利用杆状病毒表达系统表达PRV/gE蛋白及间接免疫荧光抗体(IDF)检测方法的建立

为了建立高效灵敏的伪狂犬病病毒(PRV) gE蛋白的间接免疫荧光抗体诊断方法,本研究将PRV/HN/SMX/2012毒株gE蛋白的自身信号肽及胞外域片段克隆到pFastBacHT B载体上,构建重组质粒pFastBacHTB-gE,并转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经过3次蓝白斑筛选获得含有gE基因的重组杆粒rBacmid-gE。随后,将该杆粒转染至sf9昆虫细胞中,获得重组杆状病毒rAcMNPV-gE。经Western blot和间接免疫荧光实验(IFA)进行鉴定分析,发现重组gE蛋白在sf9细胞中表达。利用该sf9细胞建立检测血清中gE抗体的间接免疫荧光抗体(IDF)方法,通过反应条件的优化发现,将血清和羊抗猪FITC-IgG分别进行1∶40和1∶2 000稀释时所建立的方法能针对血清中gE抗体产生较强的特异性荧光;通过与商业化的ELISA检测gI/gE试剂盒(IDEXX)比较,所建立的检测方法与商业化试剂盒的总符合率为93.18%(164/176),阳性结果符合率93.75%(120/128),阴性结果符合率91.67%(44/48),2种方法存在很强的一致性(Kappa=0.832,CI=95%);-20℃条件下保存2个月的稳定性和重复性良好。     

猪YTHDF2蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

YTH家族蛋白2(YTH domain-containing family protein,YTHDF2)作为一种m~6A修饰的结合蛋白,可对底物mRNA的剪接,翻译,降解等过程进行调控。本研究通过RT-PCR首次获得了猪YTHDF2编码基因序列,全长1 743 bp,编码580个氨基酸,基因进化树分析显示该基因在各物种间保守性较高。将猪YTHDF2编码基因克隆至原核表达载体pET-28a (+)中,重组质粒pET-28a (+)-YTHDF2在大肠杆菌BL-21菌株中进行原核表达,成功获得了大量带His标签的猪YTHDH2重组蛋白,大小约70 kD。以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备猪YTHDF2多抗血清,ELISA结果表明制备的兔抗猪YTHDF2多抗血清效价为1:204 800,间接免疫荧光(IFA)和Western blot试验均表明该多克隆抗体具有良好的反应性和特异性。猪YTHDF2基因序列的获得及多克隆抗体的制备为进一步研究YTHDF2在猪mRNA m~6A甲基化过程中的生物学功能奠定了基础。     

血清抗体监测在猪疫病防控中的运用

血清抗体监测是一种新型的动物疾病诊断技术,具有高效性和准确性等特点,将其合理应用到猪疫病防控中,有助于防控效果的提升。只有熟练掌握该技术的应用要点,才能将该项技术的作用在猪疫病防控中充分体现出来,实现科学防病。     

盐酸克伦特罗多克隆抗体和量子点的偶联

为在制备盐酸克伦特罗和水溶性羧基量子点偶联物,给荧光快速检测技术的研究提供良好的依据。实验采用EDC/NHS两种偶联剂将二者共价偶联到一起,并经紫外扫描法、荧光扫描、斑点法、荧光免疫分析法对二者偶联效果进行了鉴定,结果表明,量子点和抗体偶联成功,偶联后吸收峰变宽、吸光度变大、荧光强度增加、抗体效价稍低,但不影响试验结果,可为盐酸克伦特罗药物的多残留试纸条及试剂盒的开发提供良好的参考依据。     

单链抗体对猪流行性腹泻病毒感染仔猪腹泻保护作用初步研究

猪流行性腹泻病毒能够引起猪流行性腹泻,病猪临床表现为呕吐、腹泻和脱水,该病给我国养猪业造成了巨大的经济损失。通过初步研究实验室保存的抗PEDV的单链抗体(scFv)的生物学特性。首先将实验室保存的scFv质粒转化至原核表达载体进行表达和纯化。ELISA和免疫荧光实验证实scFv与特异的PEDV反应。最后将scFv预先灌服仔猪,证实能够抑制PEDV引起的感染,给仔猪提供保护。本研究为后续新型抗病毒制剂的研究奠定了基础。     

春冬季节种猪疾病防控

春冬两季是种猪感染性疾病的高发季节,如养殖者疏于防控管理,将很可能导致大规模的猪群发病问题,对养殖工作的经济效益产生严重影响。基于此,本文首先从传染性胃肠炎和流行性腹泻两个角度入手,阐述了春季常见的种猪疾病类型及其防控方法;其后,围绕圆环病毒病和传染性胸膜肺炎两个方面,分析了冬季常见的种猪疾病类型及其防控方法。     

蛋鸡免疫常见失误分析

(一)免疫程序上容易发生的问题主要有4个方面:1.小鸡未免疫活疫苗之前,先免疫灭活疫苗。有些养殖户对鸡群在第1周免疫新城疫+传染性支气管炎+禽流感油苗,第2周免疫新城疫的活苗。而一般的免疫原则是先免活苗,激活免疫器官,较快产生抗体,以抵御周围环境中野毒的攻击;然后进行灭活苗的免疫,使之持续不断的产生抗体,较长期的抵御外界病毒侵袭。2.活苗免疫间隔时间过短。免疫新城疫、传染性法氏囊炎、传染性支气管炎、传染性喉气管炎、     

鸡传染性法氏囊病的防疫新技术

法氏囊病是一种引起免疫抑制的特殊疾病,暴发后由于免疫抑制,导致大肠杆菌、传支、新城疫的并发感染,造成症状不明显,诊断困难。此病于1962年首次在美国特纳华州     

影响均匀有效抗体产生的因素

在当前情况下,实施免疫是有效控制动物疫病发生和传播的主要手段之一,然而免疫后抗体水平不高甚至导致动物发病死亡的现象常有发生。随着国家对地县级兽医室的投入加大以及定期规范性的考核,目前地县级实验室基本上能开展如猪瘟、猪蓝     

鱼肠道弧菌免疫检测方法的研究

采用灭活的鱼肠道弧菌作为抗原,制备兔抗血清,建立了鱼肠道弧菌的间接荧光抗体检测技术(indirect im-munofluorescence assay test,IFAT)、Western-blotting免疫印迹检测技术。IFAT结果显示阳性信号覆盖整个菌体,明亮,清晰,荧光信号呈长弧形且两端钝圆,与鱼肠道弧菌形状一致。Western-blotting结果显示共10条蛋白带发生免疫反应,其中6条蛋白带结果较清晰,显示出较强的特异性免疫反应,阴性对照组无条带。IFAT和Western-blotting结果说明所建立检测方法能够准确、快速的检测出鱼肠道弧菌。