农业部要求农垦系统2014年积极推动奶牛、生猪等产业重组集聚

农业部最近公布了《2014年农垦工作要点》。2014年农垦工作主要目标：实现农垦生产总值增长10％以上，农垦企业运行质量和效益继续提高。     

牛肠道病毒2型VP1~+表达和间接ELISA方法的建立与应用

根据2005年从北京某牛场分离得到的一株牛肠道病毒2型(BEV-2)毒株序列,设计特异性引物,采用RT-PCR方法扩增BEV-2包含VP1(840 bp)蛋白基因片段的VP1+(1 275 bp)序列,扩增产物克隆到p MD-T19,进行测序验证。验证该序列为目的片段后,将其克隆到表达载体p ET-32a。重组质粒转化至Rosetta,经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示重组蛋白在大肠杆菌中高效表达。将重组蛋白作检测抗原包被酶标板,成功建立了检测牛肠道病毒2型抗体的间接ELISA方法。上述工作,为下一步BEV-2单克隆抗体的制备打下了基础。     

养猪生产中应用的抗生素生长促进剂替代方案(综述)(续)

<正>上期回顾:上一期主要介绍了AGPs替代方案中的抗菌肽和粘土矿物的作用等。3卵黄抗体在感染致病性微生物的情况下,使用卵黄抗体(一般指IgY)似乎是一个很有潜力的替代抗生素生长促进剂的技术方案。为了生产这些抗体,需要给产蛋鸡注射能引发猪特定疾病的致病原。给产蛋鸡注射这些抗原后会诱发免疫反应,产生相应的抗体。这些抗体通常都沉积在卵黄中。加强免疫是为了让抗体不断地沉积到卵黄中。然后将这些抗体从卵黄中提取出来并进行进     

鹅传染性法氏囊病的剖检与诊治

传染性法氏囊病毒是基因内含有两个片段的双链核糖核酸，这类的排列方式是可以进行遗传重组与抗原结构的变化，导致新的血清型或原始血清型变异株的发生。传染性法氏囊病也是属于双核糖核酸病毒科，鸡患此病较多，且鹅也会发现传染性法氏囊病毒。因此针对鹅患传染性法氏囊病毒的诊治，我们具体分析如下。     

肉禽未死，产业永存——山东肉禽业的困境与转型

看起来，我国肉禽业的产业格局迎来又一次变革的时候了，又一轮的行业洗牌与兼并重组正悄无声息地在全国各地展开。山东省作为我国肉禽业的桥头堡和排头兵，其洗牌战役打得尤为激烈。在这场没有硝烟的战争中，一大批中小散户正在被集体歼灭，大型龙头企业、集团化企业和一条龙企业正在以大鱼吃小鱼的方式迅速扩张，产业集中度进一步加强。     

观赏鸡中禽白血病病毒分离鉴定及全基因测序分析

为了解观赏禽元宝鸡中禽白血病病毒(ALV)的流行特点,通过接种DF-1细胞、ELISA和PCR检测,从元宝鸡中分离并鉴定出1株禽白血病病毒,命名为BJ1401。经PCR扩增、测序获得BJ1401的全基因序列。序列比对分析发现,病毒株BJ1401基因全长7 503 bp,其中,gp85基因核苷酸序列与C亚群同源性最高(91.6%),gp37、LTR与E亚群相应核苷酸序列同源性最高,分别为98.2%、91.6%。进化分析显示,gp85与C亚群代表株Prague C亲缘关系最近,gp37、LTR与E亚群代表株ev-1和SD0501处在同一进化分支上。表明观赏性元宝鸡中分离的禽白血病病毒BJ1401可能是C亚型与E型禽白血病病毒的重组病毒。     

利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联技术构建产肠毒素大肠杆菌LT敲除菌株

本研究旨在利用CRISPR/Cas9和λ-Red级联的技术对产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）K88的热不稳定性肠毒素（heat-labile toxin，LT）基因进行无痕敲除并获得K88 LT^-缺陷菌株。通过序列比对获取LT两端同源序列，并构建包含LT边界、氯霉素筛选标记、sgRNA和LT同源臂的供体片段；将供体片段转化至ETEC K88，同时分别利用λ-Red同源重组系统和CRISPR/Cas9基因编辑系统，对LT基因进行敲除；通过PCR验证获得了K88 LT^-缺陷菌株，并通过试验测定了敲除菌株的溶血能力和生长曲线。结果显示，λ-Red同源重组系统可成功地将LT基因替换为相应的供体片段，CRISPR/Cas9基因编辑系统可高效地对筛选标记进行删除，最终通过λ-Red和CRISPR/Cas9结合的基因编辑系统可成功对ETEC K88的LT基因进行无痕敲除。体外试验结果表明，K88 LT^-缺陷菌株的溶血能力丧失，并且生长速度比野生型菌株减缓，LT可能和ETEC K88的致病能力和生长性能有关。表明λ-Red和CRISPR/Cas9级联的基因敲除方法可用于LT毒素基因及其他一些大肠杆菌基因的敲除。K88 LT^-缺陷菌株的构建为下一步研究LT毒素的致病机制奠定基础。     

一种基于RPA的番茄褪绿病毒检测方法

番茄褪绿病毒Tomato chlorosis virus(ToCV)引起番茄褪绿病毒病,给番茄生产造成严重危害。开发快速准确的检测方法对该病害的防控具有重要意义。利用番茄褪绿病毒外壳蛋白(CP)基因序列,设计特异性引物,建立了ToCV的重组酶聚合酶等温扩增(recombinase polymerase amplification, RPA)检测方法,同时分析了该方法的灵敏度和特异性。结果表明,建立的ToCV-RPA方法在38℃恒温下40 min可从ToCV阳性的番茄样品中扩增出246 bp的特异性条带。扩增时间短,对设备要求低,且与番茄其他病毒无交叉反应,特异性好,灵敏度可达到PCR方法的10倍,适用于ToCV的快速检测。     

生态文明视域下河北城乡空间重组模式研究

生态文明是城乡规划进程中应当重点关注的目标要求。从自然和人工生态环境两个角度分别对城乡生态空间的形态和结构进行分析,提出相应重组构想,并以河北省昌黎县为例,提出生态空间重组模式和建议,指导河北城乡生态一体化发展。     

不同沉淀方法对外源表达凝乳酶活性的影响

从粗提重组凝乳酶的得率、保存活性2个方面比较了乙醇沉淀法和硫酸铵沉淀法的差别。结果表明，相对于硫酸铵沉淀法，乙醇沉淀法获得蛋白的量相差不是很大，但是乙醇沉淀法所获得蛋白的单位效价是硫酸铵沉淀法的1．27倍，且乙醇沉淀法所得产物的比活性提高了16．78％。综合考虑重组凝乳酶的得率与活性，用乙醇沉淀的效果较好。