稀有鮈鲫（Gobiobypris rarus）作为转基因模型鱼的研究

转基因动物的大部分实验都是用实验室的小鼠来完成的，因为它具有形体小，易饲养生活周期短，后代数日多的优点。转基因鱼研究也需要一种饲养条件要求简单，性成熟早，繁殖周期短，产卵易控制的小型鱼类作为实验模型鱼，以能方便地测定构建的基因表达，转录功能等，日本几个实     

影响外源基因在鱼染色体中整合因素的研究

通过微注射法将不同构型和不同剂量的全鱼基因（ｃＭＴｓＧＨ，鲤鱼ＭＴ启动子与大麻哈鱼ＧＨ基因）导入不同发育时期的鲫鱼受精卵，研究其孵化率；孵出鱼苗后．通过斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，研究其整合率；并对受精卵去壳与未去壳导入全鱼基因后比较其整合率。结果表明：１显微注射外源基因后以单细胞前、中期孵化率最高．与对照组比差异不显著（Ｐ＞０．０５）．与其它组比较差异极显著（Ｐ＜０．０１）；２．综合孵化率与整合率．外源基因导入的最佳时期是受精卵单细胞后期；３．去壳卵与非去壳卵注射外源基因后整合率差异不显著．但孵化率有显著差异（０．０１＜Ｐ＜０．０５）；４、外源基因整合率随着注射ＤＮＡ拷贝数的增加而增大．孵化率则相反：５．线性ＤＮＡ整合率高于环形ＤＮＡ整合率。     

鲤鱼耐寒性状研究

用80个随机引物对黑龙江野鲤(耐寒)、柏氏鲤(不耐寒)和杂交F1(越冬成活)的群体混合DNA样品进行RAPD—PCR扩增，结果引物S1043、S1052和S1066扩增出与抗寒性状相关的分子标记各一个。至此，共获得9个与鲤鱼抗寒性状相关的分子标记，进一步表明抗寒性是数量性状(QTL)受微效多基因控制。此外，就RAPD—PCR实验中需要注意的问题如模板纯度、水的去离子和不同商标酶的活性等进行了简单的讨论；并对目前所应用的淡水鱼类抗寒基因工程研究策略及现状进行了简单概述。     

低温鲤鱼血清pH值的变化

荷包红鲤抗寒品系(♂,耐寒)与柏氏鲤(♀,不耐寒)杂交F2分别进行室内水温缓降试验和骤降试验。当水温缓降至4℃时,临近死亡(组d)血清pH值为7.31,成活组(g,o)为7.08￣7.20,对照组(c)为6.97。单因素方差分析表明,同一温度下,不同样本组与血清pH值变化无直接关联;经Ducan式多重范围比较,临近死亡组与对照组血清pH值存在显著性差异(P<0.05);水温骤降试验10,8,6,4℃的pH值分别为6.71,6.60,6.71,6.74。单因素方差分析表明,不同温度与血清pH值不存在显著性关联;经Ducan式多重范围比较,4℃与8℃F2血清pH值存在显著性差异(P<0.05)。另外,本研究虽然通过两种降温方式模拟淡水鱼类冬季的生存环境(0￣4℃),但pH值的检测结果呈现相似的变化,即,同一温度不同样本组或同一样本不同温度组,血清pH值的均值呈偏碱性趋势变化。     

用鲤鱼EST-SSRs分子标记分析长江黑龙江鲤种群结构

从鲤鱼ESTs的数据库（10691个）中进行微卫星序列筛选，共发现微卫星序列127个，占整个ESTs数据库的1.19%，另外从本研究室构建的鲤鱼脑组织cDNA文库中筛选到微卫星序列20个。根据筛选得到的微卫星序列设计引物68对，合成引物40对，其中27对引物能够获得预期的目的片段，20对引物在所检测的群体内及群体间表现出多态性。用此20个多态性标记分析了长江鲤和黑龙江鲤的群体遗传结构，结果表明：长江鲤和黑龙江鲤在多数位点表现出较高的遗传多样性，20个位点的平均有效等位基因数分别为3.9135、3.4820；平均观察杂合度为0.6067、0.5667；平均期望杂合度为0.6737、0.6194；平均多态信息含量为0.6308、0.5714。长江鲤的遗传结构好于黑龙江鲤，两个群体的Hardy-Weinberg偏离指数较小，群体基本保持平衡，群体结构较合理；其中HLJE1、HLJE10位点在长江鲤和黑龙江鲤的扩增结果相差较大，长江鲤的多态性明显高于黑龙江鲤，位点多态信息含量相差一倍以上，可用于群体的鉴别。     

半饥饿对转基因鲤生长和性腺发育的影响

为研究转大麻哈鱼(Oncorhynchus keta)生长激素基因鲤(转基因鲤)在不同食物含量条件下的生长竞争(主要是生长、生殖),设定正常投饲组和半饥饿试验组,每组饲养池大小相同、混养的转基因鲤和对照鲤初始总体质量相等。连续3个月定期采样后,从形态学和组织学研究转基因鲤和对照鲤(Cyprinus carpio)的生长状况、饲料占有情况和性腺发育状况。结果表明:正常投饲组的转基因鲤和对照鲤体质量相对增长率分别为127.9%和70.6%,而半饥饿试验组的转基因鲤、对照鲤的体质量相对增长率分别是72.3%和52.2%,表明无论在饱食还是在半饥饿情况下,转基因鲤均显示出快速生长的优势;2组试验鱼的性腺发育进程无明显差异(P>0.05),但在部分月份转基因鲤和对照雌、雄鲤的相对性腺质量差异显著(P<0.05),无论在饱食还是在半饥饿情况下,转基因鲤的性腺发育情况略好于对照鲤。     

应用RNAi技术构建的转基因鲤的检测分析

将构建携带H1启动子的肌肉生长抑制基因的真核表达载体,通过显微注射技术导入鲤受精卵核区附近,获得了一批具有RNAi表型的转基因鲤,PCR和分子杂交检测证实外源基因整合到受体鱼的基因组中,阳性率为32.78%;一龄鱼的生长实验表明,转基因鲤比普通鲤平均生长快0.99倍,其体高和体厚分别平均增长0.22和0.26倍,其中有31.82%的群体平均体厚是普通鲤的1.6倍。结果显示,该质粒表达的发夹环型dsRNA可以有效降解其转录产物,对阻抑肌细胞中同源基因的表达、鲤肌肉的再生能力增强起到了重要作用。这种抑制作用表现为鲤背部肌肉增厚、体质量增加,说明该基因经转录产生的双链RNA在鲤体内具有RNAi效应。RNAi技术为获得具有特殊功能的转基因鲤提供了新的手段。     

鲤鱼三、四核苷酸重复微卫星座位的筛选及特征分析*

采用磁珠富集法结合放射性同位素杂交法分离出鲤鱼(Cyprinus carpio)三、四核苷酸重复的微卫星阳性克隆1248个。对其中的384个克隆进行测序分析,共得到微卫星序列325个,其中完美型244个（75.08%）,非完美型59个（18.15%）,混合型22个（6.77%）。依据得到的微卫星序列,用Primer 3软件在线设计并合成引物145对,检测结果显示71.43%（80对/112对）的引物在野生个体间表现出多态性,等位基因数在3~12之间,多态信息含量在0.2109~0.8607之间,80%的位点处于高度多态水平。对群体的遗传结构评估结果显示,四核苷酸重复的微卫星标记在黑龙江鲤野生群体表现出的多态性水平（PIC=0.7740）高于三核苷酸重复（PIC=0.5161）和双核苷酸重复（PIC=0.49）,适用于群体间遗传差异分析和遗传连锁图谱的构建。     

同源与异源精子对方正银鲫子代存活、生长及性别的影响

5月中下旬繁殖季节,用方正银鲫（Carassius auratus gibelio）的卵子分别与麦穗鱼（Pseudorasbora parva）（方正银鲫♀×麦穗鱼♂,简称FM）、方正银鲫（方正银鲫♀×方正银鲫♂,FF）和荷包红鲤（Cyprinus carpio）（方正银鲫♀×荷包红鲤♂,FH）的精子进行人工授精,孵出的仔鱼在网箱中饲养,测定和统计各组子代的存活率、绝对增重率和性比等。结果表明：FF子代的成活率（91.15±1.78%）极显著地高于FM（87.50±2.13%）和FH（85.00±1.04%）（P〈0.01）,FM和FH之间差异不显著（P〉0.05）;FM（20.17±4.33 g）、FH（23.13±3.58 g）子代的出池体质量显著高于FF（18.90±3.82 g）（P〈0.05）,无论雌性还是雄性子代,组间差异均极显著（P〈0.01）,而组内、性别间生长差异不显著（P〉0.05）;FM（99%）、FF（73%）和FH（99%）子代的雌性百分比明显偏向雌性（P〈0.01）,且组间差异极显著,异源精子受精后子代中雌鱼比例明显增高（P〈0.01）。本研究结果证明：银鲫生长性状中存在＂异精效应＂,异源精子对子代的存活率和性别比例有显著影响,对生产中积极利用异源精子提供了数据支持。     

扁吻鱼微卫星的筛选及群体多样性分析

本文采用磁珠富集法筛选新疆扁吻鱼(Aspiorhynchus laticeps Day)的微卫星分子标记,获得13个位点,同时随机抽取1000对鲤引物检测扁吻鱼同源位点的多态性,获得具多态性位点18对。应用31对引物对扁吻鱼与塔里木裂腹鱼(Schizthorax biddulphi)进行遗传多样性分析,共检测到110个等位基因,每个位点的等位基因数为2~6个,扁吻鱼群体平均多态信息含量为0.5353,平均观测杂合度为0.5306,平均期望杂合度为0.6057。表明扁吻鱼群体多态性较高,遗传多样性处于中等偏上水平。群体间遗传距离为0.4763,遗传相似系数为0.6211,表明两个群体为同科不同属的群体。