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本研究利用基于CRISPR/Cas9n系统的基因编辑技术结合体细胞核移植技术,构建了在同一载体中同时表达2条sg RNA和Cas9切刻酶以及绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的质粒,瞬时转染猪的成纤维细胞。通过流式细胞仪分选获得表达GFP的细胞,继续培养GFP阳性细胞至单个细胞长成细胞克隆点,经聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和DNA测序鉴定获得了对CD163基因进行编辑的细胞克隆点,阳性率高达90%(18/20)。以CD163基因编辑的细胞为供体细胞进行体细胞克隆和胚胎移植,获得了2头正常存活的CD163基因编辑猪。 相似文献
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为了阐明Ghrelin对大鼠下丘脑与垂体的调控规律,拟采用PV-9000两步法免疫组化和原位杂交方法分别确定Ghrelin及其mRNA在大鼠下丘脑和垂体组织中的定位.结果表明Ghrelin及其mRNA主要分布在下丘腩的弓状核、腹内侧核、正中隆起、室旁核等处的核团,各部分核团细胞着色程度深浅不一,腺垂体细胞中也有大量阳性细胞分布,但神经垂体则无阳性细胞分布.结果提示,Ghrelin及其mRNA在大鼠下丘脑、垂体中均有分布,揭示Ghrelin可能对大鼠促性腺激素释放激素和促性腺激素分泌有一定的调控作用. 相似文献
57.
为了探讨瘦素(Leptin)对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活后胚胎早期发育的影响,研究选择在Earle's盐缓冲的TCM199中添加10IU/mLeCG,10IU/mLhCG,10ng/mLEGF配制成化学限定的基础液,以添加不同浓度Leptin设定各试验组,对猪卵母细胞进行体外成熟培养。以未添加Leptin的基础液为对照组1,而添加5%的胎牛血清(FBS)、10%猪卵泡液为对照组2。比较分析各组卵母细胞核成熟效率,孤雌激活后胚胎的卵裂率,囊胚发育率。结果表明:各添加组卵母细胞成熟率与对照组之间无显著差异(P>0.05);孤雌激活后,各组间的卵裂率和囊胚发育率也无明显差异。同时,在化学限定的猪卵母细胞体外成熟液中添加Leptin对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活后早期胚胎的发育无显著效果。 相似文献
58.
人的胚胎干细胞(ES)在药物筛选、疾病诊治与机理研究等方面的应用前景诱人。但由于材料来源、伦理压力及操作技术等因素的限制,发展较为缓慢。最近,人们通过4个外源基因转染,发现可以直接诱导体细胞为多能性干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)。该方法不仅避免了以往获取ES所涉及的伦理争论,且操作简单、材料来源丰富,有望根据病人需要获取其特异性的治疗材料,实现免疫配型,解决免疫排斥问题。因此,iPS的理论和实践意义非常重要。本文综述了iPS的研究现状、iPS的应用实例与前景及iPS存在的问题等。 相似文献
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研究了用不同方法处理的核供体细胞(休眠期和非休眠期的体细胞、4℃冷藏1~5 d或12~14 d的体细胞)、融合液中加入细胞松弛素B(cytochalasin B,CB)以及卵供体兔龄等因素对牛-兔种间重构卵融合率的影响.结果发现,以休眠期或非休眠期的体细胞作核供体,其融合率和在融合过程中的死卵率均无显著差异(P>0.05);将核供体细胞(休眠期或非休眠期的体细胞)在4℃冷藏1~5 d或12~14 d,与新鲜的核供体细胞相比,对重构卵的融合率和在融合过程中的死卵率无显著影响(P>0.05);在融合液中加入CB后对融合率无明显影响(P>0.05),但在融合过程中死卵率显著升高(P<0.05);用青年兔(3~5月龄)的卵母细胞作受体与用经产兔(10~12月龄)的相比,其融合率无显著差异(P>0.05),但在融合过程中,用青年兔卵母细胞作受体的重组卵的死卵率极显著低于用经产兔卵作受体的重组卵(P<0.01). 相似文献
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牛-兔种间重组胚体外发育能力的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
以超排的青年母兔和经产母兔卵母细胞为受体细胞,以处于休眠期和非休眠期的黑毛和牛耳成纤维细胞为核供体,共获得180枚种间重组胚,采用M199+10%FBS和RD+10%FBS2种培养液进行体外培养,有112枚发育到2-细胞期(62.2%),26枚发育到桑椹胚期(14.4%),20枚发育到囊胚期(11.1%)。结果显示,供体细胞处于休眠期与否,对重组胚的卵裂率无显著影响(P<0.05),但以休眠期细胞为核供体的重组胚8-细胞~16-细胞胚的发育率及桑椹胚发育率显著高于非休眠期细胞的重组胚(P<0.05),二者在 相似文献