赤羽病微量病毒中和试验诊断方法的研究

应用引自日本的赤羽病病毒，制备了微量病毒中和试验抗原和高免阳性血清，建立了赤羽病微量病毒中和试验诊断方法，应用此方法对广东省７２４头牛血清进行了检查，阳性率为３５．３％，对上海６６５头牛血清作了检查，阳性率为６７．７％，说明这些地区曾流行过赤羽病，同时对澳大利亚当地牛１０８头进行检查，阳性率为５５．５％，与外报道一致。对澳大利亚、加拿大，美国进口牛１７３头的检查结果，全部阴性，对澳大利亚进口羊９９２头的检查结果，发现阳性１头，已得到澳方认可。     

犬猫3种冠状病毒基因克隆的构建与芯片检测技术

蔗糖密度梯度离心纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)和猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的细胞培养物,分别设计7、17、11对引物,对病毒RNA进行反转录和PCR扩增,回收PCR产物连接pGEM-T载体并转化大肠杆菌TGI,构建35个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段,每种病毒只选择其4对引物克隆的基因片段。将特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒样品PCR扩增产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于3种病毒的检测与区分。     

出口渔场灭鲑气单胞菌灭鲑亚种的分离鉴定

灭鲑气单胞菌 (Ａｅｒｏｍｏｎａｓｓａｌｍｏｎｉｃｉｄａ)属弧菌科 (Ｖｉｒｂｒｉ ｏｎａｃｅａｅ)气单胞菌属 (Ａｅｒｏｍｏｎａｓ) ,为革兰氏阴性短杆菌 ,在世界各地都有分布。本菌营养要求不高 ,专性需氧 ,可引起多种水生动物的传染病 ,主要有疥疮病等[1] 。近期澳大利亚等国家对我国出口的观赏鱼要求检疫此菌。为此 ,我们对上海地区所有的观赏鱼出口渔场开展了该病菌的监测工作 ,并在某渔场送检样品中分离到 1株革兰氏阴性杆菌。经鉴定为灭鲑气单胞菌灭鲑亚种 ,结果报告如下。1　材料和方法1.1　病原菌分离无菌取肾脏划线接种于ＴＳＡ…     

Real-time PCR方法和PCR方法检测虾白斑综合征病毒

由白斑综合征病毒引起的虾白斑综合征是国际兽医局（OIE）规定的必须上报的水生动物二类疫病。本研究首先通过设计新的PCR引物，提高了PCR检测白斑综合征病毒的阳性检出率。为进一步提高白斑综合征病毒检测的灵敏度，本研究采用TaqMan探针技术建立了快速检测白斑综合征病毒的real-time PCR方法，通过与常规PCR方法比较，证实其检测灵敏度显著提高。     

上海等4省市动物冠状病毒的流行病学调查

对上海、浙江、安徽和湖北4个地区感染鸡、鸭、猪、牛和犬的5种冠状病毒,即禽传染性支气管炎病毒(IBV)、猪传染性胃肠炎病毒(TEGV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)、牛冠状病毒(BCV)和犬冠状病毒(CCV)进行病原学和血清学抽查,共完成测试样品2 368份,包括566份拭子样品和1 802份血清样品。检出IBV抗原阳性4份。在血清学调查中,发现IBV抗体的阳性率为86.4%(鸡)和0.7%(鸭);猪TGEV阳性率为6.8%,PRCV阳性率为18.7%;牛BCV阳性率为5.4%;犬冠状病毒的阳性率为50%。     

基于无线传感器网络的温室大棚环境监测系统设计

针对目前温室大棚环境监测系统存在布线困难、灵活性低和成本高等问题,构建了基于无线传感器网络(WSN)的温室大棚环境监测系统,并重点对传感节点和网关节点进行了设计。该系统的传感器节点负责对环境参数进行采集,并通过无线传感器网络将数据发送到网关节点,网关节点再向远程监测平台传输数据。节点硬件的微处理器模块采用MSP430F149单片机进行数据处理和控制;无线通信模块由nRF905射频芯片及其外围电路组成,负责对数据进行传输和接收;传感器模块采用AM2301传感器进行数据测量;电源模块以LT1129-3.3、LT1129-5和Max660组成的电路提供3.3和±5.0 V电源。节点的无线路由协议和时间同步算法均采用C语言开发,实现节点数据采集与处理、规则转发和远程传输等功能。远程监测软件采用NET.ASP、HTML和C#开发,为用户提供形象直观的Web模式远程数据管理平台。该系统在青海省西宁市温室大棚进行了组网测试,结果表明系统运行稳定可靠,网络平均丢包率为2.4%,有效解决了温室环境监测系统中存在的问题,满足温室大棚栽培环境监测的应用要求。     

基因芯片检测5种动物冠状病毒的初步研究

采用蔗糖密度梯度离心,纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的细胞培养物,分别设计7,17,11,10和4对引物,构建了49个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段。结果表明:克隆CCV1,CCV2,CCV5和CCV7可特异诊断CCV,克隆FCV6,FCV7,FCV8和FCV9可特异诊断FCV,克隆FIPV2,FIPV7,FIPV8和FIPV9可特异诊断FIPV,克隆PRCV1,PRCV2和PRCV3可特异诊断PRCV,克隆TGEV3,TGEV4,TGEV5和TGEV6可特异诊断TGEV。将这些特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒PCR产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于这5种动物冠状病毒的检测与区分。     

黄花楤木繁育技术试验研究

黄花楤木是五加科槐木属植物,它有多种用途,根、茎皮和叶皆能入药,可以治疗多种疾病,芽苞富有营养,可以食用,它还是很多城市因林绿化和水土保持树种.这一资源在六盘山地区还未得到广泛开发利用,又无大面积人工栽培.天然分布仅仅有限,目前当地群众为了提高经济收入在每年春季发芽时进行大量采集嫩芽,甚至将树砍倒,极大地破坏了资源,又引起水土流失.为此,经我们2 a研究,探索出黄花楤木无性和有性繁殖苗木技术,在六盘山林区试验栽培,适应性强,成活率高,因此,在大力营适针阔混交林过程中,该树种应得到发展和利用.     

利用套式PCR检测牛羊乏质体

为同时检测和鉴定牛边缘乏质体、中央乏质体及绵羊乏质体,根据这3种病原体的msp4基因核苷酸序列,自行设计、合成了针对3种乏质体的2对通用引物,及分别针对三者的特异引物,通过PCR条件优化,建立了检测乏质体及分别鉴定3种乏质体的套式PCR方法,并与OIE推荐的msp5半套式PCR比较.结果显示:该方法对牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、羊莫氏巴贝斯虫、山羊泰勒虫、温氏附红细胞体、东方巴贝斯虫、刚地弓形虫、伊氏锥虫均未扩增出特异性片段.套式PCR检测乏质体DNA量为0.2 pg(相当于6个感染红细胞).检测l 119份来自6个不同地区的奶牛、肉牛、水牛及羊的临床样品,阳性106份,经鉴定边缘乏质体46份,中央乏质体15份,绵羊乏质体35份,混合感染中央乏质体和绵羊乏质体4份,混合感染边缘乏质体和绵羊乏质体3份,混合感染边缘乏质体和中央乏质体3份.首次在分子生物学水平证明中央乏质体存在于中国.同时,证明牛可以混合感染边缘乏质体和中央乏质体或绵羊乏质体,以及混合感染中央乏质体和绵羊乏质体.上述848份样品用OIE推荐的msp5半套式PCR同时检测,两者符合率为98.5％(835/848).检测结果表明,msp4套式PCR特异、敏感,可用于边缘乏质体、中央乏质体、绵羊乏质体的检测和鉴定.