布鲁氏菌M28强毒株O抗原聚合酶基因缺失株的构建及其毒力评价

为构建布鲁氏菌O抗原聚合酶缺失突变株,本研究以布鲁氏菌M28株为亲本株,利用同源重组方法,以编码O抗原聚合酶靶基因M28_ B0107基因ORF外侧序列作为同源臂构建重组质粒pSP-B0107-K,将其电转化至M28感受态细胞中,以卡那霉素抗性基因(Kanr)作为标记,筛选缺失突变株(M28-△B0107).M28-△B0107经过20余代传代培养,Kanr表达稳定.将M28-△B0107与M28以106 cfu剂量腹腔接种小鼠,进行体内致病性试验.结果显示,M28-△B0107感染组小鼠脾脏荷菌量显著低于亲本M28株感染组,感染6周时,前者低于后者近10倍(p＜0.05);而且M28-△B0107感染组脾脏重量也显著低于M28强毒株组(p＜0.05);小鼠腹腔巨噬细胞系(RAW264.7)感染能力试验结果表明,突变株与亲本株无明显差异(p＞0.05).     

生猪标准化示范场技术集成与推广应用

广西富来康大荣牧业有限公司创建于2009年春,经过两年的努力,生猪标准化示范场通过验收,并获得2010年国家农业部第一批生猪标准化示范场称号。今年又参加全国100家典型示范场验收,标准化生产取得显著成效。在2011年广西畜禽养殖标准化示范创建现场培训会上,作为全区现场培训示范点,培训会代表200多人到现场参观,并在培训会上作了典型经验介绍。本公司生猪标准化示范场技术集成与推广应用情况如下：     

猪传染性胃肠炎分子生物学诊断研究进展

对国内现代分子生物学理论及TGEV的核酸性质建立的核酸探针、PCR、限制性酶切片段长度多态性（RFLP）分析等检测TGEV的研究进展进行了综述。     

基于Mx启动子和荧光素酶报告基因定量检测鸡Ⅰ型干扰素生物学活性的研究

为了探索并建立快速、敏感、准确的Ⅰ型干扰素生物学活性定量分析方法,本研究克隆了鸡Mx启动子（Mxp）,并在其下游连接荧光素酶（Luciferase,luc）报告基因,构建鸡Ⅰ型干扰素活性检测质粒pMxp-luc。以pMxp-luc瞬时转染鸡胚成纤维细胞系DF-1,24 h后用鸡IFN-α/β处理细胞,结果荧光素酶基因在Mx启动子的作用下获得转录表达;荧光素酶的表达量与干扰素的抗病毒活性有着良好的线性相关性,并在干扰素处理细胞6 h后就可以检测;对鸡IFN-α和IFN-β检测的敏感性分别约为抗病毒活性定量检测方法的10和100倍。该检测系统与传统抗病毒定量检测方法相比,具有快速简便、准确敏感、便于高通量检测等优势,在禽类乃至哺乳动物干扰素生物学基础和应用研究及产业化过程中具有重要应用价值。     

布氏杆菌病概况及其研究进展

1 布氏杆菌病概况 布氏杆菌病(brucellosis)是一种全世界广泛分布的人兽共患慢性细菌传染病。布氏杆菌(Brucella)可感染人类、多种家畜和野生动物,引起相似的临床症状与病理损伤,如发热、流产与不育、慢性关节炎及神经损害等,导致巨大的经济损失和严重的公共卫生问题。家畜布氏杆菌病最常发生于羊、牛和猪。早在五十年代,布氏杆菌即为美军成功研发的第一个细菌战武器,因此也是生物反恐的一个重要潜在对象。 布氏杆菌传统上根据其宿主倾向性和危害性进行分     

表达增强绿色荧光蛋白重组水疱性口炎病毒印第安纳株的构建

通过负链RNA病毒反向遗传操作技术,成功救获了表达增强绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein,EGFP)的重组印地安纳株水疱性口炎病毒(Vesicular stomatitis virus Indiana serotype)、救获的重组病毒保持了野生型VSV高滴度生长特性,细胞连续传代10次仍保持GFP的稳定表达及生物学特性不变。本研究为VSV作为新型重组活病毒载体疫苗和肿瘤治疗载体研制及基础病毒学相关研究提供了理想的技术平台。     

重组杆状病毒表达裂谷热囊膜蛋白的研究

裂谷热（Rift valley fever，RVF）是由裂谷热病毒（RVFV）引起的烈性人兽共患传染病。囊膜糖蛋白G是病毒的主要结构蛋白，由基因组M节段编码，翻译后裂解为GN和GC，其中GN为诱导中和抗体的主要免疫原。本研究构建了分别表达RVFV囊膜蛋白G（N＋C）、GN及GC的重组杆状病毒rBac—GCN＋C、rBac-GN及rBac-GC。SDS-PAGE、Western-Blot表明分子量分别为56Ku、58Ku左右的重组GN和GC在rBac—GCN＋C、rBac-GN及rBac-GC感染sf9昆虫细胞中获得表达，并具有特异免疫反应原性。以rBac—GN、rBac—GC和rBac—G（N＋C）感染的昆虫细胞裂解物稀释后直接包被ELISA板，检测灭活RVFV免疫小鼠血清特异囊膜蛋白GN、GC特异抗体，显示出高度敏感性和特异性。结果表明，杆状病毒表达rGN、rGC和rG（N＋c）具有替代RVFV全病毒（尤其是rGN），作为非疫区安全、敏感和特异的诊断抗原的潜力，并为RvF重组亚单位疫苗的探索研究奠定了基础。     

尼帕病毒G和F蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

为制备抗尼帕病毒(NiV)G和F蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究以表达NiV G和F蛋白的真核重组表达质粒pCAGG-NiVG和pCAGG-NiVF分别免疫BALB/c小鼠,采用常规技术制备杂交瘤细胞;以表达G和F蛋白的重组牛痘病毒(rWR-NiVG、rWR-NiVF)分别感染BHK细胞,通过间接免疫荧光(IFA)筛...     

表达小反刍兽疫病毒F蛋白的重组山羊痘病毒疫苗的研究

本研究利用gpt筛选基因和eGFP报告基因纯化筛选重组小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因的重组山羊痘病毒(rGPV-PPRV-F),并经过PCR鉴定.免疫荧光和蛋白印迹试验都证实重组病毒能够感染绵羊羔羊睾丸细胞并表达PPRV F蛋白.以2×106PFU的rGPV-PPRV-F皮内注射免疫山羊3只,并于首次免疫后第28 d以相同剂量进行二次免疫.分别于一免后21 d和二免后14 d采血后分离血清进行病毒中和试验.结果表明,一免后21 d山羊痘病毒(GPV)中和抗体效价依次为1:40、≥1:80、≥1:80,PPRV中和抗体效价依次别为1:20、1:40、1:20,全部阳转;二免后14 d,GPV中和抗体效价≥1:80,PPRV中和抗体效价依次为1:20、1:80、1:40.本研究为小反刍兽疫重组山羊痘疫苗的产业化奠定了基础.     

埋地热油管道非稳态传热的环道试验

借助大型埋地工业试验环道,模拟生产管道的投产预热和停输再启动过程,开展埋地热油管道传热规律的试验研究,从蓄热量、等温线等角度对土壤温度场的建立以及停输再启动后土壤温度场的恢复时间等问题进行了关联分析。研究表明:埋地管道的预热过程,投油7 d后,管外土壤等温线形态固定,但温度值随着时间的延长逐渐上移增大;投油10 d后,等温线呈椭圆形分布于管道周围,水平方向半径为1.2 m,垂直方向半径为0.9 m;在距离管壁1.4～2.0 m的范围内,土壤温度浮动较小。对于计划停输,再启动后的前3 h,土壤蓄热量的增长速率最大,需要保持原油温度的稳定,在再启动后的前10 h内,尽量减少工况变动,以利于土壤温度场的恢复。