细胞表面糖链类型鉴定及其与副粘病毒结合的特异性

通过糖链检测试剂盒对Vero细胞进行细胞凝集素组织化学染色鉴定,结果显示,Vero细胞与凝集素MAA和SNA呈强阳性反应,而与凝集素GNA和PNA呈阴性反应,表明Vero细胞表面具有唾液酸α2-3连接的半乳糖和唾液酸α2-6连接的半乳糖。Vero细胞神经节苷脂提取及纯化结果显示,GD1a是主要神经节苷脂组分,同时还存在GM1、GM2和GM3。为进一步确定神经节苷脂在病毒入侵中的作用和意义,使用神经节苷脂标准品及Vero细胞神经节苷脂提取物对新城疫病毒和鹅副粘病毒分别进行红细胞吸附抑制试验,结果表明,2种病毒与不同类型神经节苷脂结合特异性上存在差异。     

番鸭破骨细胞骨髓诱导培养体系的建立

无菌分离、冲洗7日龄内番鸭长骨骨髓,收集、培养破骨细胞（Osteoclasts,OC）。培养过程中对照组不添加钙、磷因子,试验组加入不同浓度比例的钙磷双因子（Ca∶P分别为2∶1、1∶1、1∶2）,进行破骨细胞骨髓诱导培养。倒置显微镜观察细胞形态,于培养1、3d进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色（TRAP）计数,培养7d后扫描电镜观察象牙片吸收陷窝。结果显示,培养3d时试验组TRAP阳性细胞均多于对照组,差异极显著（P〈0.01）;试验2∶1组与1∶1组差异不显著（P〉0.05）,其余各组间均差异极显著（P〈0.01）;扫描电镜观察,象牙片吸收陷窝程度与钙磷比例大小（2∶1、1∶1、1∶2）成反比。当钙磷比例为1∶2时,破骨细胞数量最多,功能活跃。结果表明,鸭破骨细胞骨髓诱导培养体系已成功建立。     

调节胚胎代谢对蛋鸡激素、抗氧化及产蛋性能的影响

应用VE、VC及普鲁卡因作为胚胎调节剂对蛋鸡胚胎生长发育进行调控。225枚种蛋随机分为3组,即对照组,不采取任何处理;试验1组,采用（78%VE14μL＋25%VC20μL）/枚;试验2组,采用（78%VE14μL＋25%VC20μL＋2%普鲁卡因56μL）/枚;于入孵前,距离种蛋钝端1/4近气室处,经酒精消毒,将调节剂液注射到种蛋胚盘附近,探讨其对蛋鸡内分泌水平、抗氧化性能、免疫性能及生产性能的影响。结果表明：与对照组相比,15周龄蛋鸡激素水平,1组卵泡刺激素（FSH）、促黄体生成素（LH）水平均极显著提高（P〈0.01）;2组甲状腺素（T4）水平显著提高（P〈0.01）。39周龄时,1、2组T4水平显著升高（P〈0.05或P〈0.01）,2组孕酮（P）、胰高血糖素水平显著提高（P〈0.05）;抗氧化性能,试验组血清和肝脏中丙二醛（MDA）含量均不同程度地降低,其中2组血清MDA显著降低（P〈0.05）,其余指标差异不显著;脂类代谢方面,试验2组蛋黄胆固醇降低16.58%（P〈0.05）,1组蛋黄粗脂肪降低13.51%（P〈0.05）。对新城疫（ND）疫苗免疫的影响,试验组在注射ND疫苗后7、14、28 d抗体效价不同程度地提高,其中1组在14、28 d时抗体效价差异极显著（P〈0.01）。此外,0 d,1组的抗体效价比2组提高58.35%,差异显著（P〈0.05）;28 d,1组的抗体效价比试验2组提高29.03%（P〈0.01）;其他时间点2个试验组间差异不显著。在22~39周龄,试验1、2组平均蛋重和总产蛋量都不同程度地提高,1组尤为显著（P〈0.01或P〈0.05）,而试验组料蛋比均显著性降低（P〈0.05）。因此,通过调节胚胎代谢能明显改善出壳后蛋鸡的内分泌水平及抗氧化性能,提高产蛋性能。     

猪圆环病毒2型ORF2和ORF1-2串联基因重组腺病毒对小鼠的免疫效果

为了研究含有猪圆环病毒2型(porcine circovirus type2,PCV2)基因的重组腺病毒作为基因工程疫苗的潜在应用价值,利用本实验室构建的PCV2的ORF2和ORF1-2串联基因的重组腺病毒对小鼠进行了免疫并对其免疫效果进行了研究。分别用表达ORF2和OFR1-2基因的重组腺病毒Ad-ORF2、Ad-ORF1-2经肌肉途径免疫Balb/c小鼠,对免疫后小鼠的血清抗体和脾淋巴细胞中各细胞亚群的比例及其增殖反应、自然杀伤活性和特异性杀伤活性进行了检测和比较。结果表明,用表达ORF2基因和ORF1-2串联基因的重组腺病毒Ad-ORF2、Ad-ORF1-2经肌肉途径免疫Balb/c小鼠后,随着免疫次数的增加,小鼠产生的针对PCV2ORF2基因的特异性抗体水平不断升高,第3次免疫后2周达到最高,但第3次免疫后4周有所下降;免疫重组腺病毒的试验组小鼠的脾淋巴细胞增殖活性、CTL杀伤活性和NK细胞杀伤活性与免疫空载体的对照组和免疫PBS的对照组比较均有显著的差异(P<0.05)。本研究为PCV-2基因工程疫苗的深入研究及应用奠定了基础。     

鲤鱼白细胞介素-8全长cDNA的克隆、鉴定及其差异表达分析

用DD-RTPCR的方法获得差异显示片段A26,经地高辛标记作为探针对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库核酸杂交筛选,从0.8×104个重组噬菌体中,经过2轮筛选获得阳性克隆。序列分析表明该克隆含有1个大小为294bp编码98个氨基酸的完整开放阅读框,氨基酸序列含有Chemokine-CXC功能结构域,前体中含有22个氨基酸组成的引导肽,氨基酸序列比对显示成熟白细胞介素-8(IL-8)多肽中第12、13和14构成CXC基序,但之前无ELR基序。系统发生分析其与荷兰鲤鱼亲缘关系最近,氨基酸序列的同源性达89%。分离培养鲤鱼外周血白细胞,在不同条件下经LPS、PHA和ConA刺激后,提取总RNA,根据鲤鱼IL-8全长cDNA序列和β-ac-tin序列设计引物,利用半定量反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法对鲤鱼外周血白细胞IL-8进行差异表达分析,结果显示,经有丝分裂原刺激后前期(4h)白细胞中IL-8的表达量明显增大,但随着时间推移(12、24h)并不一直比同期正常白细胞表达量大,表达量趋势成峰形图。     

猪H-FABP基因遗传多态性及与肌内脂肪含量的相关分析

采用PCR-RFLP的方法分析了松辽黑猪、军牧1号白猪、PIC猪、长白猪、大白猪、杜洛克猪和松野杂交猪共计127头猪H-FABP基因的遗传多态性。结果表明：（1）在5′-上游区的HinfⅠ多态位点上,所有试验猪种中均发现了多态性,在第二内含子的HaeⅢ多态位点上,所有被测猪种也都存在变异,在第二内含子的MspI多态位点上,松辽黑猪、长白猪和松野杂交猪仅表现为AA型,其他猪种均表现出多态性;（2）7个猪群的基因频率和基因型频率都达到了Hardy-Weinberg平衡状态（P〉0.05）;（3）松辽黑猪遗传变异对肌内脂肪含量的影响：HH基因型极显著高于Hh基因型（P〈0.01）,而Hh基因型又极显著高于hh基因型（P〈0.01）,最小二乘均值为：2.760〉2.598〉2.335,dd和Dd基因型分别极显著高于DD基因型（P〈0.01）,最小二乘均值为：2.763〉2.732〉2.347,结果提示：可通过提高“HH-dd”基因型的频率来增加松辽黑猪肌内脂肪含量,从而改善松辽黑猪的肉质。     

KAP6.1基因在两个山羊品种间的表达差异

KAP6.1基因是编码羊绒的结构蛋白基因之一,以辽宁绒山羊和岢岚本地山羊作为研究对象,利用FQRT-PCR技术对KAP6.1基因在2个品种皮肤中的表达差异进行了研究。结果显示：KAP6.1基因在两个山羊品种皮肤中均有表达。辽宁绒山羊的表达量是岢岚当地山羊表达量的1.3倍。品种内部,公山羊的表达量都高于母山羊,其中,辽宁绒山羊公羊的表达量是母羊的2.5倍,岢岚当地山羊公羊的表达量是母羊的1.8倍。     

一株鸡新城疫病毒的分离鉴定及其油乳剂灭活苗免疫效果评价

从河南某种鸡场发病鸡群中分离出1株毒株,经HA、HI和动物回归试验,确定分离的病毒为NDV,命名为HNYD株。经过测定,HNYD株鸡胚半数致死量（ELD50）为10^90/0．1mL;鸡胚最小致死量的平均致死时间（MDT）为53．8h;对1日龄SPF雏鸡脑内致病指数（ICPI）为1．86,提示HNYD株为强毒力株。血清交叉反应试验显示HNYD株和La Sota株存在一定的抗原性差异。用HNYD株油乳剂灭活苗对HNYD株和La Sota株的保护率分别为90％和100％,明显优于La Sota株油乳剂灭活苗,提示HNYD株制备的疫苗对流行毒株和经典毒株的攻击均能很好的保护。     

鹅卵泡选择过程中差异表达基因的初步探索

采用银染mRNA差异显示技术筛选并克隆鹅卵泡选择过程中差异表达的基因片段,测序后在Genbank中进行Blast检索分析其同源性.共获得5个差异片段(EST,表达序列标签),经Blast同源性分析发现1个与人甲硫氨酸腺苷基转移酶Ⅱβ亚基(MAT Ⅱβ)同源,同源性为95%,另一个与鸡mKIAA0840基因同源,同源性为94%,其余3个与已知基因或序列无任何同源性,可能是尚未发现的新基因.本研究结果显示鹅卵泡选择过程中的基因表达存在差异,筛选出的5个EST的全序列和功能有待于进一步深入研究.     

藏羚羊被毛纤维氨基酸含量分析

对藏羚羊被毛纤维氨基酸含量进行了测定,结果表明:藏羚羊粗毛中谷氨酸含量比绒毛高约3%,但组氨酸和胱氨酸含量仅为绒毛的66%和15.48%.藏羚羊被毛角蛋白氨基酸的组成与山羊、绵羊被毛纤维相同;但在各种氨基酸的含量比例上有一定的差异:藏羚羊绒毛的组氨酸含量为5.88%,比山羊绒和绵羊毛高约4%;胱氨酸含量为10.60%,高于其他所测山羊的绒和毛;碱性氨基酸与酸性氨基酸含量接近(14.87%,15.23%);藏羚羊绒毛促螺旋蛋白(Paa)含量低于降螺旋蛋白(Daa).