鸡疫病防治中抗体检测问题分析

血清抗体检测是有效判定畜禽疫病的常用技术手段,在畜禽疫病防治中得到了广泛应用。本文探讨了抗体检测技术在鸡疫病防治中存在的五个方面的问题,以便得到重视和纠正。     

单链抗体对猪流行性腹泻病毒感染仔猪腹泻保护作用初步研究

猪流行性腹泻病毒能够引起猪流行性腹泻,病猪临床表现为呕吐、腹泻和脱水,该病给我国养猪业造成了巨大的经济损失。通过初步研究实验室保存的抗PEDV的单链抗体(scFv)的生物学特性。首先将实验室保存的scFv质粒转化至原核表达载体进行表达和纯化。ELISA和免疫荧光实验证实scFv与特异的PEDV反应。最后将scFv预先灌服仔猪,证实能够抑制PEDV引起的感染,给仔猪提供保护。本研究为后续新型抗病毒制剂的研究奠定了基础。     

水稻齿叶矮缩病毒Pns10蛋白在水稻原生质体内的表达

【目的】水稻齿叶矮缩病毒(Rice ragged stunt virus,RRSV)Pns10蛋白在介体昆虫细胞内可形成类似病毒原质(viroplasm)的内含体,是RRSV侵染介体所必需。然而Pns10蛋白在水稻寄主中是否具有类似功能及其表达情况如何未见报道。【方法】利用大肠杆菌系统表达Pns10蛋白,免疫家兔制备多克隆抗体;通过水稻原生质体病毒侵染体系,利用免疫荧光技术分析Pns10蛋白在水稻原生质体内的分布情况,利用实时定量PCR技术和Western blot技术分别检测Pns10 RNA和Pns10蛋白在水稻原生质体内的积累情况。【结果】将Pns10基因克隆到Gateway系统原核表达载体p DEST17中,IPTG诱导表达成功后,制备融合蛋白抗血清。Western blot检测显示,该抗血清可检测感病水稻叶片中的Pns10蛋白。病毒侵染水稻原生质体后,Pns10蛋白可形成类似病毒原质的内含体;Pns10 RNA在病毒接种8 h后开始积累,24 h后达到最大值,随后开始下降;Pns10蛋白在24 h后开始表达,之后维持较高水平,60 h后略有下降。【结论】成功获得了Pns10抗血清;Pns10在水稻原生质体内成功表达,可形成类似病毒原质的内含体,并且Pns10 RNA的表达先于其蛋白的表达。     

新城疫病毒免疫小鼠的免疫效价检测

本试验主要采用鸡胚尿囊腔繁殖病毒的方法繁殖新城疫病毒(NDV),差速离心法对NDV进行纯化,用纯化的NDV作为抗原,与弗氏佐剂充分乳化后,免疫8周龄的Balb/C小鼠。首免弗氏完全佐剂,二免、三免、四次加免用弗氏不完全佐剂。四免后第14天取免疫小鼠血清,用血凝抑制试验HI和间接ELISA测定抗体效价,分别为1:128和1:6.4×104,获得抗体与NDV具有良好的特异性反应,与鸡传染性法氏囊病毒、鸡传染性支气管炎病毒、鸡流感病毒均无交叉反应性。     

白斑综合证病毒胶体金免疫层析试剂板的研制

将胶体金免疫层析技术应用于对虾白斑综合征的诊断,研制了一种检测对虾中白斑综合征病毒的胶体金免疫层析试剂板.将胶体金标记的抗白斑综合征病毒单克隆抗体包被在金标垫上,将抗白斑综合征病毒多克隆抗体和羊抗鼠IgG分别包被在硝酸纤维素膜的检测线和质控线上.通过双抗体夹心法检测样品中自斑综合征病毒含量.结果表明,该试剂板对白斑综合征病毒的最低检出限为1.0 mg/kg,特异性好,稳定性高,整个检测所需时间为8～10 min,适合现场快速检测.     

牛支原体P48蛋白卵黄抗体的制备

为了研究牛支原体P48抗原蛋白的免疫学功能及相应卵黄抗体的生物学特性,探究其抗体效价随免疫时间的变化规律,试验采用牛支原体P48蛋白疫苗免疫健康产蛋母鸡,定时采血并收集鸡蛋,用水稀释法结合硫酸铵盐析法制备特异性卵黄抗体,利用间接ELISA法检测血清抗体(IgG)和卵黄抗体(IgY)效价。结果表明,低、中、高剂量组均能诱导蛋鸡产生有效免疫应答,血清抗体效价与卵黄抗体效价的变化趋势基本一致,但卵黄抗体的产生滞后于血清抗体,在首次免疫后8~10周Ig Y效价达到峰值,其中中剂量组的免疫效价最高,最高效价为1:212。经SDS-PAGE检测,制备所得的纯度达86%以上,得率在8.6 mg/m L以上。说明采用牛支原体P48蛋白免疫蛋鸡可制备高效价、高纯度的抗牛支原体P48蛋白卵黄抗体,从而为卵黄抗体在牛支原体的检测与防控方面的研究奠定了基础。     

养猪生产中应用的抗生素生长促进剂替代方案(综述)(续)

<正>上期回顾:上一期主要介绍了AGPs替代方案中的抗菌肽和粘土矿物的作用等。3卵黄抗体在感染致病性微生物的情况下,使用卵黄抗体(一般指IgY)似乎是一个很有潜力的替代抗生素生长促进剂的技术方案。为了生产这些抗体,需要给产蛋鸡注射能引发猪特定疾病的致病原。给产蛋鸡注射这些抗原后会诱发免疫反应,产生相应的抗体。这些抗体通常都沉积在卵黄中。加强免疫是为了让抗体不断地沉积到卵黄中。然后将这些抗体从卵黄中提取出来并进行进     

中药抗体复合制剂防治仔猪腹泻试验

选择待开产未经大肠杆菌免疫来航蛋鸡150只,用ETEC K88+菌株C83907进行免疫后,收集高免蛋制备卵黄抗体粉。将中药提取物、卵黄抗体粉与载体按比例混合制成中药抗体复合制剂。分别选择3日龄和21日龄的杜×长×大三元杂交早期断奶仔猪18只和40只,人工感染C83907大肠杆菌后,口服含制备的中药抗体复合制剂进行被动免疫试验。结果表明:3日龄仔猪服用抗ETEC中药抗体复合制剂后,平均增重接近对照组(p>0.05),仔猪死亡率显著小于对照组(p<0.01)。21日龄服用中药抗体复合制剂组的仔猪增重高于卵黄抗体组(p<0.05)。研究结果表明,喂以6 g和10 g抗ETEC卵黄粉组的治愈率与抗生素治疗组差异不显著(p>0.05),比单一使用纯中药和卵黄抗体使用效果好(p<0.01)。     

猪血凝性脑脊髓炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及山东省猪血清抗体检测分析

首先应用血凝抑制试验(HI)对从山东省部分地区采集的178份猪血清样品进行了猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)抗体检测。结果显示,这些猪群中HEV的HI抗体总体阳性率高达61.24%(109/178),说明HEV的感染较为普遍。同时,以纯化的病毒作为包被抗原,通过优化反应条件,成功建立了HEV抗体间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法。应用该ELISA方法对从山东地区猪血清中随机抽取的44份样品进行检测,结果显示,HEV抗体阳性率为72.73%(32/44);而HI抗体阳性率为56.82%(25/44)。两种检测方法的阳性符合率为92.00%。结果表明,建立的ELISA方法较HI方法敏感性高。     

一例猪伪狂犬病的诊断与综合防治

<正>伪狂犬病(Pseudorabies,PR)是由伪狂犬病毒(Pseudorabies Virus,PRV)引起的一种传染病[1],其主要特征为发热、奇痒(猪除外)和脑脊髓炎等。猪最易感染该病,尤其以0~4周龄的仔猪,感染后出现高热、上呼吸道炎症、扁桃体水肿、食欲废绝、流延、呕吐、腹泻、神经症状、麻痹、衰竭死亡等症状;妊娠母猪表现流产、产死胎或木乃伊胎,产出的弱胎通常在3~4 d内死亡;成年猪感染后症状轻微,只表现为一般