激活HH信号通路抑制猪ADSCs向脂肪细胞的分化

为探讨HH信号通路在脂肪细胞分化过程中的作用机制,以猪脂肪间充质干细胞(ADSCs)为材料,应用油红O染色法检测ADSCs成脂分化过程中的形态变化;采用荧光定量PCR及Western Blot的方法检测HH通路Gli1及脂肪细胞分化转录因子的时序表达。通过嘌呤衍生物2,6,9-三元取代嘌呤(Purmorphamine,PM)激活猪ADSCs细胞中HH信号通路,探讨体外激活HH信号通路对猪ADSCs向脂肪细胞分化的作用及其机制。结果显示,在成脂诱导分化的过程中,经5μmol/mL的PM持续处理,细胞中Gli1的mRNA及蛋白表达量增加;猪ADSCs向脂肪细胞分化的数目减少、细胞内甘油三酯含量降低;脂肪细胞分化关键转录因子C/EBPα和PPARγ的表达受到抑制。以上结果表明,激活HH信号通路可通过下调PPARγ和C/EBPα的表达抑制猪ADSCs向脂肪细胞的分化。     

山羊p300基因生物信息学分析及其在主要器官中的表达

为探讨山羊p300基因的基因组特征及其在主要器官中的表达,本研究从染色体定位、基因结构、序列比对等方面对p300基因进行生物信息学分析,并通过实时定量PCR技术检测了p300基因在三月龄胎羊八种不同器官的表达情况。实验表明,p300基因定位于5号染色体,包含31个外显子,跨越长度63 766 bp,mRNA总长9 571 bp,CDS全长7 235 bp,编码2 411个氨基酸。p300在物种间保守性较高,其中山羊与绵羊同源性最高。此外,p300在山羊的8种器官中均有表达,且在心脏中相对表达量最高。     

METTL23基因在猪卵母细胞、早期胚胎和主要器官中的表达

METTL23是一种精氨酸甲基转移酶,通过表观遗传机制调控基因表达,在早期胚胎和器官生长发育方面发挥重要的调控作用。本实验借助在线数据库和基因分析软件对猪METTL23进行生物信息学分析,得知METTL23序列包含5个外显子,定位于12号染色体上,长度4 874 bp,mRNA全长2 501 bp,CDs全长573 bp,编码190个氨基酸。猪和羊之间METTL23同源性最高、亲缘关系最近。同时通过qRT-PCR技术,探究了METTL23在猪卵母细胞、早期胚胎以及心、肝、脾、肺、肾、睾丸和卵巢7种组织器官中的相对表达量。结果发现:MTEEL23在猪卵母细胞和早期胚胎中均有表达,其中生发泡期(Germinal Vesicle,GV)卵母细胞表达量最高,第二次减数分裂中期(Metaphase II,MII)卵母细胞和1-细胞胚胎时期表达量相似,但从1-细胞时期开始表达量逐渐下降,8-细胞时期降至最低,桑葚胚时期开始上升并持续到囊胚;METL23在猪各组织器官中的表达比较稳定,其中肝的表达量最高,其次依次为睾丸>肾>心>卵巢>脾>肺,且差异显著。本研究表明,METTL23在物种间的保守性较高,且在猪卵母细胞、早期胚胎和主要器官均有表达,METTL23可能在猪早期胚胎及组织器官发育过程中发挥重要作用。     

猪β防御素-1基因乳腺特异性表达载体的构建

为构建标记基因可去除的β防御素-1(pBD-1)基因乳腺特异性表达载体,利用RT-PCR方法从猪脾脏中克隆获得pBD-1基因,再插入乳腺特异性表达骨架载体pBC1-neo中;经PCR、酶切电泳以及测序鉴定,确认成功构建出乳腺特异性表达pBD-1的载体。进一步将上述功能片段亚克隆至能将标记基因全部去除的骨架载体MCS-3s-loxP-GFP中,成功构建了一种筛选标记可全部去除的乳腺特异性3s-loxP-GFP-pBC1-pBD1转基因载体。该载体为研究pBD-1蛋白的抗菌活性、抗菌机制,以及创制乳腺高效表达pBD-1的转基因猪育种新材料和通过哺乳以提高新生仔猪抗病力奠定了基础。     

山羊FST慢病毒载体构建及其对卵巢卵泡颗粒细胞增殖的影响

研究卵泡抑素(FST)对山羊卵巢卵泡颗粒细胞增殖的影响。采集山羊卵巢组织、分离培养原代卵巢卵泡颗粒细胞,RT-PCR克隆山羊FST,设计shRNA片段,构建慢病毒过表达载体和干扰载体,感染原代卵巢卵泡颗粒细胞,qPCR技术检测过表达与干扰的效果, CCK-8检测细胞的增殖效果。结果显示:分离培养的山羊卵巢卵泡颗粒细胞经促卵泡素受体(FSHR)免疫荧光鉴定,阳性率为95%;慢病毒感染颗粒细胞时荧光蛋白的表达占比80%;qPCR验证FST过表达和干扰慢病毒载体的效果均显著(P0.05);过表达FST显著(P0.05)抑制卵巢卵泡颗粒细胞的增殖,干扰FST显著(P0.05)促进卵巢卵泡颗粒细胞增殖。笔者分离出山羊卵巢卵泡颗粒细胞,成功构建FST过表达和干扰两种慢病毒载体,感染结果表明FST能够抑制山羊卵巢卵泡颗粒细胞的增殖,为进一步研究FST在哺乳动物卵泡发育调控中的作用及其机制提供了基础资料。     

干细胞因子对小鼠附植前胚胎体外发育的影响

为优化胚胎体外培养体系,提高胚胎体外培养发育率和发育质量,以昆明小鼠体内受精胚、体外受精胚和孤雌激活胚为研究对象,研究不同浓度干细胞因子对小鼠不同来源胚胎体外发育的影响。结果表明:在KSOM培养液中,小鼠自然受精胚、体外受精胚和孤雌激活胚的卵裂率和桑椹胚率均无显著差异(P0.05),但IVN胚和IVF胚的囊胚发育率及囊胚细胞总数显著高于孤雌激活胚;培养液中添加不同浓度的干细胞因子对小鼠自然受精胚和孤雌激活胚的卵裂率、桑椹胚率、囊胚发育率和囊胚细胞总数都没有显著的影响(P0.05),但干细胞因子浓度为100ng·mL-1时,小鼠体外受精胚的桑椹胚率和囊胚发育率显著高于对照(P0.05)。     

乳腺特异性共表达4种脂肪酸合成酶载体 及其稳转山羊成纤维细胞系的构建

为改善山羊乳品质,创制乳汁中富含n-3不饱和脂肪酸的奶山羊育种新材料,首先构建了一种山羊乳腺特异性表达载体,以实现n-3不饱和脂肪酸合通路中4种脂肪酸合成酶基因(fat-1,fads2,elovl5和scd-1)的共表达。为初步验证该载体的有效性,通过脂质体法转染小鼠乳腺上皮细胞系C127,经G418筛选收集阳性C127转基因细胞,并对其进行反转录PCR(RT-PCR)检测。结果表明,4种基因均可在C127细胞转基因中表达。将该多基因共表达载体转染奶山羊成纤维细胞,通过G418筛选获得了稳定转染的细胞系。PCR结果显示,4个目的基因均成功整合到奶山羊成纤维细胞基因组中。总之,本研究成功构建了乳腺特异性共表达4种脂肪酸合成酶转基因载体及其山羊转基因细胞系,为创制乳腺特异性表达多不饱和脂肪酸的转基因奶山羊奠定了基础。     

猪体外受精胚胎、孤雌激活胚胎以及体细胞核移植胚胎的体外培养

【目的】本研究系统比较了体外受精胚（IVFEs）、孤雌激活胚（PAEs）以及体细胞核移植胚（NTEs）的发育率和囊胚质量，同时还比较了PZM-3和NCSU-23两种培养基培养对PAEs以及NTEs发育的影响。【方法】利用体细胞核移植技术、体外受精技术和孤雌激活技术分别生产猪的NTEs、IVFEs和PAEs，开展体外培养。【结果】（1）IVFEs、 PAEs 和NTEs的卵裂率分别为72.0％，66.0％和63.5％，各组间没有显著差异(P>0.05)；囊胚形成率分别为11.0％，22.6％和16.9％，也不存在明显不同(P>0.05)；然而，在囊胚质量，即ICM细胞数/总细胞数的比例上， IVFEs和NTEs均优于PAEs（0.448％，0.356％ vs 0.122％，P<0.05）。（2）对PAEs来讲，以PZM-3为基础培养基时囊胚率明显高于以NCSU-23为基础培养基时的处理组（35.4％ vs. 22.6％，P<0.05）；而对NTEs而言， 两种培养基在支持胚胎形成囊胚方面的效果相当（26.6％ vs. 21.1％，P>0.05），虽然PZM-3培养时胚胎卵裂率显著低于NCSU-23培养组（47.5％ vs. 63.5％，P<0.05）。【结论】（1）PAEs的囊胚质量在3种来源的胚胎中最差；（2）对PAEs理想的培养基，当用于NTEs培养时却不一定是最佳的选择。     

《动物细胞生物学》课程教学改革探索

以《动物细胞生物学》课程教学改革为主要研究对象,重点分析目前高校在细胞生物学教学过程中存在的各种弊端,并提出了相应的解决方案,以期得到更好的教学效果。     

提高绵羊繁殖率的技术措施

肉羊生产能否成为现代畜牧业的一部分，其根本原因在于绵羊的生物学特性：即繁殖率和生产性能低，且季节性发情明显，不能全年配种繁殖；严重限制了绵羊的生产力和利润空间，极大地影响了广大农牧民的养羊积极性。提高繁殖率是发展养羊生产、提高经济效益的关键，本文总结多年来养羊生产实践中的经验，从管理措施、饲养技术和繁殖育种等方面提出提高肉羊繁殖率的技术措施。