盐酸克伦特罗人工抗原及抗体的制备

为了制备盐酸克伦特罗(CL)人工抗原及抗体,试验采用重氮化法将盐酸克伦特罗与经过活化的牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)分别偶联,合成免疫抗原(CL-BSA)和检测抗原(CLOVA),经紫外光谱扫描对偶联物进行鉴定;用免疫抗原免疫BALB/c小鼠制备盐酸克伦特罗多克隆抗体,间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定抗体效价。结果表明:盐酸克伦特罗人工抗原合成成功,制备的鼠源多克隆抗体效价达1∶64 000,该抗体可用于下一步试验。     

水溶性量子点标记空肠弯曲菌黏附蛋白的制备

为建立荧光免疫分析方法对空肠弯曲菌的快速检测,利用基因工程技术构建pET32a-peb1A原核表达载体,并对重组蛋白进行了抗原性分析。利用共价偶联的方法,在水溶性缩合剂EDC和催化剂DMAP的作用下,使水溶性量子点的羧基与重组蛋白的羟基结合,发生酯化反应,并通过磷酸盐缓冲溶液进行透析纯化得到目标偶联物。采用荧光分光光度法对偶联物进行表征,并利用荧光偏振免疫分析方法对空肠弯曲菌阳性血清进行检测。结果表明:空肠弯曲菌黏附蛋白PEB1A具有良好的抗原性,且量子点标记空肠弯曲菌黏附蛋白前后的荧光光谱发射峰由595 nm偏移至592 nm。示踪物与阳性血清混合前后荧光偏振值变化△80mP。由此证明,空肠弯曲菌黏附蛋白成功偶联到水溶性量子点上,且结构未受到破坏。通过荧光偏振法实现了对空肠弯曲菌的检测,所制备的示踪物具有良好的特异性,为建立荧光疫分析方法对空肠弯曲菌的快速检测提供依据。     

克伦特罗小分子半抗原偶联比率的测定方法研究

利用重氮化两步法将盐酸克伦特罗(CL)分别偶联到牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)上制得了免疫抗原BSA-CL和包被抗原OVA-CL。建立了用紫外分光光度法测定偶联比率的方法,测得它们的偶联比率分别为39∶1和24∶1。     

畜产品中盐酸克伦特罗残留的风险评估

为了提高我国畜产品的质量,严禁盐酸克伦特罗在畜牧业生产中的应用,本文从危害识别、危害描述、暴露评估、风险描述等方面对盐酸克伦特罗进行了风险评估;并根据我国目前盐酸克伦特罗的使用情况和管理情况,提出了风险管理的建议,为管理部门制定管理措施提供依据。     

酶联免疫吸附法测定肉组织及尿液中“瘦肉精”产生误差分析及解决方法

在实验室对瘦肉精的检测,常用的一种方法是酶联免疫吸附法（ELISA）,即利用免疫学抗原抗体特异性结合和酶的高效催化作用,通过化学方法将植物辣根过氧化物酶（HRP）与克伦特罗（CL）结合,形成酶偶联克伦特罗。     

综述盐酸克伦特罗的检测方法

“瘦肉精”是一类违禁药物的总称,主要有盐酸克伦特罗、莱克多巴胺、沙丁胺醇。硫酸沙丁胺醇、硫酸特布他林、西巴特罗及盐酸多巴胺等7种。目前,盐酸克伦特罗的检测方法主要有高效液相色谱法、气象色谱一质谱法、酶联免疫吸附测定法、放射免疫分析技术、滴金免疫技术、时间分辨荧光免疫分析技术、毛细管区带电泳法和生物传感器技术等。文章就盐酸克伦特罗的检测方法作一综述。     

碳量子点应用于鼠伤寒沙门菌检测的初步研究

旨在制备基于碳量子点(carbon quantum dots,CDs)的免疫荧光探针,初步建立鼠伤寒沙门菌的快速检测方法,以柠檬酸和尿素作为碳源,利用微波法对碳量子点制备的微波时间、透析袋规格等条件进行了优化,再使用化学偶联法将碳量子点与鼠伤寒沙门菌抗体结合制备免疫荧光探针C-IgG,使之借助抗原抗体特异性结合和荧光实...     

盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制

研制一种快速、简便的基于胶体金免疫层析法的试纸条,以用于对猪尿中盐酸克伦特罗的检测。以胶体金标记盐酸克伦特罗单克隆抗体竞争性膜层析技术制成了猪尿液中盐酸克伦特罗残留检测的快速检测试纸条。如待测尿样中无盐酸克伦特罗,则金标抗体能顺利地与固相载体结合,形成肉眼可见的红色带;如待测尿样中含有盐酸克伦特罗,则与金标抗体以同样的机会与固相载体结合,竞争性地占去了金标抗体与固相载体结合的机会,使金标抗体与固相载体的结合量减少,无法形成肉眼可见的红色带。经过试验制成了可检测出猪尿样中盐酸克伦特罗浓度为2 ng/mL的试纸条,可在8 min完成测试,肉眼即可判断;该试纸条灵敏度能够达到临床使用的要求,且无需任何仪器设备,具有敏感、特异、快速、简便的特点,适用于现场快速检测和筛选工作。     

莱克多巴胺多克隆抗体的制备

采用多元酸酐法活化盐酸莱克多巴胺，用混合酸酐法将活化的莱克多巴胺与载体蛋白（KLH，BSA）偶联，制备了莱克多巴胺免疫原KLH-Rac和包被抗原BSA-Rac。以KLH-Rac免疫新西兰白兔获得了莱克多巴胺多克隆抗体，以BSA-Rac为包被抗原，采用间接ELISA检测抗血清，其效价达到1：6000，间接竞争ELISA测得抗血清的IC50值约为5ng／mL，其与克伦特罗、沙丁胺醇、特布它林的交叉反应性小于0．01％。     

盐酸四环素人工抗原的合成及鉴定

本试验旨在合成盐酸四环素人工抗原,为其单克隆抗体的制备奠定试验基础。将盐酸四环素(TCH)发生霍夫曼降解和重氮化反应生成重氮盐,再与蛋白质载体(BSA,OVA)偶联生成免疫原和包被原,对偶联产物采用三氯化铁及紫外扫描法鉴定偶联成功,且免疫原和包被原的摩尔结合比分别约为3.4∶1和4.2∶1。用免疫原免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA检测抗体效价,采用竞争ELISA法测IC50,获得了效价为1∶51200I、C50为16.91 ng/mL的多克隆抗体,最终证明人工抗原制备成功。