海岛棉GBNBS基因的原核表达以及表达产物的活性分析

 分别构建含有GBNBS基因全长序列以及去除富含亮氨酸重复区(Leucine-rich repeat, LRR)的部分序列的原核表达载体P3161和NBCD,SDS-PAGE凝胶电泳检测发现在IPTG诱导下,重组载体P3161和NBCD在BL21菌株中可以分别表达90 kDa和60 kDa的目的蛋白,Western blot证明它们为目的基因表达产物。分离纯化这两种蛋白并分析酶活功能,发现GBNBS全长蛋白具有ATPase活性,而去除LRR的缺失蛋白的ATPase活性则大幅降低。GBNBS基因的原核表达以及表达产物的活性研究为进一步了解该基因抗性功能与抗性机制奠定基础。     

一个棉花类受体蛋白激酶基因的克隆与表达分析

 利用简并引物扩增、染色体步移以及RT-PCR的方法,分离了棉花的一个类受体蛋白激酶基因的全长序列。序列分析表明,该基因没有内含子,开放读码框的长度为2964 bp,编码的多肽序列含有988个氨基酸并与拟南芥控制花器官脱落的基因HAESA-like2具有60%左右的相似性,将该基因命名为GRLK5。半定量RT-PCR分析发现GRLK5在种子、茎皮、根和纤维中的表达量较高,并且受ABA的诱导表达。将GRLK5整合到植物表达载体pCAMBIA2301中,构建植物过量表达载体,通过农杆菌介导,采用叶盘法转化烟草,PCR检测证明目的基因已经整合到烟草基因组中。     

烟草转GroEL基因抗双生病毒的研究

双生病毒是全球性的重要植物病毒,为提高植物对此病毒的抗性,分离了烟粉虱体内GroEL基因,将其连接到棉花韧皮部特异启动子PGHNBS下游,构建到植物表达载体PBI121上,采用农杆菌介导法转化烟草,获得抗性苗.对抗性植株进行PCR、RT-PCR和病毒侵染检测,结果表明:GroEL基因已经整合到烟草基因组中,并且在转录水平上表达.病毒侵染检测结果显示转基因烟草植株中没有检测到病毒,证明韧皮部特异表达GroEL基因抗双生病毒是可行的.     

夏蜡梅腋芽微繁殖及叶片不定芽再生

夏蜡梅(Sinocalycanthus chinensis)是中国特有的一种落叶观赏花木,为国家二级保护珍稀濒危植物.以夏蜡梅当年生枝条的茎段为供试材料,进行腋芽微繁殖和叶片不定芽再生的研究.结果表明:茎段在附加2.00mg/L ZT和0.05 ms/L IBA的WPM培养基上快繁,萌发迅速、芽体粗壮、叶色淡绿,月繁殖系数超过10.0,可以连续继代10次以上;以无菌苗的叶片为外植体在附加2.0 me/L TDZ、0.1 me/L IBA和1.0 me/L KT的WPM培养基上,不定芽再生频率达40%.在3/5MS大量元素+WPM微量元素+WPM有机成分+0.20 mg/L IBA+0.05%活性炭的生根培养基上,试管苗的根系和地上部发育良好,盆钵移栽成活率达100%.该体系的建立为夏蜡梅工厂化育苗以及运用生物技术手段对夏蜡梅进行改良奠定了基础. ms/L IBA的WPM培养基上快繁,萌发迅速、芽体粗壮、叶色淡绿,月繁殖系数超过10.0,可以连续继代10次以上;以无菌苗的叶片为外植体在附加2.0 me/L TDZ、0.1 me/L IBA和1.0 me/L KT的WPM培养基上,不定芽再生频率达40%.在3/ MS大量元素+WPM微量元素+WPM有机成分+0.20 mg/L IBA+0.05%活性炭的生根培养基上,试管苗的根系和地上部发育良好,盆钵移栽成活率达100%.该体系的建立为     

陆地棉PHYB基因生物信息学分析

[目的]对陆地棉PHYB基因有一个全面的认识和生物信息学分析.[方法]在陆地棉异源四倍体标准系TM-1基因组数据库中共鉴定获得2个PHYB基因,这2个基因分别分布在A10和D10亚基因组.利用生物信息学方法对这两个基因进行初步分析.[结果]棉花的PHYB具有其他植物PHYB相同的基序和结构域,不管是数目还是分部位置都比较一致;不同植物的PHYB氨基酸序列同源性比对及构建的进化树都显示棉花的PHYB同可可的在同源性和进化关系上都是最高的,同水稻、玉米等单子叶植物的同源性及进化关系较低;基因结构的比对结果同样显示植物PHYB基因在进化上比较保守;棉花PHYB存在几十个可能磷酸化的位点,这些位点的磷酸化作用可能影响光敏色素的功能及其介导的信号通路.[结论]该研究结果为陆地棉PHYB基因的克隆和功能研究提供了理论基础.     

35杨微繁殖与叶片不定芽再生研究

以35杨茎段外植体为供试材料,对腋芽微繁殖、叶片不定芽再生、生根以及移植的离体培养技术体系进行了研究,结果表明：获得初始无菌苗的取材以4月取田间杨树新枝茎段外植体为最好;茎段外植体的启动培养基以附加NAA0．1mCL、0．5mg／L6-BA及GA,0．5mg／L的WPM培养基为优;腋芽微繁殖最快的培养基为WPM＋0．2mg／L6-BA＋0．1mg／LIAA＋0．1mg／LIBA;生根培养基以3／5WPM＋0．1mg／LIBA为好;叶片不定芽再生培养基以WPM＋0．2mg／L 6-BA＋0．1mg／LIAA＋0．1mg／LIBA再生频率最高,达92．86％;叶片不定芽在生根培养基上培养20d后获健壮生根苗,移栽成活率达100％。     

油菜素内酯对NaCl胁迫下棉花幼苗生理特性的影响

该试验采用水培方法,探讨外施油菜素内酯对NaCl胁迫下棉花幼苗叶片光合速率、根系活力、叶片和根系抗氧化酶活性等生理指标的影响.结果显示:NaCl胁迫下棉花幼苗叶片光合速率下降、MDA含量上升、抗氧化酶(SOD、POD、CAT)活性降低,外施油菜素内酯可提高NaCl胁迫下棉花叶片中抗氧化酶活性、降低MDA含量、增强叶片光合能力;NaCl胁迫下棉花根系活力降低、MDA含量上升、SOD和CAT活性升高,外施油菜素内酯对根系活力、MDA含量、内源保护酶活性则影响较小.表明,油菜素内酯通过提高叶片抗氧化酶活性,减轻叶片膜脂过氧化程度,提高叶片光合性能,从而有效缓解盐胁迫对棉花叶片的伤害.     

基于简化基因组的甜叶菊分子标记开发

本研究旨在筛选和开发具有多态性的甜叶菊基因组分子标记。选取4个甜叶菊品种为材料,利用简化基因组测序技术(RAD-seq)开发SSR和SNP标记。开发并验证了149对多态性丰富、重复性好、特异性高的简单重复序列(SSR)和4组功能性的SNP标记,开发的多态性基因组分子标记中包含了甜叶菊糖苷合成途径关键基因的新标记StKASPSNP-7。验证了基于KASP技术开发甜叶菊功能SNP标记的可行性,为甜叶菊遗传图谱构建、分子鉴定奠定了基础。本研究开发的SSR和SNP标记可应用于甜叶菊的遗传图谱分析、品种真实性的高效快速鉴定以及高糖苷含量新品种的开发。     

不同水稻品种种子萌发生理特性差异研究

为研究不同水稻品种的种子萌发生理特性,根据24个水稻品种的萌发情况,筛选萌发速度差异的水稻品种5个,分别代表萌发速度快、中、慢3种类型。种子萌发生理特性结果表明,萌发期内发芽速度存在差异的水稻品种,其淀粉酶活性、可溶性糖含量均存在差异。萌发速度快的水稻品种‘盐两优888’和‘盐恢888’,其α-淀粉酶活性、β-淀粉酶活性高,有助于种子内淀粉的分解,同时这2个品种在萌发过程中可溶性糖含量高,为种子萌发提供了能量和物质。反之,萌发速度慢的水稻品种,种子淀粉酶活性低、可溶性糖含量低。说明水稻种子中淀粉酶的活性、可溶性糖含量与种子萌发速度呈正相关。     

不同来源麻疯树种子的含油量和脂肪酸组成分析

本研究比较我国贵州、缅甸、泰国以及澳大利亚等地的7个种质的麻疯树种子的种仁含油率及脂肪酸组成,用索式抽提法测定种仁含油率,用GC-MS对脂肪酸组成进行测定.结果发现中国贵州的麻疯树材料种仁出油率为60.30%,远高于其他地方的材料.在麻疯树种子中鉴定出了9种脂肪酸,含量较多的脂肪酸种类为棕榈酸C16 : 0、油酸C18:1和亚油酸C18:2,分布范围分别为12.60%～14.66%、45.54%～56.10%和20.28%～36.72%.麻疯树种子的不饱和脂肪酸含量都很高,分布范围为76.17%～84.22%,其中,中国贵州材料中不饱和脂肪酸含量达到84.22%.