携带新城疫病毒F基因DNA疫苗的减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建及其免疫原性

根据GenBank中发表的新城疫病毒(NDV)融合蛋白(F)基因序列,设计1对引物,通过RT-PCR扩增出鹅源NDV分离株JS5F基因(约1700bp),测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1,获得重组真核表达质粒pVAX1-F。pVAX1-F经脂质体转染COS-7细胞,间接免疫荧光试验检测出F基因在COS-7细胞中的表达产物。将pVAX1-F转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL7207,构建成功携带DNA疫苗的重组沙门氏菌SL7207(pVAX1-F)。重组菌以109CFU/只的剂量2次免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对NDVF蛋白的血清抗体和小肠粘膜抗体应答,SL7207(pVAX1-F)免疫组抗体水平显著高于SL7207(pVAX1)组(P<0.05)。将SL7207(pVAX1-F)以109CFU/只剂量口服免疫1日龄雏鸡,免疫保护试验结果显示,SL7207(pVAX1-F)免疫组对鸡具有良好的保护率(77.27%),与空白对照组和SL7207(pVAX1)空载体组之间存在显著性差异(P<0.05)。结果表明,该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能成功释放所携带的质粒,并能刺激机体产生免疫应答,可对NDV强毒攻击提供良好的免疫保护作用,提示该疫苗候选株对新城疫的控制有重要应用前景。     

头孢喹肟与马立克病疫苗联用的试验观察

为了解头孢喹肟对马立克病疫苗的影响,以及头孢喹肟对鸡白痢的预防效果。将不同浓度的头孢喹肟与马立克病疫苗混合后置于25℃,不同时间点取样,采用病毒蚀班计数法进行疫苗效价测定。设头孢喹肟高、中、低3个剂量组,1日龄雏鸡注射混合液2 h后,人工诱发鸡白痢,记录10 d内每组的发病和死亡情况。在与马立克疫苗联合使用时,头孢喹肟的终浓度不超过0.5 mg/m L,混合液在室温放置时间不超过45 min,对疫苗效价无显著影响;头孢喹肟预防鸡白痢试验中,高剂量组和中剂量组的发病率和死亡率均不同程度低于低剂量组,且差异极显著(P0.01);高剂量组与中剂量组之间发病率和死亡率不存在统计学差异。这证明头孢喹肟与马立克病疫苗联合使用是可行的。     

猪流行性腹泻病毒3种结构蛋白的原核表达与免疫原性分析

根据大肠埃希菌密码子使用的偏嗜性,对G2b亚型猪流行性腹泻病毒(PEDV)JSX2014株S基因(94~525、1 306~1 641nt 2个区域)、M基因(544~669nt)和N基因(397~960nt)进行优化和基因合成,分别克隆入pET-32a(+)中,获得4种重组原核表达载体pET-Opti-S-D1、pET-Opti-S-D2、pET-Opti-M和pET-Opti-N。将重组表达载体转化至大肠埃希菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,SDS-PAGE和Western-blot鉴定,4种重组蛋白均可获得正确表达。以表达蛋白为抗原制备的兔多抗血清,通过间接免疫荧光试验鉴定,均能与JSX2014株感染的Vero细胞发生特异性反应。进一步通过中和试验鉴定,S-D1蛋白特异性多抗血清可有效阻断JSX2014株对Vero细胞的感染。这一结果提示所表达的目的蛋白均具有良好的免疫原性,可以进一步用于G2b亚型PEDV抗体检测方法的建立。     

鸡传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与初步应用

建立了一种检测鸡传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)抗体终点滴度(end-point titer, ET)的间接ELISA方法，以应用于监测鸡免疫疫苗或者感染野毒后的抗体。以大肠杆菌表达的IBV核衣壳(N)蛋白作为包被抗原，以SPF鸡血清和感染IBV的SPF鸡血清分别作为阴性血清和阳性血清对照，优化确定出ELISA的各项技术参数。对66份SPF鸡血清进行测试，确定了阴、阳性S/P临界值为0.385。特异性试验表明包被抗原与其他常见病原的阳性血清均不发生交叉反应，批内和批间重复性试验的变异系数均小于10.00%。选取了50份临床血清样品，通过阳性-阴性阈值(positive negative threshold, PNT)基线确定ET值，建立了固定血清稀释倍数(1∶500)处S/P值与ET的线性回归方程，相关系数(R²)为0.959 3(P<0.000 1)。通过检测2个商品鸡群在1～49日龄不同时间点采集的461份血清样本，比较了建立的IBVN-ELISA方法与IDEXX公司提供的商品化试剂盒。本研究建立的I...     

兽医传染病学理论与实验教学结合初探

兽医传染病学作为动物医学相关专业一门重要的专业必修课程,主要目标是培养学生识别和解决实际生产中动物传染性疾病相关问题的能力.该课程由理论与实验教学2个部分组成,其目的是将兽医传染病学基本理论与生产实践有机结合起来,使学生全面了解并能更好解决生产中所遇到的相关问题.该文基于新时代应用型本科人才培养目标,结合新形势传染病学教学需求及课程实验教学面临的问题,充分平衡各种限制性条件,提出将理论与实验教学更好地相结合,以提高学生对传染病认识水平,提升教学效果.     

Box-Behnken响应面法优化红芪多糖水提醇沉工艺研究

优化红芪多糖标准提取物的水提醇沉制备工艺参数。采用L₉(3~4)正交试验优选红芪总糖水提工艺，采用Box-Behnken中心组合响应面法优化红芪多糖醇沉工艺，以“化学-生物活性”综合指标进行评价。结果表明，优化得到的红芪多糖水提醇沉制备工艺为：原料药材加水10倍量(首次12倍量),煎煮3次，每次1 h,合并药液，浓缩至与原料药材1∶1,进行醇沉，醇沉浓度77%,醇沉时间10 h,醇沉次数3次。按上述醇沉工艺所得提取物中多糖质量分数为60.52%,相比原药材水提取物中多糖质量分数的23.2%,纯度提高了1.61倍，且工艺稳定；所得提取物具有较好的抗氧化活性及DPPH自由基清除活性。说明该工艺可用于红芪多糖标准提取物的制备及开发利用。     

甘松不同提取物GC-MS分析及体外抗氧化活性研究

采用气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)对甘松的水蒸气蒸馏提取物、水提取物、石油醚提取物、95%乙醇提取物、乙醇提取物石油醚萃取相、乙醇提取物氯仿萃取相、乙醇提取物乙酸乙酯萃取相、乙醇提取物正丁醇萃取相、乙醇提取物剩余萃取相中所含挥发性物质进行对比分析，并考察其对DPPH·、ABTS·⁺、超氧阴离子自由基的清除活性和对Fe³⁺的还原能力(FRAP值)。结果表明，甘松不同提取物中共鉴别出109种化学成分；乙醇提取物正丁醇萃取相对ABTS·⁺自由基的清除活性最强，乙醇提取物乙酸乙酯萃取相对DPPH·、超氧阴离子自由基的清除活性和对Fe³⁺的还原能力最强。本研究可为甘松挥发性成分的临床应用提供依据。     

检测鸡毒支原体抗体的间接ELISA方法和HI试验方法的建立及初步应用

本研究旨在建立一种检测鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)抗体的间接ELISA方法，结合HI试验，为MG感染的监测和净化提供一套有效的组合技术方案。以原核表达的VlhA 3.03重组蛋白(rVlhA)作为包被抗原，使用单一稀释法构建了关于血清抗体滴度与1∶500血清稀释度处S/P值的回归方程lg(抗体滴度)=1.257×lg(1∶500处S/P值)+3.709,R²=0.917 6,S/P临界值为0.32,临界滴度是1 200。经验证，rVlhA-ELISA方法具有良好的特异性、重复性，最低能检出1∶2 000稀释的阳性血清。选择国内MG分离株SH/2020-1作为血凝抑制抗原建立HI试验方法。使用rVlhA-ELISA方法联合HI试验进行血清样品检测，IDEXX-MG方法作为对照，借助RT-qPCR方法监测MG感染情况。结果表明rVlhA-ELISA方法和IDEXX-MG监测的血清抗体趋势与HI复核结果均一致；rVlhA-ELISA与HI联合判定结果与IDEXX-MG符合率可达91.53%。上述结果显示，本研究建立的rVlhA-E...