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为了比较冠状病毒基因相关性,获得特异基因克隆制备冠状病毒基因芯片,根据发布的基因序列,每种病毒设计4~17对引物,利用火鸡冠状病毒(TCV)原毒和蔗糖密度梯度离心纯化浓缩的犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)、牛冠状病毒(BCV)细胞毒,提取总RNA并反转录和PCR扩增。回收PCR产物连接pGEM-T-easy载体并转化大肠杆菌TGI,经PCR鉴定后测序。将所有基因片段的核苷酸序列和推导的氨基酸序列,分别与GenBank有关病毒相关基因片段的核苷酸序列进行分析比较,确定它们的同源性。通过对不同冠状病毒不同基因片段的克隆和测序,发现同一群冠状病毒核苷酸序列间具有较高的同源性。 相似文献
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根据发布的7种动物冠状病毒相关基因的序列,给每种病毒设计了4~17对引物,同时依据RNA聚合酶基因序列合成了l对兼并引物,利用TCV原毒和纯化浓缩的CCV、FCV、FIPV、TGEV、PRCV、BCV细胞毒,构建了89个基因片段的克隆.采用煮沸裂解法制备质粒DNA,进行特异引物PCR扩增,回收纯化产物,点制冠状病毒基因芯片.抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,同时对BCV、CCV利用Cy3-dCTP随机渗入反转录标记,与芯片进行杂交检测.结果显示,BCV和TCV基因克隆间未见交叉,CCV、FCV、FIPV、TGEV、PRCV则存在广泛交叉.选择无交叉的特异克隆片段点制最终基因芯片,并与病毒多重PCR扩增产物杂交,芯片信号未见交叉,结果判断明确.表明,基因芯片检测法比传统PCR法敏感1000倍. 相似文献
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通过对白桦5个种源当年生苗高的方差分析,结果表明:各种源间的苗高差异极显著,经过多重比较,确定欧洲白桦杂种为最佳种源,枫桦为最差种源,分别对每个种源各家系平均苗高进行多重比较,找出每个种源的最优家系和最差家系。通过对小北湖和帽儿山两个种源的白桦优树子代测定苗的方差分析表明:两种源间的苗高差异极显著;对小北湖白桦优树进行多重比较,确定最优家系为5号、27号和8号,最差家系为44号和48号。本次试验由于帽儿山白桦优树只有一个家系,因此不能进行多重比较。对欧洲白桦优树各家系的平均苗高进行方差分析和多重比较,表明欧洲白桦优树家系间差异极显著,并确定最优家系为54号、76号和63号,最差家系为93号、65号和95号。通过对欧洲白桦优树与国内白桦优树的比较分析表明:欧洲白桦优树、小北湖白桦优树和帽儿山白桦优树三种源间平均苗高差异极显著,经多重比较确定小北湖优树为最佳种源。 相似文献
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