猪细小病毒(PPV)SD1株NS1基因的克隆与原核表达

为研究猪细小病毒（Porcine Parvovirus，PPV）NS1基因，建立快速、准确诊断猪细小病毒的方法，减少猪细小病毒造成的损失，笔者克隆了含有NS1基因的片段，并且与已登录猪细小病毒的相应序列进行比较，成功构建了原核表达重组质粒PET 30a／NS1，并在E.coli中进行了诱导表达。     

山东省分离强毒株猪伪狂犬病病毒SA株TK基因结构与进化分析

对山东省分离强毒株猪伪狂犬病病毒SA株TK基因进行了克隆和部分序列测定,并分析比较了该序列与国内外主要流行毒株伪狂犬病病毒Ea株、Min-A株、LA株、Kroea株、Kaplan株、SH株的同源性.结果表明:核苷酸序列的同源性分别为99.0%、99.1%、98.9%、99.0%、98.3%和74.4%;氨基酸序列的同源性分别为98.7%、98.4%、98.4%、98.7%、98.3%和74.8%;猪伪狂犬病毒SA株TK基因具有疱疹病毒胸苷激酶催化结构域的保守氨基酸共有的对应于这两个亚结构域的特征基序,其蛋白的二级结构由α-螺旋(45.38%)、β-折叠(14.46%)、β-转角(6.02%)和无规则卷曲(34.14%)组成;将猪伪狂犬病毒TK基因与鸡、牛、猫科、马科、人类的胸苷激酶用DNASTAR 绘制进化树进行分析,可知猪疱疹病毒Ⅰ型TK基因亲缘关系与哺乳动物的疱疹病毒较近,而与禽类的相对较远.     

猪细小病毒(PPV)SD1株NS1基因的克隆与原核表达

[目的]为建立猪细小病毒的快速诊断方法提供理论依据。[方法]根据GenBank上猪细小病毒基因组序列和原核表达质粒pET30a(+)多克隆位点序列设计1对引物,应用PCR技术扩增出猪细小病毒SD1株NS1基因全序列,对阳性重组质粒进行测序和同源性比较。构建原核表达重组质粒pET 30a/NS1,并在大肠杆菌中进行诱导表达。[结果]通过PCR扩增获得2 208 bp目的片段。所克隆NS1基因与已报道的PPV相应基因的核苷酸同源性为97.3%~99.4%,表明NS1基因具有高度保守性,但在偏3′端连续缺失12个碱基。所克隆的PPVNS1基因在原核细胞中成功表达,其表达产物主要以包涵体形式存在。[结论]SDS-PAGE检测结果表明PPVNS1蛋白的分子量为86 kD。     

基于克隆文库筛选的池设计

池设计（pooling design）是基于克隆文库筛选（clone library screening）的一种实验设计，要求从大量的克隆体中筛选出其中舍有某组特定核苷酸串的克隆体，它属于组合群试。一个池设计方案用一个二元关联矩阵（称为分离矩阵）表示，行对应于试验，列对应于克隆集合的体；考虑到生物实验存在误差，分离矩阵还需要有查错和纠错能力。利用子集或子空间之间的包含关系可以构建出分离矩阵，它的每行和每列中元素1的个数分别都一样，但试验总次数即行数明显大于信息下界。     

一株鸭大肠杆菌的分离鉴定及致病性分析

广西省某种鸭场40余日龄的鸭群发病,从病死鸭脑部分离到一株革兰阴性杆菌,经分离纯培养、革兰染色镜检、PCR分子生物学鉴定、血清型鉴定,确定是血清型为O154的鸭大肠杆菌;致病性试验显示,该分离菌对小鼠具有较强的致病性。药物敏感试验结果表明,该菌对替米考星、氧氟沙星、新霉素3种药物产生了耐药性,对头孢曲松、丁胺卡那等7种药物敏感。     

地塞米松促进伪狂犬病毒SA738株诱导牛肾细胞凋亡

为研究地塞米松能否促进PRVSA738株诱导牛肾细胞的凋亡,本试验以牛肾细胞为模型,PRVSA738做为诱导剂,并添加地塞米松,病毒增殖后,采用荧光染色、DNA梯谱的方法,观察细胞发生凋亡时的形态学和生化特征,以此确定地塞米松能否促进伪狂犬病毒SA738株诱导牛肾细胞的凋亡。结果显示,PRVSA738能诱导牛肾细胞发生凋亡,同时100μmol/L的地塞米松能促进PRVSA738株诱导牛肾细胞的凋亡。为研究PRV潜伏感染的机理提供参考。     

水稻类黄酮3''-羟化酶基因克隆及植物表达载体的构建

参考GenBank中发布的水稻品种日本晴位于10号染色体的F3’H基因序列设计特异引物,用PCR方法从水稻基因组中克隆F3’H基因片段,并将该片段克隆到pMD18-T载体进行测序和序列分析。结果表明,克隆的F3’H基因全长1 789 bp,GenBank登录号为HQ876708,该基因与日本晴基因组序列同源性为100%。分别将F3’H基因插入植物双元表达载体pPZP2Ha3(-)和pPZP2Ha3(+)中,获得F3’H基因正义和反义植物表达载体,同时转入根癌农杆菌中。该研究为利用农杆菌介导法转化F3’H基因,进一步研究F3’H基因功能奠定基础。     

β-半乳糖苷酶基因的克隆及序列分析

β-半乳糖苷酶的应用有着悠久的历史,最初在食品工业中用来降低乳糖含量以满足乳糖不耐症症状患者的需要,然而随着生物技术的发展,它越来越多地应用于生物技术领域,如基因工程、酶工程、蛋白质工程方面,并广泛应用于化学、医药等领域.     

均值差异性比较试验次数的确定方法

确定适宜的试验重复次数一直是野外试验关注的问题.利用计算机摸拟试验,从控制犯第二类错误的概率来研究两总体均值比较试验时的重复次数问题,求得在已知历史资料情况下样本容量的计算公式.建议初次试验组内重复次数不宜少于10次.表2参13