青年荷斯坦奶牛初次超数排卵试验

对影响荷斯坦青年奶牛超数排卵的因素进行了对比分析,并探索了青年奶牛超排的可行性方案.卵巢上有黄体存在的供体牛可以用于超排.青年奶牛在不同性周期阶段进行超排的结果不同,但差异不显著.用FSH联合氯前列烯醇,采用常规逐日递减法肌肉注射进行超排,平均获得胚胎7.07枚,可用胚胎5.98枚;在人工授精的同时注射促排卵素3号(LRH A3),平均回收胚胎8.64枚,可用胚胎为5.5枚.促排卵素3号能提高胚胎的回收率,但可用胚胎率急剧下降.     

EGF和FBS对牛孤雌胚胎发育的影响

在卵母细胞体外成熟液中分别添加0,10,30,50ng/mL表皮生长因子(EGF),24h检查成熟率,将成熟的卵母细胞置于5μmol/L离子霉素(Ionomycin)中激活5min后,在含有6-DMAP和CCB的培养液中培养4h,最后移入CR1培养液中培养,并在孤雌激活后第0,2,4,6天添加体积分数10%的胎牛血清(FBS),7～8d后检查囊胚率,探讨牛成熟培养液中添加EGF及FBS对牛孤雌胚体外发育的影响。结果表明,添加30ng/mL的EGF能促进卵母细胞的成熟率和孤雌囊胚的发育率;在第4天添加FBS更有利于胚胎的发育。     

人尿促性腺激素、雌二醇及表皮生长因子对牛卵母细胞体外成熟质量的影响

试验旨在研究不同激素配比及表皮生长因子(EGF)浓度对牛卵母细胞体外成熟及卵母细胞质量的影响。将随机分组的卵丘-卵母细胞复合体于添加FSH+LH、HMG、FSH+LH+E₂、HMG+E₂ 4种不同激素组合配比的成熟基础液中培养,对比其体外成熟率,比较了EGF对牛卵母细胞体外成熟率和孤雌胚胎体外发育的影响,并采用TUNEL法检测添加不同浓度EGF的牛孤雌激活囊胚细胞凋亡情况。结果表明,添加HMG的成熟试验结果稳定,E₂对牛卵母细胞成熟有一定的促进作用,HMG+E₂联合使用可以得到高效稳定的成熟结果;在此基础上,在成熟液中添加30 ng/mL EGF对牛卵母细胞的成熟质量、胚胎发育及降低胚胎细胞凋亡都有明显的促进作用。因此,在体外成熟培养液中添加0.075 IU/mL HMG、1 μg/mL E₂和30 ng/mL EGF对牛卵母细胞的成熟和质量较为有益。     

解冻后的卵母细胞质量评定方法研究进展

卵母细胞的冷冻保存可为体外受精、核移植、转基因动物的研究提供更方便的材料来源,有助于优秀家畜的保种,被广泛应用于辅助生殖领域,同时可以避免胚胎研究过程中的伦理学和法律方面的限制。但是解冻后卵母细胞质量的评定工作各国学者的方法标准不一,不利于进一步研究。论文将从细胞和分子水平就解冻后卵母细胞的质量评定方法做一综述,旨在为解冻后卵母细胞质量的高效评定工作提供参考。     

牛表皮祖细胞的体外分离培养

[目的]探索和建立牛表皮祖细胞体外分离与培养体系。[方法]无菌取3个月龄的胎牛皮肤组织,用组织块法培养获得细胞,用L—DMEM培养基（添加5％FBS,0．05mmol／LCaCl2,20ng／mlEGF,20ng／mlbFGF,1％B-27,0．4斗g／mlhydrocortisone）置细胞培养箱内培养。在显微镜下观察细胞的克隆形成能力,免疫细胞化学染色鉴定a6、B1整合素。[结果]获得的细胞有很高的克隆形成能力,a6、p1整合素免疫细胞化学染色阳性。RT—PCR检测结果表明,P,代时Oct4基因有表达,但传代超过P11代时,Oct4基本不表达。[结论]该研究可为进一步采用组织工程技术构建皮肤组织奠定基础。     

不同植冰温度下冷冻液的结晶变化及其对小鼠胚胎冷冻的效果

采用程序化冷冻方法 ,对不同植冰温度下几种冷冻液的结晶变化进行了分析 ,并比较了其对小鼠胚胎的冷冻效果。结果表明 ,- 5 .0℃植冰时 ,3种冷冻液 PEF、PGF和 PEGF只有部分结晶 ;当植冰温度为 - 5 .5℃时 ,PEF和 PEGF完全结晶时间为 1 0 min,PGF在 1 5 m in尚未完全结晶 ;- 6 .0℃植冰时 ,3种冷冻液完全结晶时间分别为 8,1 0和 1 0 min;- 6 .5℃植冰后完全结晶时间分别为 5 ,8和 5 min。将小鼠胚胎载入上述 3种冷冻液 ,- 5 .5℃植冰冷冻解冻后 ,囊胚孵化发育率分别为 81 .7% ,6 8.5 %和 87.5 % ,- 6 .0℃植冰时发育率分别为 80 % ,76 .5 %和 90 .9% ,- 6 .5℃植冰后的发育率分别为 1 0 % ,1 3.3%和 38.4 %。据此得出 ,在 - 5 .5或 - 6 .0℃时植冰 ,以 PEGF作为冷冻保护液冷冻保存小鼠胚胎效果较好     

人类人工染色体(HACs)研究进展

人类人工染色体(HACs)由着丝粒、端粒和复制起点组成。通过对天然染色体的改造或者从头构建的方法可以获得多种类型HACs。HACs可以携带大片段基因组DNA,是建立转基因动物模型的重要手段,在基因治疗方面也有着广阔的应用前景。文章从HACs的结构及各组成元件的功能、HACs的不同构建方法、HACs在转基因研究及基因治疗中的应用等方面,对HACs的最新研究进展进行了综述,同时指出了HACs研究中存在的问题,并对HACs的应用前景进行了展望。     

HMG、EGF和TGF-α对猪卵母细胞体外成熟及孤雌发育的影响

以TCM199为基础培养基,HMG(尿促性素)为激素,研究了HMG对猪卵母细胞体外成熟(IVM)和发育的影响;同时对EGF(表皮生长因子)和TGF-α(转化生长因子-α)单独或联合使用对猪卵母细胞IVM及发育的影响进行了研究,以确立较好的猪卵母细胞IVM培养体系.结果表明:(1)在猪卵母细胞IVM中分别添加0.075 IU/ml、0.150 IU/ml、0.200 IU/ml、0.300 IU/ml的HMG,其中添加0.200 IU/ml的HMG组卵母细胞的成熟率和激活后的卵裂率显著高于其它组(P<0.05);(2)添加50 ng/ml EGF组成熟率和卵裂率显著高于对照组和添加30 ng/ml、40 ng/ml、60 ng/ml组(P<0.05);(3)添加15 ng/ml TGF-α组成熟率显著高于对照组和添加5 ng/ml、40 ng/ml组(P<0.05),激活后添加15 ng/ml组卵裂率显著高于其他组(P<0.05),当TGF-α的浓度高于15 ng/ml后对卵母细胞的成熟和激活后的卵裂没有显著的提高作用(P＞0.05);(4)同时添加EGF和TGF-α组成熟率和卵裂率与对照组相比差异显著(P<0.05),但与添加50 ng/ml EGF、15 ng/ml TGF-α组相比没有明显差异(P>0.05).可见EGF和TGF-α对猪卵母细胞的IVM和激活后的卵裂没有明显的协同作用.     

表观遗传因素对哺乳动物胚胎发育的影响

哺乳动物核移植技术作为发育生物学的重要研究方法,在农业、医药、动物保护等方面具有巨大潜力.核移植的低成功率一直是其发展的瓶颈,而体细胞核在卵母细胞中的重编程效率低下是造成该瓶颈的重要诱因.DNA甲基化作为支配基因正常表达的表观遗传修饰方式,是调节基因组功能的重要手段,在胚胎正常发育过程中具有显著调节基因组功能的作用.本研究论述了DNA甲基化、基因印记、microRNA、X染色体失活等因素对哺乳动物胚胎发育中基因调控的影响.