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本研究旨在利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus,FIPV)N蛋白,并制备抗该蛋白的多克隆抗体,用于FIPV临床抗原/抗体诊断及N蛋白功能研究。参考GenBank中FIPV的N基因序列,选择FIPV毒株N基因(登录号:KC461235.1),并对该N基因进行密码子优化、基因合成,酶切后将N基因连接至pFastBac1载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,经氨苄西林抗性筛选阳性克隆,提取质粒经酶切及测序鉴定正确后,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选及PCR鉴定后,最终成功构建重组杆状病毒质粒Bacmid-N,转染Sf9细胞包装杆状病毒,于28 ℃温箱培养4 d后收集感染Sf9细胞上清,并通过镍离子亲和层析纯化获得重组N蛋白。经SDS-PAGE及Western blotting鉴定结果表明,本研究成功利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达出大小约为51 ku的FIPV重组N蛋白。将该蛋白与弗氏佐剂按一定比例混合后,免疫6周龄BALB/c小鼠。用间接ELISA方法检测小鼠血清抗体效价可达1:102 400;利用Western blotting和间接免疫荧光试验对N蛋白多克隆抗体进行检测分析,结果表明,真核表达的重组蛋白免疫原性良好,多克隆抗体具有良好的反应原性,可特异识别FIPV感染细胞。本研究为FIPV抗原/抗体诊断试剂盒的研发奠定了基础。 相似文献
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介绍了链置换扩增技术、转录介导扩增技术、核酸序列依赖性扩增技术、环介导等温扩增技术、赖解旋酶恒温基因扩增技术、滚环扩增等六种恒温扩增核酸的技术的特点及其研究应用概况,并对恒温扩增技术的前景予以展望,以期为这些技术的应用提供参考。 相似文献
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非洲猪瘟病毒(ASFV)、伪狂犬病毒(PRV)、猪圆环病毒2型(PCV2)是危害养猪业的3种重要病毒,但目前国内外尚无可同时检测这3种病原的方法。为建立一种可同时检测上述3种病原的方法,本研究以ASFV的B646L基因、PRV的g E基因及PCV2的rep基因为靶基因,采用Prime 3 web软件分别设计特异性引物和探针。采用相应引物分别构建上述3种靶基因的重组质粒,经测序鉴定后分别作为质粒标准品,并均稀释到1×105拷贝/μL后按照体积比1∶1∶1混匀后作为模板,采用方阵法对引物、探针、酶和各反应条件等的优化,初步建立ASFV、PRV和PCV2多重荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法标准曲线Ct值与相应质粒标准品浓度均存在良好的线性关系,相关系数(R2)均大于0.99。利用该方法同时检测猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、口蹄疫病毒(FMDV)、猪细小病毒(PPV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)等病原,结果显示,本实验建立的该方法仅特异性扩增ASFV、PRV和PCV2,与其他病原均无交叉反应,特异性强;分别利用该方法与已公布... 相似文献
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尼帕病毒(Nipah virus, NiV)是一种人畜共患的高致病性病毒,人感染NiV后,死亡率接近40%;猪作为中间宿主,感染NiV后具有高发病率和高死亡率特点。近年来,NiV疫情在我国相邻的多个东南亚国家频繁出现,预示该病传入我国风险日益增高。本研究阐述了近年来NiV在血清学诊断和分子学诊断技术方面的研究进展,包括临床常用的传统技术,以及重组蛋白ELISA、Luminex、二代测序等新兴诊断方法,为临床样本中NiV的鉴定和监测方法更新换代提供参考,对监测NiV从国外的传入情况、防控猪群NiV疫情发生以及守护公共卫生安全具有重大意义。 相似文献
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mRNA技术是一种将人工合成的mRNA分子引入细胞内,并利用细胞自身的翻译机制将其翻译成蛋白质的技术。作为一种新兴的生物技术,mRNA技术已经在疫苗研究、基因治疗等多个领域取得了重要进展,并在新冠预防和传染病防治方面进行了临床应用,展现出了广阔的应用前景。通过对mRNA技术的发展历程,mRNA疫苗的设计、递送及特点,以及其在动物疫病研究的进展予以综述,分析其存在的问题,展望今后的发展方向,为相关研究提供参考。 相似文献
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<正>口蹄疫(Foot and mouth disease, FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)引起的一种急性、热性、高度接触传染性动物疫病[1],感染猪、牛、羊等主要畜种,可造成巨大的经济损失,引发严重的负面社会影响。世界动物卫生组织(World Organization for Animal Health, OIE)将其列为法定报告的动物传染病,我国政府将其排在一类动物传染病首位, 相似文献
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猪瘟是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一种严重的猪的传染病,其有效控制主要依赖于猪瘟兔化弱毒疫苗株的应用,但该毒株致弱的机制尚未完全阐明。对近年猪瘟病毒结构蛋白、非结构蛋白和非编码区对毒力影响的国内外研究成果进行了综述,以期为猪瘟病毒致弱相关机制的研究以及新型疫苗的研发提供参考。 相似文献