青年荷斯坦奶牛初次超数排卵试验

对影响荷斯坦青年奶牛超数排卵的因素进行了对比分析，并探索了青年奶牛超排的可行性方案。卵巢上有黄体存在的供体牛可以用于超排。青年奶牛在不同性周期阶段进行超排的结果不同，但差异不显著。用FSH联合氯前列烯醇，采用常规逐日递减法肌肉注射进行超排，平均获得胚胎7．07枚，可用胚胎5．98枚；在人工授精的同时注射促排卵素3号(LRH—A3)，平均回收胚胎8．64枚，可用胚胎为5．5枚。促排卵素3号能提高胚胎的回收率，但可用胚胎率急剧下降。     

山羊乳腺上皮细胞的分离、培养与超微结构观察

从山羊乳腺取部分组织进行细胞培养，并通过控时消化分离纯化山羊乳腺上皮细胞，建立了山羊乳腺上皮细胞系。结果表明：用含150U／mL Ⅰ型胶原酶和100U／mL透明质酸酶的混合液，37℃消化组织块4h，可得到大量的分散单细胞用于原代培养，该法是获得山羊乳腺组织单细胞的适宜方法；以含10％胎牛血清和双抗的RP-M11640或DEME／F12培养液为基础液，在培养液中添加氢化考的松、胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)、表皮生长因子(EGF)及胰岛素一转铁蛋白一硒钠(ITS)对山羊乳腺上皮细胞的生长具有较明显的促进作用。上皮细胞显微和超微结构显示：山羊乳腺上皮细胞在体外培养过程中可形成岛屿状单层聚集和类似圆顶状的结构；传代培养到第7代的细胞仍增殖旺盛，细胞内有丰富的脂滴和高尔基小泡，细胞分泌活动旺盛。     

影响卵母细胞体外成熟的因素

卵母细胞是胚胎工程技术研究中最为重要的一种试验材料,卵母细胞的体外成熟(maturation in vitro,IVM)可以为用体细胞核移植的方法生产大型转基因动物的研究提供大量MⅡ期卵母细胞，同样也是动物体外受精技术的关键环节。作者就卵母细胞体外成熟的影响因素做了简要的论述，主要介绍了卵母细胞来源、其培养系统、激素和生长因子等因素对卵母细胞体外成熟的影响。     

猪体外受精中多精子受精

多精子受精指多于一个的精子进入卵母细胞的胞质中，导致多倍体合子的形成、早期胚胎发育夭折或发育异常。哺乳动物在正常的体内受精中多精受精只占1％～2％，当猪卵母细胞在体外成熟和受精时，多精子受精率明显比体内成熟猪卵母细胞的高。多精子受精而发育的猪早期胚胎可发育至囊胚阶段甚至可以更进一步发育，但和两原核正常胚胎相比它们的囊胚内细胞团细胞数明显减少。     

TSA对滩羊成纤维细胞作为供体细胞的作用

为探索成纤维细胞作为供体细胞的潜能和TrichostatinA(TSA)处理供体细胞的适合浓度,提高克隆胚胎的发育水平。本研究分别利用100、50、25、10ng·mL-1TSA处理滩羊成纤维细胞,观察细胞形态,统计细胞活率,利用流式分选技术分析处理前后细胞的周期时相,同时通过间接免疫荧光法检测细胞乙酰化水平,并以经过10～50ng·mL-1TSA处理的成纤维细胞作为供体细胞,检测其重构胚发育水平。结果发现,当TSA的浓度达100ng·mL-1时,细胞大量死亡,不同浓度TSA处理细胞24h后,细胞周期被明显抑制在G0/G1期,乙酰化水平明显高于对照组,其中供体细胞经10ng·mL-1TSA处理的克隆胚胎卵裂率和囊胚率明显升高(P0.05,(85.2±3.4)%vs(68.6±6.7)%,(35.6±5.7)%vs(10.4±8.3)%)。结果表明,经10ng·mL-1TSA处理的滩羊成纤维细胞周期同步化明显,乙酰化维持较高水平,重构胚胎发育水平明显提高,适合作为成纤维细胞的处理方法和浓度。     

体外精子发生培养方法研究进展

近1个世纪以来,科研人员致力于研究在体外培养的条件下产生具有功能的精子。直到近几年,研究人员才成功利用体外组织培养的方法获得了具有受精能力的精子。体外研究精子发生的方法主要有组织培养法和体外培养分离细胞的方法,结合两种方法将分离的生殖细胞移植到睾丸组织中进行组织培养。作者回顾了体外精子发生的培养方法,为临床应用和阐明精子发生机制的基本问题提出相关见解。     

山羊胎儿成纤维细胞的冷冻保存和体外培养

将胎儿成纤维细胞悬浮于不同的冷冻保护液中 ,在不同的温度下进行冷冻保存试验。结果显示 ,当保护液中含有 90 0 m L / L胎牛血清 (FBS)时 ,- 196℃下保存的山羊胎儿成纤维细胞解冻后的细胞贴壁率高于- 80℃ ,且前者贴壁细胞增殖也较后者快 ,二者间差异显著 ;而在 - 2 0℃条件下只有一小部分细胞能够存活 ,与前两者相比差异极显著 ,说明 - 2 0℃不适合冷冻胎儿细胞。冷冻保护液中含有 10 0 m L / L二甲基亚砜 (DMSO)的保护效果明显好于 5 0 m L / L DMSO,二者间差异显著。用组织块法培养的细胞 ,在两种培养基 DMEM和 M199中添加 10 0 m L / L FBS和 2 mm ol/ L 2 -巯基乙醇 (2 - Me) ,其组织块成活率及细胞生长速度均高于单纯添加 10 0 m L / LFBS,同时证明 DMEM和 M199都能用于胎儿成纤维细胞的体外培养。以 DMEM培养液为基础 ,分别添加 2mm ol/ L 2 - Me,5 m L / L FBS,10 0 m L / L FBS和 2 m mol/ L 2 - Me+10 0 m L / L FBS对山羊胎儿成纤维细胞进行体外培养 ,结果显示 ,细胞在 10 0 m L / L FBS和 2 mm ol/ L 2 - Me+10 0 m L / L FBS培养液中生长迅速 ,两者间无明显差异 ,2 - Me的存在促进了细胞的增殖 ;两者都与添加 2 m mol/ L 2 - Me组存在显著差异 ;添加 2 m mol/ L 2 - Me和 5m L / L FBS相     

N-乙酰半胱氨酸对双酚A诱导的猪肾细胞凋亡和炎症反应的抑制作用

【背景】双酚A(BPA)广泛应用于塑料材料工业制造,其从塑料制品中渗出,暴露在食物、水、土壤和空气等多种环境介质中,导致动物长期接触,并经过胎盘和母乳传递给后代,干扰动物生长和发育,对动物生长性能和生产效率产生不利影响。N-乙酰半胱氨酸（NAC）作为公认的强效抗氧化剂,能够调节氧化应激、细胞凋亡、炎症等多种病理生理过程。然而,NAC对BPA诱导的猪肾细胞损伤的调节作用尚不清楚。【目的】探究抗氧化剂NAC在BPA诱导的PK15细胞凋亡和炎症反应中的潜在作用,为NAC在对抗BPA诱导的猪肾细胞损伤中的应用研究提供科学依据。【方法】选取PK15细胞为试验材料,采用相应的抗氧化检测试剂盒分别测定细胞内过氧化氢酶（CAT）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性变化;设置不同浓度NAC(0、2、5和10 mmol·L-1)预处理,并与BPA共处理PK15细胞,CCK-8检测细胞活力以筛选最佳的NAC作用浓度;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测凋亡相关基因（BAX、BCL-2和Caspase3）表达和炎症相关基因（IL-8、IL-6、IL-1β和TNF-α）m...     

卵母细胞体外成熟的影响因素

随着哺乳动物体外受精、细胞核移植技术的不断深入,人们对成熟卵母细胞以及哺乳动物胚胎需求量日益增加,卵巢内丰富的卵泡资源是胚胎工程迅速发展的基础。本文从卵巢因素、供体、体外培养条件和成熟培养液中添加成分等对卵母细胞IVM的影响进行了分析,为胚胎的体外生产提供理论基础和科研依据。     

血清、促性腺素、EGF和水对山羊卵母细胞体外成熟的影响

为了通过比较培养筛选出能改进和提高山羊卵母细胞体外成熟效率的培养体系 ,培养的山羊卵母细胞以 TCM-199为基础培养液 ,添加 :(1) 10 %血清 (胎牛血清 (FBS)或发情山羊血清 (EGS) ) 2 0 m g/ L促黄体素 (L H) 10 mg/ L促卵泡素 (FSH) 1m g/ L 雌二醇 (E2 ) ;(2 ) 10 % EGS 促性腺素 (L H∶ FSH=5 mg/ L∶ 0 .5 m g/ L 或 2 0 mg/ L∶ 10mg/ L )或者 0 .0 75 IU / m L人绝经期促性腺素 (HMG) 1mg/ L estradiol 17β;(3) 10 % EGS 0 .0 75 mg/ L HMG 10～ 2 0 μg/ L EGF。此外 ,以 M199 10 % EGS 0 .0 75 mg/ L HMG 10～ 2 0 μg/ L EGF为培养基 ,溶解于自制超纯水或储存的商品化超纯水来培养卵母细胞。培养条件为 38℃ ,5 % CO2 。培养 2 4 h后 ,在体式显微镜下统计处于 M 期的卵母细胞比例。结果显示 :在卵母细胞成熟液中添加 10 % EGS比 10 % FBS的成熟培养效果好 ;添加 HMG能够促进卵母细胞的成熟 ,其效果比添加不同比例的 L H/ FSH好 ;成熟液中添加 10～ 2 0μg/ L EGF能促进卵母细胞的成熟 ,但成熟率没有明显提高 ;新鲜的超纯水对于卵母细胞的培养是必要的。结论 :新鲜超纯水配制的 M199 10 % EGS 0 .0 75 IU / m L HMG 10～ 2 0μg/ L EGF培养液可以获得最佳卵母细胞培养效果