Effect of infectious bursal disease virus infection on energy metabolism in embryonic chicken livers

ABSTRACT

1. The purpose of this study was to investigate ATP levels and the activities of important enzymes involved in glycolysis and TCA cycle in livers of embryonated chicken eggs infected by infectious bursal disease virus (IBDV).

2. Embryonated chicken eggs (9 days) were randomly divided into two groups (50 eggs per group). The first group was inoculated with a very virulent IBDV (vvIBDV) isolate into the chorioallantoic membrane. The second group was maintained as uninfected control eggs and inoculated with physiological saline. Embryo survival was assessed daily, and six embryos were sacrificed at 24, 48, 72, 96, and 120 hpi for examining livers. Viral loads in the livers were evaluated by qRT-PCR. A comparative analysis of markers associated with the regulation of energy metabolism across several functional classes (ATP, pyruvic and lactic acids, mitochondrial protein, NAD+/NADH ratios, and enolase, lactic acid dehydrogenase and the respiratory chain complex I activities) were examined in the context of IBDV infection.

3. The results indicated that increases in the enzymatic activities associated with glycolytic metabolism in turn affected the synthesis and cytoplasmic concentrations of ATP at early timepoints in infected chicken embryos. Subsequently, energy metabolism was inhibited through the pathological perturbations of metabolic enzymes and mitochondrial damage, as inferred from reduced ATP generation.

4. These results suggested impaired bioenergetics, which may lead to liver dysfunction consequent to IBDV infection, contributing to the disease pathogenesis.     

淫羊藿多糖的硫酸化修饰及其对IBDV感染细胞的影响

按正交试验设定氯磺酸-吡啶法的9种修饰条件,对淫羊藿多糖（EPS）进行硫酸化修饰,得到9种硫酸化淫羊藿多糖（sEPS）,用MTT法比较了9种sEPS抵抗鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）感染鸡胚成纤维细胞（CEF）的作用。结果表明,硫酸化修饰后sEPS较未修饰的EPS显著提高了CEF抵抗IBDV感染的作用,以sEPS2和sEPS2的效果较好,且与sEPS的硫酸基取代度和糖含量有一定的相关性,反应温度80℃、氯磺酸与吡啶的配比1：8、反应2h为最佳修饰条件。     

传染性法氏囊病病毒VP2-4-3 cDNA的分子克隆和序列分析

从法氏囊组织分离IBDV超强毒株HK46并提取基因组RNA。以RNA为模板进行反转录合成cDNA第一链。采用长PCR扩增技术获得VP2－4－3 cDNA全长片段。将PCR产物克隆到pcDNA3.1( )载体，得到重组质粒pPP1。对pPP1插入片段全长序列进行了测序并对其序列进行了分析。结果表明，VP2－4－3 cDNA阅读框架由3039bp组成，可编码1012个氨基酸组成的前体多聚蛋白。经比较得知，HK46超强毒株VP2－4－3氨基酸序列与经典毒株间存在19－28个氨基酸的差异；与Harbin强毒株相差32个氨基酸；而与超强毒株OKYM和UK661分别相差2和6个氨基酸，且它们的VP2序列完全相同。在HK46超强毒株所特有的9个氨基酸中，3个位于VP2可变区，显示超强毒株其抗原性存在着变异。     

肉鸡神经内分泌免疫网络抗传染性法氏囊病病毒感染的机制

以Ａｖｉａｎ鸡为实验对象，研究了神经内分泌免疫网络在传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）弱毒免疫和强毒感染时发生的调节机制。结果表明，ＩＢＤＶ弱毒免疫能获得高滴度的血清ＩＢ－ＤＶ抗体。未免疫肉鸡感染ＩＢＤＶ强毒后会引起免疫功能抑制。ＩＢＤＶ攻毒后，肉鸡血浆皮质酮、ｃＧＭＰ升高，Ｔ淋巴细胞转化率、白介素－２活性明显降低。ＩＢＤＶ弱毒免疫肉鸡遭受ＩＢＤＶ强毒感染后，血浆ｃＡＭＰ和ｃＧＭＰ同时升高并呈现高阈平衡。ＩＢＤＶ攻毒前后，肉鸡血浆ＡＣＴＨ、皮质酮和免疫功能指标间有显著的相关性，提示外来病原入侵后，肉鸡垂体－肾上腺轴可调节免疫功能，主要是抑制非特异性免疫反应而增强特异性免疫反应     

中药成分对传染性法氏囊病毒感染细胞的影响

将黄芪多糖、当归多糖、蜂胶多糖、淫羊藿多糖、板蓝根多糖、黄芪黄酮、蜂胶黄酮、淫羊藿黄酮、黄芪皂甙、人参皂甙等 1 0种中药成分与鸡传染性法氏囊病毒 (IBDV)以 3种顺序加入到培养 2 4h的鸡胚成纤维细胞 (CEF)中。即先加中药后接种病毒、先接种病毒后加中药、中药和病毒同时加入 ,观察细胞病变的程度 ,以评价它们对IBDV感染细胞的影响。结果表明 ,先加中药后接种病毒和中药与病毒同时加入时 ,多数中药成分处理组在病毒接种后 72h的细胞病变程度明显减轻 ,表明多数中药能抑制病毒感染细胞 ,且有一定的量效和时效关系。     

传染性法氏囊病病毒VP2高表达毒株血清型分析与免疫试验

对 2个传染性法氏囊病病毒 (IBDV) VP2高表达毒株 0 0 ZB和 99TA3的血清亚型进行了分析 ,交叉中和试验表明 ,它们属不同的血清亚型。用这 2个毒株分别制备灭活疫苗进行免疫试验 ,试验保护率为 10 0 %,显示出良好的免疫效力。     

传染性法氏囊病病毒浙江分离株(ZJ2000)基因组A节段全长cDNA的克隆和序列分析

以传染性法氏囊病病毒（IBDV）浙江分离株（ZJ2000）基因组RNA为模板，采用Long-accurate RT-PCR(LA-PCR)一步法扩增并克隆了IBDV ZJ2000株基因组A节段全长cDNA。序列测定结果表明，克隆的A节段全长共3259个核苷酸，包括5'、3'端的非编码区（NCRs）和2个部分重叠的开放阅读框（ORF1和ORF2），与参比的血清1型毒株核苷酸序列的同源性高达95．2％－99．2％。二级结构预测表明，在5'-NCRs存在1个大型的茎环发夹结构。ORF2编码145个氨基酸的VP5，与参比毒株的同源性高达98．6％－100％。ORF1编码1012个氨基酸的VP2／VP4／VP3，在氨基酸水平上VP2、VP3、VP4与参比毒株的同源性分别达到94．9％－98．8、96．1％－98．5％、97．1％－99．2％。ZJ2000共有14－38氨基酸的替代，其中特有氨基酸6个，变异大多数集中在VP2高变区，突变率达2．9％－11％。第2个小亲水区内280位氨基酸由S替代了N、290位M替代了L。这2个突变可能与IBDV的抗原性有关。VP2－VP4剪切位点附近511和540位氨基酸的变异可能使ZJ2000株的毒力增强。分子系统进化树分析表明，ZJ2000与欧洲Cu-1株、P2株、CEF94株和中国Harbin株的有关最近，而与欧洲、香港、日本的超强毒株和美国的变异株相对较远。     

中药复方粗提物对IBDV感染细胞能力的影响

将中药方1、方2、和方3的粗提物与鸡传染性法氏囊病毒以三种顺序（先加中药后加病毒、先加病毒后加中药、中药和病毒同时加入）加入到培养24h、已长成完整单层的鸡胚成纤维细胞（CEF）上，观察它们对病毒感染细胞能力的影响。结果表明：在细胞安全浓度范围内，方1、方2和方3的粗提物在先于病毒或与病毒同时加入时均能抑制病毒感染，且与浓度与加药方式有关；以补气、清热凉血、滋阴为主的方3优于以补气、清热凉血为主的方1和以补气为主的方2。     

免疫胶体金试纸膜和AGP检测vvIBDV GX 株在SPF鸡体内的侵染性变化规律

对28日龄无特定病原（SPF）鸡通过点眼、滴鼻方式人工感染了传染性法氏囊病病毒（IBDV）超强毒株GX；自感染第2天至第9天，每天用免疫胶体金试纸膜和琼脂扩散试验（AGP）两种方法检测九种组织（法氏囊、脾脏、胸腺、肾脏、肝脏、盲肠、扁桃体、肺脏、心脏、直肠内容物）的病毒含量变化，初步探索出传染性法氏囊病病毒在鸡体内各组织的侵染性变化规律。