鸭瘟病毒dUTPase基因克隆、原核表达及在病毒感染宿主亚细胞中的定位分析

根据笔者实验室新发现的鸭瘟病毒（DPV）dUTPase基因（GenBank登录号DQ486149）序列设计1对引物,PCR扩增后将产物亚克隆至pET32a（＋）原核表达载体,获得表达质粒pET32a-DU。然后将其转化至E．coliBL21（DE3）进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测显示诱导表达蛋白约66．8ku,与预期表达蛋白大小一致。薄层扫描分析表明重组蛋白占菌体总蛋白的36．2％,主要以包涵体的形式存在。重组蛋白纯化后制备兔抗血清,间接EUSA效价为1：409600。通过免疫荧光技术进行DPVdUTPase亚细胞定位检测,结果显示最早可在感染后4h的胞质中检测到特异性荧光,12h大量点状绿色荧光聚集于胞核;24h后胞核内点状荧光减弱,而胞质点状荧光增强;48h胞核和胞质荧光均显著减弱。本研究为DPVdUTPase基因功能和DPV致病机理的研究提供了重要数据。     

利用CRISPR/Cas9系统构建的转基因家蚕对核型多角体病毒的抑制

CRISPR/Cas9介导的基因编辑已经被证明可以通过破坏病原体的基因来有效地抑制感染。西南大学的DONG Z等学者最近构建了表达CRISPR/Cas9的家蚕转基因系和以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)为目标的sgRNA,以调节家蚕早期基因的表达。通过G,代杂交获得4个转基因杂交系:Cas9(-)/sgRNA(-),Cas9(C)/sgRNA(-),Cas9(-)/sgRNA(C)和Cas9(C)/sgRNA(C)。研究证明了Cas9(C)/sgRNA(C)转基因系有效地编辑了家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因组的目标位点,并在BmNPV感染后观察到大片段缺失。研究者进一步对Cas9(C)/sgRNA(C)转基因系的抗病毒分析表明,半致死剂量(LD_(50))比正常接种包涵体后的值高出1 000倍。作者分析了Cas9(C)/sgRNA(C)转基因杂交系的经济性状和脱靶效率,与正常水平无显著差异。作者的研究表明CRISPR/Cas9介导的基因编辑可以更有效地靶向家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因组,并可作为一种昆虫抗病毒的方法。     

家蚕组蛋白甲基转移酶BmAsh2对蚕蛹的性别决定至关重要

性别决定是一个分级管理的过程,包括昆虫在内的不同生物具有高度的多样性。在鳞翅目昆虫家蚕中,由W染色体衍生的FempiRNA被鉴定为主要的性别决定因子,它揭示了一个独特的piRNA介导的性别决定途径。然而,家蚕性别决定的综合机制目前尚不清楚。中国科学院昆虫发展与进化生物学研究中心的LI Z等研究发现蚕蛹蛋白BmSiwi是决定家蚕性别的关键,而不是BmAgo3。CRISPR/Cas9介导的BmSiwi的敲除导致发育中性别阻滞和部分雌性性别逆转,而BmAgo3耗竭只影响卵子发生。研究者鉴定了3种组蛋白甲基转移酶(HMTs),它们在BmSiwi突变蛾中显著下调。其中一种HMT是BmAsh2,引起了piRNAs和转座因子(TEs)的失调,支持了它在piRNA信号通路中的作用。更重要的是,研究发现BmAsh2突变导致了性别发育阻滞和部分雌性对雄性的性别逆转,以及性别决定基因Bmdsx和BmMasc的失调。其他两种HMT是BmSETD2和BmEggless,它们的突变并不影响piRNA介导的性别决定。组织学分析和免疫沉淀结果支持BmAsh2和BmSiwi蛋白之间的功能相互作用。试验数据首次提供了证据,证明组蛋白甲基转移酶(HMT)BmAsh2在piRNA介导的蚕蛹性别决定中起关键作用。     

江苏省猪伪狂犬病病毒强毒株的部分基因进化分析与致病性研究

为研究目前引起江苏省免疫猪场暴发的伪狂犬病病原的毒力变化,本研究通过细胞分离从江苏某猪场发病猪病料样品中获得一株病毒株,将其命名为PRV NJ02,该病毒株的gC和gD基因推导的氨基酸序列与之前报道的病毒株相比分别有7个与2个氨基酸的插入,且g C和g D基因进化树结果显示,该分离株位于相对独立的分支,与传流病毒株PRV LA亲缘关系较远,而与亚洲分离株亲缘关系较近。将PRV NJ02与PRV LA病毒株分别以相同剂量感染100日龄健康猪,结果显示,PRV NJ02分离株滴鼻感染组猪出现明显临床症状,且于感染后6d内全部死亡,其组织病理变化明显,而PRV LA株感染组猪仅表现轻微体温变化和呼吸道症状,其组织病理变化轻微,表明PRV NJ02分离株具有较强的致病性。感染猪各脏器组织中PRV病毒载量结果显示,NJ02株感染猪脑、肺脏和肝脏组织中的病毒含量均高于LA株感染猪的相应组织。以上结果表明,分离株PRV NJ02较传统病毒株PRV LA来说,致病性增强,毒力明显增加。该研究可为江苏省PRV流行株病原学研究提供参考,提示须重视PRV的变异监测。     

病毒性出血性败血症的传入风险分析

迄今为止我国还未有病毒性出血性败血症(VHS)暴发的报道。VHS一旦随进口贸易传入,将给我国的水产养殖造成很大的经济损失。为评估病毒性出血性败血症病毒(VHSV)传入的风险,对导致病毒传入的可能因素进行了风险分析,并提出了相应的风险管理措施。风险分析结果显示:活的敏感动物(包括亲鱼、鱼卵和鱼苗)、冰冻和冰鲜的敏感鱼类和用做鲜活饵料的鱼类(野杂鱼)传入VHSV的风险较高,应禁止从疫区进口;敏感鱼类的鱼肉(除掉头和内脏的部分)、敏感鱼加工后的产品、其它非敏感鱼类传入VHSV的风险较低,可以自由贸易;通过运输活鱼的水、包装、运输工具和用具传入VHSV的风险不明,需要对其强制进行常规消毒。     

小麦防冻“十字诀“

选好品种注意使用适合当地的抗寒小麦品种,如鲁麦21、22号,豫麦34、50号、晋麦51、53号等。播种深度掌握在3-5 cm之间。适量追肥对于播种前施肥不足的麦田,越冬之前追肥,能巩固小麦的有效分蘖,增强植株自身的抗寒能力。追肥时氮、磷、钾要混追,比例要适当。尤其是磷肥,对促进小麦根系下扎,调节植株体内所需要的养分和水分,增强小麦抗寒能力效果显著。