长,抑菌效果随其浓度的增加更为明显。当巯基乙醇体积浓度≤10-6时,其对大肠杆菌无抑菌效果,说明巯基乙醇的最大非抑菌体积浓度为10-6。体积浓度为10-6的巯基乙醇可有效保护浓度小于或等于1∶5的家蝇幼虫血淋巴悬液不被氧化,且其对大肠杆菌的抑菌效果不受影响。[结论]巯基乙醇在家蝇幼虫血淋巴中的适宜加入量应根据试验中具体情况确定。