产气荚膜梭菌β1毒素基因克隆与表达

以C型产气荚膜梭菌中PCR扩增出β1毒素基因,构建了表达质粒p GEXKG-β1,将构建的KG-β1转化受体菌BL21(DE3),得到重组菌株BL21/KG-β1。对重组菌株诱导的表达产物进行了SDS-PAGE分析,结果表明重组菌株可以高效表达毒素蛋白。     

绿色荧光蛋白转基因小鼠胚胎成纤维细胞的分离和培养

研究了不同胎龄、消化液、培养液对转绿色荧光蛋白(GFP)基因小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)分离和培养的影响,并对其生长形态进行观察。结果表明,在实验室条件下,12.5～14.5d胎龄的GFP-MEF分离效果最好,0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA所用时间短,消化后培养细胞贴壁率高;GFP-MEF形态以小梭形为主,呈漩涡状、鱼群状生长;最佳培养液为DMEM添加10%胎牛血清。研究获得了实验室分离制备GFP-MEF的方法,为制作饲养层和进一步构建转基因动物奠定基础。     

体内、外卵母细胞对猪体细胞克隆胚胎发育潜力的影响

为探讨猪体内、外成熟卵母细胞对核移植重组胚胎发育能力的影响,试验通过激素促排获得体内成熟卵母细胞和收集废弃卵巢获取体外成熟的卵母细胞,分别构建核移植重组胚,比较其卵裂率、囊胚率及胚胎移植受孕情况。结果显示,PGC+PMSG+HCG组的平均排卵数（27.8枚/头）显著高于PGC+HCG （12.5枚/头）、PMSG+HCG （13.7枚/头）及自然发情组（11.5枚/头）（P<0.05）,体内收集到的卵母细胞,可用于构建核移植重组胚的可用卵率均达到90%以上,与其他处理组差异不显著（P>0.05）,说明通过激素处理可获得更多的可用卵母细胞,而且卵母细胞的质量没有显著差异;以体内和体外成熟卵母细胞作为核移植受体构建的克隆胚胎,二者的胚胎融合率（80.31%和79.29%）和卵裂率（90.40%和86.51%）差异均不显著（P>0.05）,但来自体内成熟卵母细胞克隆的胚胎发育至囊胚期的比例显著升高（P<0.05）;将体内、外成熟卵母细胞构建的核移植重组胚分别移植代孕母猪,头平均移植30或60枚时,体内成熟卵母构建的克隆胚胎移植出生仔猪10头,而体外培养卵母细胞构建的克隆胚胎均未着床受孕,表明通过激素促排获得的卵母细胞质量更好,能显著提高克隆胚胎的囊胚率,减少胚胎移植数量,提高代孕母猪的怀孕率。     

茎部长度为21、27、29bp的shRNA表达载体构建

利用shRNA(Small hairpin RNA)载体调控基因表达已经成为研究基因功能的有力工具。针对增强型绿色荧光蛋白标记基因(Enhanced green fluorescent protein,egfp),分别设计茎部长度为21bp、27bp、29bp的干扰片段,体外合成的单链shRNA片段退火后连入带有U6启动子的真核表达载体psiSTRIKE中,酶切及测序结果证明设计的干扰片段已经成功克隆进入表达载体,为进一步在小鼠细胞以及个体水平上综合评价不同茎部长度shRNA的干扰效应奠定了基础。     

山羊羔羊白肌病的防治

湖北省内某羊场多次出现四肢无力、卧地不起、迅速死亡为主要特征的山羊羔疾病,对该类羔羊进行剖检,均发现羔羊肌肉苍白,经实验室检查后诊断为硒缺乏症,即羊白肌病。从山羊羔羊白肌病的临床症状、发病原因等方面分析了该病的成因及主要特征,并提出了相应的防治措施。     

CRISPR/Cas9基因编辑技术介导SST基因敲除细胞的制备

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术制备了SST基因敲除的细胞。在猪SST基因第一外显子区域设计2个向导RNA (sgRNA),用PX459构建成表达质粒,电转染猪胎儿的成纤维细胞,在48 h后用嘌呤霉素筛选细胞。通过PCR扩增、测序检测,在获得的13个克隆中,有2株细胞未检测到基因敲除,4株细胞发生单等位基因敲除,7株细胞为双等位基因删除。筛选到的纯合子单克隆细胞可用于制备SST基因删除猪。     

规模化猪场猪瘟病原与抗体检测分析

为了解规模化猪场猪瘟野毒感染情况和猪瘟疫苗免疫效果,分别采用RT-PCR和ELISA方法对某场72份猪扁桃体样和419份血样进行了猪瘟病原和抗体检测。结果表明,该场无猪瘟野毒感染;种猪群猪瘟抗体阳性率高于90.3%、离散度低于33.1%,猪瘟疫苗免疫效果理想;保育猪猪瘟抗体阳性率仅为79.3%,离散度达到50.4%,抗体水平参差不齐,需采取综合防控措施进一步提高猪瘟抗体水平;母猪猪瘟抗体阳性率随着胎次的增加而呈递减趋势。     

冬季猪舍内气载微生物、粉尘浓度日变化及新风系统对其的影响

为了解冬季猪舍空气中有害物质日变化情况,2011年2—3月,检测1 d内猪舍内气载有害物质浓度以及运行新风系统后短时间内其浓度变化,探究冬季封闭猪舍内空气中气载有害物质浓度的日变化规律以及新风系统对猪舍微环境的影响。结果表明,冬季猪舍内1 d内粉尘浓度高峰期出现在7:00～9:00,最小值出现在19:00。气载需氧菌数和气载大肠杆菌数都呈现早晚高、中午低的趋势。运行新风系统后短时间猪舍内气载需氧菌、气载大肠杆菌浓度变化并不明显,而粉尘含量逐渐降低,3 h降到最低值,0.3 m处PM1、PM2.5、RESP、PM10和TSP的浓度降幅为67.65%、67.31%、67.86%、71.43%和72.84%(P0.05),1.5 m处PM1、PM2.5、RESP、PM10和TSP的浓度降幅为60.87%、61.05%、61.90%、62.76%和60.90%(P0.05)。新风系统在短时间内可有效降低封闭猪舍内粉尘浓度,但对气载微生物在短时间内降低效果不明显。     

原代猪成纤维细胞电转染条件的探索

用绿色荧光蛋白基因的DNA(p EGFP-N1)作为目的基因,对原代猪成纤维细胞电转染条件进行探索。结果表明,在电压1 200 V/cm、脉冲时间3 ms、p EGFP-N1添加量4 mg/m L时电转染效率最好。     

MyoD介导肌肉特异性基因染色质重塑激活与成肌分化控制

骨骼肌纤维的数目由出生前肌源细胞的成肌分化进程所决定,直接影响家畜的生长潜能和肉质.MyoD依赖的肌肉特异性基因的染色质重塑激活是控制成肌分化的重要方式,其作用模式已有一些报道.PI3K/Akt和p38信号也参与了这一过程的调控.对这一研究进展进行了综述.